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葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列的制作方法

文檔序號:400117閱讀:293來源:國知局
專利名稱:葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及植物抗病、抗逆基因鑒定及基因工程技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列。
背景技術(shù)
醛類物質(zhì)是生物體內(nèi)眾多重要生理生化代謝過程中存在的具有高度活性的分子。在高鹽、缺水、寒冷、熱刺激等環(huán)境脅迫下醛類物質(zhì)也會產(chǎn)生。雖然不同的醛類在分子長度和烷基鏈存在差異,但由于其化學(xué)活性,都會對生物體系統(tǒng)產(chǎn)生毒害作用。因此清除過多的醛對于維護生物體的功能具有重要作用。植物體中存在著很多代謝途徑能將醛類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為活性較低的分子。其中一個很重要的途徑就是在醛脫氫酶(Aldehyde dehydrogenase,ALDH)的催化下醛不可逆的氧化為相應(yīng)的羧酸。醛脫氫酶在生物體內(nèi)是以一個超級家族存在。不同的ALDH之間差異很大。ALDH基因命名委員會(AGNC)已經(jīng)建立起特別的標(biāo)準(zhǔn)來對醛脫氫酶進行分類。根據(jù)這個標(biāo)準(zhǔn),如果蛋白質(zhì)的序列與以前鑒定的序列有超過40%的相似性,那么將它們歸入一個家族;如果相似性超過60%,則將它們歸入一個亞家族;如果相似性低于40%,則重新建立一個家族。迄今為止,真核生物中的ALDHs已經(jīng)被劃分為超過M個家族。而植物中的 ALDHs 存在于 14 個家族ALDH2,ALDH3, ALDH5, ALDH6, ALDH7, ALDHlO, ALDHl 1,ALDHl2,ALDH18, ALDH19, ALDH21, ALDH22, ALDH23 和 ALDH24?;蛐酒夹g(shù)是20世紀(jì)90年代發(fā)展起來的一門新型技術(shù),其匯集了分子生物學(xué)、微電子技術(shù)、高分子化學(xué)合成技術(shù)和計算機科學(xué)技術(shù)。1991年,Mfymatrix公司運用半導(dǎo)體照相平板技術(shù),對原位合成制備的DNA芯片做了首次報道,這是世界上的第1塊基因芯片。1995年,Stanford大學(xué)Brown實驗室發(fā)明了第1塊以玻璃為載體的基因微矩陣芯片,標(biāo)志著基因芯片技術(shù)進入了廣泛的生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。目前基因芯片技術(shù)已廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥開發(fā)與研究、疾病診斷治療、農(nóng)作物良種選育及環(huán)境保護等多個領(lǐng)域。近年來,隨著植物抗逆機理研究的深入,研究植物抗逆的方法也趨于完善,基因芯片因其信息量大、操作簡單、可靠性好、重復(fù)性強以及可以反復(fù)利用等諸多特點。在植物抗逆過程中發(fā)揮了重要的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于,提供葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列。為了實現(xiàn)上述任務(wù),本發(fā)明采用如下的技術(shù)解決方案葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列,其特征在于,包括葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的編碼區(qū)序列和啟動子序列。葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的編碼區(qū)序列如下1ATGACTATTC CTAGGATCTC ATOGCTGCTC TCTCGCTCTT TCACTTCTTC TGCTTCTTCT61 GCTTTGCTTT CTTCCATAGG GAGGAATTCA TCCCGGAGGG GOGGGATCTT TAGATATAGC
