本發(fā)明涉及嗜尸性蠅類的培養(yǎng)，具體是指一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

1、死亡時(shí)間(pmi)推斷是刑事案件偵破的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，目前在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，嗜尸性蠅類對(duì)腐敗尸體的pmi推斷起著重要作用，通過研究已經(jīng)掌握了一系列嗜尸性蠅類的生長發(fā)育數(shù)據(jù)，并且已經(jīng)具備了標(biāo)準(zhǔn)的嗜尸性蠅類的收集和實(shí)驗(yàn)室傳代飼養(yǎng)方法，通過實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的嗜尸性蠅類生長發(fā)育數(shù)據(jù)對(duì)于腐敗尸體的pmi推斷起著舉足輕重的作用。

2、然而我們將上述常規(guī)實(shí)驗(yàn)室收集的嗜尸性蠅類生長發(fā)育數(shù)據(jù)應(yīng)用于pmi推斷時(shí)，發(fā)現(xiàn)其與真實(shí)死亡時(shí)間之間存在很大偏差。與此同時(shí)，多項(xiàng)研究提示實(shí)驗(yàn)室和自然環(huán)境中蠅類發(fā)育和行為差異的內(nèi)在原因是其腸道微生物的不同。研究腸道微生物對(duì)于嗜尸性蠅類的生長發(fā)育影響，通過微生物層面上可以為建立更加精確的pmi體系提供支持。然而，在常規(guī)(有菌)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下，很難通過實(shí)驗(yàn)來研究某一腸道微生物對(duì)于嗜尸性蠅類的生長發(fā)育的影響機(jī)制。

3、所以為了更好地研究腸道微生物影響嗜尸性蠅類生長發(fā)育的機(jī)制，首次構(gòu)建了一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，在該培養(yǎng)方法的培養(yǎng)過程中，嗜尸性蠅類的生長發(fā)育不會(huì)受到外界環(huán)境的微生物干擾，我們可以通過控制變量，如在培養(yǎng)過程中加入不同的抗生素或不同的腸道微生物，通過各種實(shí)驗(yàn)得到在這些變量情況下嗜尸性蠅類的生長發(fā)育參數(shù)，將這些生長發(fā)育參數(shù)與常規(guī)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下的嗜尸性蠅類進(jìn)行比較，同時(shí)進(jìn)行一系列實(shí)驗(yàn)研究，以此來探究腸道微生物對(duì)嗜尸性蠅類生長發(fā)育的影響，為構(gòu)建更加精確的pmi推斷體系提供依據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，針對(duì)上述背景技術(shù)中提出的不足，提供一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法。

2、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，它包括以下步驟：

3、步驟一：初代大頭金蠅幼蟲的處理；

4、步驟二：無菌飼料的制備；

5、步驟三：大頭金蠅無菌培養(yǎng)。

6、進(jìn)一步的，所述步驟一選取大頭金蠅剛剛產(chǎn)幼的蟲卵，先用清水對(duì)其表面沖洗3次，之后再將蟲卵放在75％消毒酒精中消毒3min，再將消毒好的蟲卵用純水沖洗3次洗去酒精，將沖洗后的蟲卵再浸泡于0.05％次氯酸鈉溶液中滅菌3min。

7、進(jìn)一步的，最后將滅菌后的蟲卵用pbs緩沖液沖洗3次。

8、進(jìn)一步的，所述步驟二取85g麩皮與15g魚粉充分混合裝于錫紙盒中密封，再將錫紙盒置于鋁盒中，蓋好盒蓋；取1000ml清水于1000ml罐頭瓶?jī)?nèi)，稍松瓶口，于高壓蒸汽滅菌鍋中以0.11mpa，121℃滅菌30min，冷卻備用。

9、進(jìn)一步的，將步驟二制備好的無菌麩皮飼料和清水移入無菌隔離器中，再使用紫外線燈管滅菌30min。

10、進(jìn)一步的，所述步驟三選擇多個(gè)直徑約為10cm、高約為8cm的圓柱狀塑料養(yǎng)蟲盒滅菌之后放入無菌隔離包中，在養(yǎng)蟲盒中將滅菌之后的無菌飼料與清水約1：2混合，制造濕潤的無菌培養(yǎng)環(huán)境，將消毒滅菌完成的1g大頭金蠅無菌蟲卵置于剛剛制備好的含有無菌飼料的其中無菌塑料養(yǎng)蟲盒中，其余飼料和塑料養(yǎng)蟲盒之后備用。

