丹參組培苗培養(yǎng)基及丹參組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種丹參的組織培養(yǎng)技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002] 丹參又名赤參、逐烏、郁蟬草、奔馬草等，為唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhizaBunge)的干燥根及根莖，味苦，微寒。歸心，肝經(jīng)，具有活血通絡(luò)、祛齡止痛、 涼血消癰、清心除煩等功效，對心血管和血液系統(tǒng)作用顯著。在臨床上多用于治療胸痹心 痛，脘腹脅痛，癥瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡癰腫痛等。隨著對其 主要化學成分及藥理作用研究的深入，加大了丹參資源的開發(fā)和利用，使得丹參市場需求 量不斷擴大。但是，丹參野生資源相對較少，而傳統(tǒng)的栽培模式，又面臨著生長周期長，品質(zhì) 退化、生產(chǎn)成本相對過高等問題。
[0003] 植物組織培養(yǎng)在廣義上講是指在人工的操縱下，把植物體的一個器官、組織，單個 細胞或原生質(zhì)體從植物體取出后放在玻璃容器里并在供給豐富營養(yǎng)成分和合適的外界培 養(yǎng)條件下，使它們得以繼續(xù)生存或發(fā)展，最終形成完整植株的一種培養(yǎng)方法。組織培養(yǎng)具有 較多優(yōu)點，如：生長周期短，繁殖率高，變異少，培養(yǎng)條件可以人為控制，操作簡單，利于工廠 化生產(chǎn)和自動化控制，等等。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種丹參組培苗誘導培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及丹參組培快繁的 方法。
[0005] 為解決上述問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0006] 本發(fā)明公開了一種丹參組培苗培養(yǎng)基，包括誘導培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，所述誘 導培養(yǎng)基為：MS+6-BA0. 5-2.Omg/L+NAAO. 1-0. 5mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂 7g/L，pH值在 6· 08-6. 12 之間；所述生根培養(yǎng)基為：1/2MS+IBA1.Omg/L+KTl. 0mg/L+蔗糖 15g/L+瓊脂 7g/ L+活性炭 0· 05-0. 15%，pH值在 6· 08-6. 12 之間。
[0007] 優(yōu)選的，所述誘導培養(yǎng)基中的6-ΒΑ為1.Omg/L，ΝΑΑ為0. 5mg/L，所述生根培養(yǎng)基 中的活性炭為0.05%。
[0008] 其中，1/2MS即MS基礎(chǔ)配方的大量元素減半，其它不變。
[0009] 所述誘導培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基：1L培養(yǎng)液分裝在15個200ml的瓶中，每瓶分裝 60ml左右的培養(yǎng)液。
[0010] 本發(fā)明另外公開了一種丹參組培快繁方法，以帶腋芽的丹參莖為材料，進行丹參 組織培養(yǎng)繁殖，其步驟如下：
[0011] (1)外植體消毒處理；
[0012] (2)誘導分化培養(yǎng)：將經(jīng)過消毒處理的外植體接種到所述的誘導培養(yǎng)基中進行叢 生芽誘導培養(yǎng)；
[0013] (3)將步驟（2)培養(yǎng)得到丹參小苗的莖切成帶節(jié)的小段，并轉(zhuǎn)入所述的生根培養(yǎng) 基上進行繼代培養(yǎng)；
[0014] (4)煉苗移栽。
[0015] 優(yōu)選的，所述步驟（1)外植體消毒處理：采取當年生帶腋芽的嫩莖段為外植體，剪 去葉，留葉柄基部，用淸水不斷搖晃洗去表面附著物，在超凈工作臺中用1.5%次氯酸鈉的 溶液（加2-3滴吐溫）消毒15-20min，用無菌水沖洗2-3次，再用75%乙醇消毒2次，每次 30-60s，用無菌水洗2-3次。
[0016] 優(yōu)選的，所述步驟（2)誘導分化培養(yǎng)的條件為：光照時間為每天14小時，光照強度 為20001x，置于培養(yǎng)溫度為24-26Γ的條件下培養(yǎng)直至形成叢生芽。
[0017] 優(yōu)選的，所述步驟（3)生根培養(yǎng)的條件為：光照時間為每天12小時，光照強度為 20001x，培養(yǎng)溫度為22°C;