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181 TTAATCAATG GACAATTTGT GGATGCCGCA ACGGGGAAAA CTTTTGAGAC ATTGGACCCC241 AGGACAGGGA ATGTGATTGC CAGTGTTGCT GAAGGTGAOG CAGAAGATGT TAATOGAGCT301 GTCTOGGCTG CTCGCAAGGC GTTTGATGAG GGACCATGGC CTAGGATGAG TCCTTATGAG361 AGATCCAAGA TACTCTTGCG TTTTGCTGAT TTGCTTGAAA AGCACAATGA TGAGATTGCA421 GCACTCGAGA CTTGGGATAA TGGGAAACCA TTTGAACAGG CTGCAAAGGC TGAAGTACCA481 TTGGTGATAC GTTTGATGCG GTACTATGCG GGTTGGGCAG ATAAGATTCA TGGTCTCAOG541 GTTCCTGCTG ATGGATTGCA TCAAGTGCAA ACCTTGCATG AACCCATTGG OGTTGCTGGA601 CAGATTATCC CCTGGAATTT CCCACTTCTC ATGTATGCTT GGAAGATTGG ACCTGCATTA661 GCATGTGGTA ACACTATOGT TCTAAAGACA GCAGAGCAGA CACCATTGTC TGCTTTATAT721 GCATOGAAGT TATTGCATGA GGCCGGGCTT CCTCCAGGTG TTCTAAATGT GGTTTCTGGT781 TATGGTCCAA CTGCTGGTGC AGCACTTGCC AGCCATATGG ATGTGGACAA GCTTGCTTTC841 ACTGGATCAA CTGCAACTGG AAAAATTGTA CTTCAATTGG CTGCAAGGAG CAATCTTAAG901 CCAGTGACTT TAGAGCTTGG AGGGAAATCC CCTTTCATTG TGTGTGAGGA TGCTAATGTA961 GATGAGGCTG TTGAGCTAGC CCACTTTGCT TTATTCTTTA ATCAGGGGCA ATGTTGTTGT1021 GCTGGCTCCC GTACATTTGT ACATGAAAGT ATATACGATG AGTTTGTAGA GAAGGCGAAA1081 GCACGTGCTT TAAGAOGCAC OGTTGGTGAT CCATTCAAGG CAGGCATTGA GCAAGGCCCC1141 CAGATTGATT CAGATCAATT TGAGAAGATC CTGAGATACA TAAGATCTGG TGTCGAAAAT1201 GGAGCCACCC TTGAAACOGG AGGTGAGAGA TTTGGCAAAG AGGGCTTCTT CATTAAGCCT1261 ACAGTTTTCT CTAATGTTCA GGACGGCATG TTGATAGCAC AGGACGAGAT ATTTGGACCA1321 GTGCAGTCCA TCCTGAAATT CAAGGACCTT GGTGAGGTGA TAAGAAGGGC AAACGCCACT1381 AGTTATGGGC TGGCCGCAGG AGTCTTTACC CAGAACTTAG ACACAGCCAA CACCTTGACC1441 OGOGCACTAA AGGTGGGCAC AGTATGGATT AACTGCTTTG ATGTGTTTGA TGCAGCGATT1501 CCTTTTGGTG GGTACAAGAT GAGTGGGCAT GGCAGAGAAA AGGGTATTTA CAGTCTTCAA1561 AACTACCTGC AAGTGAAGGC TGTTATTACT CCCTTGAAGA ACCCCGCGTG GTTATM。葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的啟動子序列如下1CCAOGCTAGG GTTATGAAAG AGGCACCTGT AATGATGTGA CACTGAAACT GGGCCACGAA61ATATGACGTG GAACTGTTGT ATAAATTGGA ATTAGCCTTT TCCCAACTCA TTCCTCCACT121TGAAGTAAGT GGGTATCTTT ATCTTCTGTA CCTGATGACC ATTAAGAAAA AGCTTTTTTT181TTATAGCCAC AGAGATTAGC AACAATTGAT ATTTGATATG AGGTGTOGGT CAAGCACGAG241GCAGCAGCTG OGTATAGTTT TTTCCATCTC ACAAGTCCTC CTTCCCTCTT TGTCTTTTTT301ATATTCAGAA GTTAATCACA CGGCACAAAA TGTTAGAAGA AGAAAAAACT GATTTGATGG361TTGTTGGCAA AATGOGTGOG TTCGCAGAAA AATGGCAAGT TGCAGCATAA AAGGAAGCCT421CCCCATTGGG TAGGCCTTAG CAACTTGTCC TOGATTATAG CACCTCCTTG ATTAAAGCTC481CTCOGCTCAC CTTTTACTTT CTACTTCCAC ATTTTCCTTC GCTATCGCOG TCTGAATGGC541GACTCTTCTT TGAATTGGCT TTTATGCCAA CAAAGOGCAT ACGTGTTAAA AAAGAAGTCA601AATTTATTAA ATCCTAACTT TAATAAATAT ATTATTTAAA AATTATTGTC TTTGACCAAT661 OGAGTATTAC TTTTTTAATA AAATAATTCT TATCTTTAGT GCTGTCTTCA GATTCTTATT721 TTCTGTTTTT GACATGCCTA TAAAAACTTA CTTTTCTAAA TTTAAATTAA CTTCAAATCA781 TGTTTTAAAT GAAGGAAACT CTTTTTGTTA CACAATCATG TCACTCTAAA AATGGCAACT
841CAATATGGATTATCCACTTACMCMTMATMGMMACTTTTATATTATATTATTTGA
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1921AACTCAGA0GGAAGCTCCTTGTATGCTTATATAAGTAGAATCACACAAGAGAAAGAGAAA1981 GAGAAGAATT GTTTGCAGTG本發(fā)明首次研究了葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因25個序列在各種病原菌侵染,干旱、高鹽、低溫、高溫等非生物脅迫和激素誘導(dǎo)條件下的表達情況,從而鑒定了在幾乎各種逆境脅迫下都上調(diào)表達的ALDH2B8基因。以該核苷酸序列為基礎(chǔ),通過挖掘葡萄基因組數(shù)據(jù)庫搜尋ALDH2B8基因的上游啟動子區(qū)域,獲得了啟動子區(qū)域21Λ的葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的啟動子序列,并在啟動子區(qū)域鑒定了抗病順式作用元件box-wl,逆境脅迫元件TC-rich repearts和冷脅迫元件LTR。表明ALDH2B8基因和其啟動子在葡萄抗病和非生物脅迫中起著重要作用。通過申請人的研究表明,本發(fā)明的葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列能把對生物體有毒性作用的醛類氧化成相應(yīng)的羧酸,對生物體抵抗病原菌侵染和非生物脅迫有重要作用??梢詫⑵咸押诒戎Z醛脫氫酶基因ALDH2B8的編碼區(qū)序列和啟動子序列結(jié)合其他抗病和抗逆基因通過基因聚合技術(shù)轉(zhuǎn)入感病的葡萄品種、蘋果、小麥、番茄、水稻、玉米、大豆或油菜等植物,來提高抗病、抗干旱、抗鹽堿和抗寒等脅迫的能力。


圖1是通過分析公共葡萄芯片數(shù)據(jù)庫ArrayExpress和PLEXdb研究的葡萄醛脫氫酶在病原菌誘導(dǎo)、非生物脅迫和激素處理等條件下的表達分析圖。圖2是葡萄醛脫氫酶基因ALDH2B8的啟動子區(qū)域的順勢元件分析圖。圖3通過分析公共葡萄芯片數(shù)據(jù)庫ArrayExpress和PLEXdb研究的葡萄醛脫氫酶基因的病原菌誘導(dǎo)表達分析圖。
圖4通過分析公共葡萄芯片數(shù)據(jù)庫ArrayExpress和PLEXdb研究的葡萄醛脫氫酶基因的非生物脅迫下表達分析圖。圖5總結(jié)葡萄醛脫氫酶基因的生物脅迫、非生物脅迫和激素處理條件下對葡萄醛脫氫酶基因具有明顯調(diào)節(jié)作用的處理。以下結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步詳細描述。