11、進(jìn)一步的，將大頭金蠅培養(yǎng)至化蛹之后，把蛹從飼料中挑取出來轉(zhuǎn)移至新的塑料養(yǎng)蟲盒中，再將塑料養(yǎng)蟲盒轉(zhuǎn)移至35cm*35cm*35cm的養(yǎng)蟲籠中，繼續(xù)飼養(yǎng)至羽化并產(chǎn)卵，完成一個(gè)培養(yǎng)周期，培養(yǎng)期間每隔一天更換一次飼料；

12、采用以上結(jié)構(gòu)后，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：(1)無菌培養(yǎng)體系下的嗜尸性蠅類不存在外界微生物的干擾，使研究者能夠更準(zhǔn)確地控制實(shí)驗(yàn)條件，從而更精確地研究嗜尸性蠅類與微生物之間的相互作用，如微生物如何影響嗜尸性蠅類的生長發(fā)育、代謝和行為等。

13、(2)通過無菌培養(yǎng)體系，可以精確操縱嗜尸性蠅類微生物組，從而闡明共生菌群如何影響宿主的多種性狀，以及不同菌群在不同階段對(duì)嗜尸性昆蟲的影響，例如宿主新陳代謝、殺蟲劑抗性、宿主免疫力等。

技術(shù)特征：

1.一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，其特征在于：它包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟一選取大頭金蠅剛剛產(chǎn)幼的蟲卵，先用清水對(duì)其表面沖洗3次，之后再將蟲卵放在75％消毒酒精中消毒3min，再將消毒好的蟲卵用純水沖洗3次洗去酒精，將沖洗后的蟲卵再浸泡于0.05％次氯酸鈉溶液中滅菌3min。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，其特征在于：最后將滅菌后的蟲卵用pbs緩沖液沖洗3次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟二取85g麩皮與15g魚粉充分混合裝于錫紙盒中密封，再將錫紙盒置于鋁盒中，蓋好盒蓋；取1000ml清水于1000ml罐頭瓶?jī)?nèi)，稍松瓶口，于高壓蒸汽滅菌鍋中以0.11mpa，121℃滅菌30min，冷卻備用。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，其特征在于：將步驟二制備好的無菌麩皮飼料和清水移入無菌隔離器中，再使用紫外線燈管滅菌30min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，其特征在于：所述步驟三選擇多個(gè)直徑約為10cm、高約為8cm的圓柱狀塑料養(yǎng)蟲盒滅菌之后放入無菌隔離包中，在養(yǎng)蟲盒中將滅菌之后的無菌飼料與清水約1：2混合，制造濕潤的無菌培養(yǎng)環(huán)境，將消毒滅菌完成的1g大頭金蠅無菌蟲卵置于剛剛制備好的含有無菌飼料的其中無菌塑料養(yǎng)蟲盒中，其余飼料和塑料養(yǎng)蟲盒之后備用。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，其特征在于：將大頭金蠅培養(yǎng)至化蛹之后，把蛹從飼料中挑取出來轉(zhuǎn)移至新的塑料養(yǎng)蟲盒中，再將塑料養(yǎng)蟲盒轉(zhuǎn)移至35cm*35cm*35cm的養(yǎng)蟲籠中，繼續(xù)飼養(yǎng)至羽化并產(chǎn)卵，完成一個(gè)培養(yǎng)周期，培養(yǎng)期間每隔一天更換一次飼料。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種嗜尸性蠅類的無菌培養(yǎng)方法，它包括以下步驟：步驟一：初代大頭金蠅幼蟲的處理；步驟二：無菌飼料的制備；步驟三：大頭金蠅無菌培養(yǎng)。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點(diǎn)在于：(1)無菌培養(yǎng)體系下的嗜尸性蠅類不存在外界微生物的干擾，使研究者能夠更準(zhǔn)確地控制實(shí)驗(yàn)條件，從而更精確地研究嗜尸性蠅類與微生物之間的相互作用，如微生物如何影響嗜尸性蠅類的生長發(fā)育、代謝和行為等；(2)通過無菌培養(yǎng)體系，可以精確操縱嗜尸性蠅類微生物組，從而闡明共生菌群如何影響宿主的多種性狀，以及不同菌群在不同階段對(duì)嗜尸性昆蟲的影響，例如宿主新陳代謝、殺蟲劑抗性、宿主免疫力等。

技術(shù)研發(fā)人員：張長全,劉佩,湯豪杰,章賢琪,郭亞東
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15