[0018] 優(yōu)選的，所述步驟（4)煉苗移栽：將高約5-6cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶蓋半開煉苗 2-3天，再全開瓶蓋加入適量的自來水并置于自然光照下煉苗5-7天，將試管苗從培養(yǎng)瓶中 取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由蛭石和珍珠巖按1:1配比混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。
[0019] 優(yōu)選的，所述誘導培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基在使用前均需要滅菌，將配制好的培養(yǎng)基 裝進滅菌器里，滅菌溫度為120°c，滅菌時間為30分鐘，滅菌完后，迅速儲存到無菌室。
[0020] 優(yōu)選的，誘導培養(yǎng)和生根培養(yǎng)中，每瓶均接種1個外植體，以防交叉污染。
[0021] 優(yōu)選的，移栽中，栽植株行距約為10X15cm，移栽后及時噴水，最后搭上小拱棚，澆 透水，蓋上塑料薄膜，用遮蔭網(wǎng)遮光，溫度控制在20-25Γ，成活后隨生長，盡早增加光照強 度。
[0022] 本發(fā)明另外公開了一種丹參試管苗煉苗移栽的方法，將高約5_6cm的生根試管苗 的培養(yǎng)瓶蓋半開煉苗2-3天，再全開瓶蓋加入適量的自來水并置于自然光照下煉苗5-7天， 將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由蛭石和珍珠巖按1:1配比混合成的基 質(zhì)中并定植于大田中。栽植株行距約為l〇X15cm，移栽后及時噴水，最后搭上小拱棚，澆透 水，蓋上塑料薄膜，用遮蔭網(wǎng)遮光，溫度控制在20-25Γ，成活后隨生長，盡早增加光照強度。
[0023] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明針對傳統(tǒng)丹參栽培模式存在生長周期長，品質(zhì)退 化，生產(chǎn)成本相對過高等問題。本發(fā)明以帶腋芽的丹參莖為材料，經(jīng)過外植體滅菌處理、誘 導和分化培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽等步驟建立了丹參組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系，找到了 最佳的丹參組培快繁條件，可用于大批量生產(chǎn)丹參優(yōu)質(zhì)種苗。其有益效果是生長周期短， 繁殖率高，變異少，培養(yǎng)條件可以人為控制，操作簡單，生產(chǎn)量大，為在短期內(nèi)實現(xiàn)大規(guī)模工 廠化生產(chǎn)丹參種苗提供了理論依據(jù)和實踐基礎(chǔ)，并為丹參的遺傳轉(zhuǎn)化和品種改良等奠定基 礎(chǔ)。
[0024] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
【具體實施方式】
[0025] 以下結(jié)合具體實例，對本發(fā)明進行詳細說明。
[0026] 實施例1
[0027] 丹參組培快繁方法，包括如下步驟：
[0028]步驟一，幾種MS培養(yǎng)基母液的配制。
[0029] MS100倍大量元素母液的配制，分別稱取硝酸鉀190g，硝酸銨165g，磷酸二氫鉀 17g，硫酸鎂37g，氯化|丐44g，分別加入5個1000mL燒杯中，加入適量蒸餾水，攪拌溶解，定 容成1000mL，5種大量元素母液放置冰箱備用。
[0030] MS1000倍微量元素母液的配制，分別稱取碘化鉀0. 83g，硼酸6. 2g，硫酸錳16. 9g， 硫酸鋅8. 6g，鉬酸鈉0. 25g，硫酸銅0. 025g，氯化鈷0. 025g，至1000mL燒杯中，加入適量蒸 餾水，攪拌溶解，定容成l〇〇〇mL，放置冰箱備用。
[0031] MS100倍有機母液的配制，稱取肌醇10g，甘氨酸0. 2g，鹽酸硫胺素0. 01g，鹽酸吡 哆醇0. 05g，煙酸0. 05g。在蒸餾水中依次溶解，定容成1000mL，放置冰箱備用。
[0032] MS100倍鐵鹽的配制，分別稱取乙二胺四乙酸二鈉3. 73g，硫酸亞鐵2. 78g，至 1000mL燒杯中，加入適量蒸餾水，攪拌溶解，定容成1000mL，放置冰箱備用。
[0033] 步驟二，誘導培養(yǎng)基的配制，取MS1000倍微量元素母液lmL，MS大量、MS有機、MS 鐵鹽三種母液各10mL，至1000mL燒杯中加入適量蒸餾水，加入30g鹿糖和1000μLI.Omg/ mL6-BA，1000μL0. 5mg/mLNAA，攪拌溶解，調(diào)節(jié)PH為6. 10左右，定容成1000mL混合液。稱 取瓊脂粉7g，加入1000mL混合液，加熱煮沸，分裝至15個200mL培養(yǎng)瓶中。
[0034] 步驟三，生根培養(yǎng)基的配制，分別取MS1000倍微量元素母液lmL，MS100倍大量元 素母液5mL，MS有機、MS鐵鹽母液各10mL，至1000mL燒杯中加入適量蒸餾水，加入15g蔗糖 和100(^1^1.01