具體實施例方式本發(fā)明獲得的抗病和抗各種非生物脅迫的葡萄品種黑比諾的ALDH2B8基因的編碼區(qū)和啟動子序列的具體操作步驟如下A、以擬南芥的醛脫氫酶序列和醛脫氫酶的保守結(jié)構(gòu)域Pfam結(jié)構(gòu)域PF00171,PS00070, PS00687, K0G2450, K0G2451, K0G2453 和 K0G2456 查詢 NCBI 數(shù)據(jù)庫和葡萄基因組數(shù)據(jù)庫(http://WWW. genoscope. ens. fr),找到了 23個葡萄醛脫氫酶基因。然后根據(jù)醛脫氫酶國際命名組織(AGNC)的標(biāo)準(zhǔn)對葡萄醛脫氫酶基因進行了命名。根據(jù)這個標(biāo)準(zhǔn),如果蛋白質(zhì)的序列與以前鑒定的序列有超過40%的相似性,那么將它們歸入一個家族;如果相似性超過60%,則將它們歸入一個亞家族;如果相似性低于40%,則重新建立一個家族。葡萄的醛脫氫酶基因被歸入10個家族。B、申請人從ArrayExpress和PLEXdb數(shù)據(jù)庫下載了葡萄Affymetrix微列陣數(shù)據(jù)??偣灿?7個實驗可用于葡萄ALDH基因在各種病原菌侵染和非生物脅迫下的表達分析。圖1就是葡萄ALDH基因在各種處理下表達的Heatmap聚類分析圖。C、參見圖2,申請人鑒定了在幾乎所有病原菌侵染和非生物脅迫下都上調(diào)表達的ALDH2B8 基因。為了揭示其表達特性的機理,申請人鑒定并研究了 ALDH2B8的啟動子。從葡萄基因組數(shù)據(jù)庫中(http://WWW. genoscope. ens. fr)確定了 ALDH2B8基因的位置,然后找到了從起始密碼子開始上游21Λ的啟動子序列。φ if A 禾1J ffi PlantCARE(http://bioinformatics. psb. ugent. be/webtools/plantcare/html/)在線程序?qū)Λ@得的啟動子序列進行了順式作用元件分析,發(fā)現(xiàn)在該序列上有很多跟植物抗逆、抗病相關(guān)的順式作用元件(圖幻,例如LTR(冷脅迫誘導(dǎo)響應(yīng)元件),TC-rich repeats (防衛(wèi)和脅迫響應(yīng)元件),MBS (干旱脅迫響應(yīng)元件)和Boxil (病原菌侵染和損傷響應(yīng)元件)。另外啟動子區(qū)還發(fā)現(xiàn)了大量光誘導(dǎo)響應(yīng)元件,如Β0Χ-Ι,Β0Χ4,I-box和ACE等。這些元件表明ALDH2B8基因在病原菌侵染、干旱和低溫等逆境條件下都會被誘導(dǎo)表達,極有可能對植物的抗病、抗逆性具有重要作用。以下是申請人給出的具體實施例。實施例1 葡萄醛脫氫酶基因家族基因的克隆及序列分析表1 葡萄品種黑比諾的ALDH家族基因的統(tǒng)計分析
權(quán)利要求
1.葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列,其特征在于,包括葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的編碼區(qū)序列和啟動子序列。
2.如權(quán)利要求1所述的葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列,其特征在于,所述的葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的編碼區(qū)序列是1ATGACTATTCCTAGGATCTCATCGCTGCTCTCTCGCTCTTTCACTTCTTCTGCTTCTTCT61GCTTTGCTTTCTTCCATAGGGAGGAATTCATCCCGGAGGGGCGGGATCTTTAGATATAGC121ACTGCTGCAGTTGTTGAAGAACCAATCAATCCTTCTGTTAATGTCAATTATACTCAGCTT181TTAATCAATGGACAATTTGTGGATGCCGCAACGGGGAAAACTTTTGAGACATTGGACCCC241AGGACAGGGAATGTGATTGCCAGTGTTGCTGAAGGTGACGCAGAAGATGTTAATCGAGCT301GTCTCGGCTGCTCGCAAGGCGTTTGATGAGGGACCATGGCCTAGGATGAGTCCTTATGAG361AGATCCAAGATACTCTTGCGTTTTGCTGATTTGCTTGAAAAGCACAATGATGAGATTGCA421GCACTCGAGACTTGGGATAATGGGAAACCATTTGAACAGGCTGCAAAGGCTGAAGTACCA481TTGGTGATACGTTTGATGCGGTACTATGCGGGTTGGGCAGATAAGATTCATGGTCTCACG541GTTCCTGCTGATGGATTGCATCAAGTGCAAACCTTGCATGAACCCATTGGCGTTGCTGGA601CAGATTATCCCCTGGAATTTCCCACTTCTCATGTATGCTTGGAAGATTGGACCTGCATTA661GCATGTGGTAACACTATCGTTCTAAAGACAGCAGAGCAGACACCATTGTCTGCTTTATAT721GCATCGAAGTTATTGCATGAGGCCGGGCTTCCTCCAGGTGTTCTAAATGTGGTTTCTGGT781TATGGTCCAACTGCTGGTGCAGCACTTGCCAGCCATATGGATGTGGACAAGCTTGCTTTC841ACTGGATCAACTGCAACTGGAAAAATTGTACTTCAATTGGCTGCAAGGAGCAATCTTAAG901CCAGTGACTTTAGAGCTTGGAGGGAAATCCCCTTTCATTGTGTGTGAGGATGCTAATGTA961GATGAGGCTGTTGAGCTAGCCCACTTTGCTTTATTCTTTAATCAGGGGCAATGTTGTTGT1021GCTGGCTCCCGTACATTTGTACATGAAAGTATATACGATGAGTTTGTAGAGAAGGCGAAA1081GCACGTGCTTTAAGACGCACCGTTGGTGATCCATTCAAGGCAGGCATTGAGCAAGGCCCC1141CAGATTGATTCAGATCAATTTGAGAAGATCCTGAGATACATAAGATCTGGTGTCGAAAAT1201GGAGCCACCCTTGAAACCGGAGGTGAGAGATTTGGCAAAGAGGGCTTCTTCATTAAGCCT1261ACAGTTTTCTCTAATGTTCAGGACGGCATGTTGATAGCACAGGACGAGATATTTGGACCA1321GTGCAGTCCATCCTGAAATTCAAGGACCTTGGTGAGGTGATAAGAAGGGCAAACGCCACT1381AGTTATGGGCTGGCCGCAGGAGTCTTTACCCAGAACTTAGACACAGCCAACACCTTGACC1441CGCGCACTAAAGGTGGGCACAGTATGGATTAACTGCTTTGATGTGTTTGATGCAGCGATT1501CCTTTTGGTGGGTACAAGATGAGTGGGCATGGCAGAGAAAAGGGTATTTACAGTCTTCAA1561AACTACCTGCAAGTGAAGGCTGTTATTACTCCCTTGAAGAACCCCGCGTGGTTATAAo
3.如權(quán)利要求1所述的葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列,其特征在于,所述的葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的啟動子序列是1CCACGCTAGGGTTATGAAAGAGGCACCTGTAATGATGTGACACTGAAACTGGGCCACGAA61ATATGACGTGGAACTGTTGTATAAATTGGAATTAGCCTTTTCCCAACTCATTCCTCCACT121TGAAGTAAGTGGGTATCTTTATCTTCTGTACCTGATGACCATTAAGAAAAAGCTTTTTTT181TTATAGCCACAGAGATTAGCAACAATTGATATTTGATATGAGGTGTCGGTCAAGCACGAG241GCAGCAGCTGCGTATAGTTTTTTCCATCTCACAAGTCCTCCTTCCCTCTTTGTCTTTTTT301ATATTCAGAAGTTAATCACACGGCACAAAATGTTAGAAGAAGAAAAAACTGATTTGATGG361TTGTTGGCAAAATGCGTGCGTTCGCAGAAAAATGGCAAGTTGCAGCATAAAAGGAAGCCT421CCCCATTGGGTAGGCCTTAGCAACTTGTCCTCGATTATAGCACCTCCTTGATTAAAGCTC481CTCCGCTCACCTTTTACTTTCTACTTCCACATTTTCCTTCGCTATCGCCGTCTGAATGGC541GACTCTTCTTTGAATTGGCTTTTATGCCAACAAAGCGCATACGTGTTAAAAAAGAAGTCA601AATTTATTAAATCCTAACTTTAATAAATATATTATTTAAAAATTATTGTCTTTGACCAAT661CGAGTATTACTTTTTTAATAAAATAATTCTTATCTTTAGTGCTGTCTTCAGATTCTTATT721TTCTGTTTTTGACATGCCTATAAAAACTTACTTTTCTAAATTTAAATTAACTTCAAATCA781TGTTTTAAATGAAGGAAACTCTTTTTGTTACACAATCATGTCACTCTAAAAATGGCAACT841CAATATGGATTATCCACTTACAACAATAAATAAGAAAAACTTTTATATTATATTATTTGA901ATATGATTACACGTGATTATATTGAGATGCCAATGAGACAGACTCACATCACTTACTTTC961ATTCAAATTTACATCAATTCTCATTCATTGTAACAAAAAAAATTAAACTATGGAATGAAC1021CCTTTATTTTATTTATTTTTAAAATATTAAATTCTATTAAAAATAAATATAATTTATTAT1081TAAATAAATATCATATATATTTATAATTTATTTTTATAAAAAATCCTATTTTGTATATAC1141ATTTAAAAAGTTAATAAAAAATCAATTAAAATAAATTTTCATTTGATATTATATATAATT1201TAGGTGGACAAGGTAAGAAAAAGTCATATCCAAACCTACCCGAAACTTATCCTAAATTTT1261AAAAGAATTTTCAAATTCATCCCAAACATGTTTATGTCCTTAAAAATTCATATCATTAAA1321CATATTTGGAAAAAAGGTTCAATATTGAATCTTTTCATATTTAATTTTTGATTTTTTTAA1381ATATAATGTTTTGATTCTTATTTAACAAAAGAAATAAACATTAAAGACTAAAAAATAATT1441GATGAATTTTAAAAAATAAAAATTAATACTTGAAAAAACTAAAAAACAAATTATTTTTTT1501TTTTGAAAGTTAGACAAAATGATGAATGAAGAAATTAGTTAAAATGAGAATAGGGATGGC1561AAATCACATTTTTAATATAAATTATTATTTAAAAAAAAAAGAAATAAAAAGTATATCCAA1621TCAATCCATTCGTGTTTTCCAAATTTGCATCCAAAAATCTCCACGAATCTCGTGCTGTCG1681ACATCTCTAGTGTGGATGACATCGCCATCATAACTTGAAAAGGAAAAAAAATACTATTAT1741TTTATTGATCGGGATAGGATTAGAATAAATAATACAGCCAGGTTGGAAAATGAATCCACA1801GTAGGAGGGGAAAAACGGATGATCCGTCGGGAAGTAGGTGGTGAATGCGTTTTCCTCTCT1861ATCGTTTTTTCAAACCGGAATGCTGAGGTGGCAGGTCAAGAGAGGGAATTCATATTCTGA1921AACTCAGACGGAAGCTCCTTGTATGCTTATATAAGTAGAATCACACAAGAGAAAGAGAAA1981GAGAAGAATTGTTTGCAGTGt)
全文摘要
本發(fā)明涉及葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列,包括葡萄黑比諾醛脫氫酶基因ALDH2B8的編碼區(qū)序列和啟動子序列。通過申請人的研究表明,該葡萄品種黑比諾抗病、抗逆醛脫氫酶基因序列能把對生物體有毒性作用的醛類氧化成相應(yīng)的羧酸,對生物體抵抗病原菌侵染和非生物脅迫有重要作用??梢詫⑵咸押诒戎Z醛脫氫酶基因ALDH2B8的編碼區(qū)序列和啟動子序列結(jié)合其他抗病和抗逆基因通過基因聚合技術(shù)轉(zhuǎn)入感病的葡萄品種、蘋果、小麥、番茄、水稻、玉米、大豆或油菜等植物,來提高抗病、抗干旱、抗鹽堿和抗寒等脅迫的能力。
文檔編號C12N15/53GK102559712SQ201110368919
公開日2012年7月11日 申請日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者張玉成, 王西平 申請人:西北農(nóng)林科技大學(xué)
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