專利名稱：：一種保養(yǎng)液以及一種血小板保存液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及血液保存領(lǐng)域，具體涉及一種能大部分替代血漿保存濃縮血小板的血小板保存液。
背景技術(shù)：
：隨著我國醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步，每年能夠提供的血小板量供不應(yīng)求，且需求量呈逐年增長的趨勢，北京市血小板年需求增長率為10%。北京市有五十多家三甲以上醫(yī)院，涉及輸注血小板的相關(guān)科室大約有數(shù)百個，目前臨床上在室溫下保存血小板一般均使用血槳，22。C保存期限為5天，過了保存期的血小板由于功能喪失、感染細(xì)菌的可能性大增，往往被扔棄，造成浪費；另一方面，血漿保存后的血小板的回收率和活性都有所降低，也會造成已有血小板的浪費。至于用于保存血小板的血漿，也存在供應(yīng)不足的問題。目前國內(nèi)尚無商業(yè)化的血小板保存液，國外目前認(rèn)為PASII，PASIII，PASIIIM，T-sol是效果較好的血小板保養(yǎng)液，以乙酸鹽作為血小板作用底物為血小板代謝提供能量，它們可以較好地維持血小板的形態(tài)，保持血小板的活性和功能。但這些保養(yǎng)液不能為血小板代謝提供更充足的能量，致使血小板的活性不甚理想，回收率仍有降低。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種保存濃縮血小板的保存液，以延長血小板22°C條件下的保存時間，提高保存后血小板的回收率和活性，減少輸血過程中不良反應(yīng)的發(fā)生機(jī)率。本發(fā)明另一目的在于提供用于濃縮血小板保存中的保養(yǎng)液，通過該保養(yǎng)液與血漿的配合使用形成濃縮血小板的保存液來達(dá)到好的保存效果。本發(fā)明提供的血小板保存液，是由保養(yǎng)液和血漿混合而成，其中血漿占總體積的2030%。保養(yǎng)液為pH為7.27.3的水溶液，其中含有35%葡萄糖，24%乙酸鈉，24%枸櫞酸鈉，45%磷酸二氫鈉，35%氯化鈉，0.30.5%氯化鉀和0.20.4%氯化鎂。這里，代表"g/L"。優(yōu)化的保養(yǎng)液中含有4%葡萄糖，2.5%乙酸鈉，3.0%枸櫞酸鈉，4.5%磷酸二氫鈉，4%氯化鈉，0.4%氯化鉀和0.3%氯化鎂，溶液pH為7.2。這里，"％"代表"g/L"。采用本發(fā)明提供的血小板保存液，其中保養(yǎng)液中組合使用了葡萄糖和乙酸鹽兩種血小板作用底物，可以為血小板代謝提供充足的能量，同時降低血小板代謝時乳酸的形成，與單純血漿保存血小板比較，有著更明顯的保持血小板的活性和功能的作用。比較單一乙酸鹽組分的保存液，具有更好的細(xì)胞活性和較高的回收率。采用本發(fā)明提供的血小板保存液，可以延長手工分離血小板的保存時間，減少資源浪費。同時，可以緩解血漿的供應(yīng)不足，具有良好的臨床應(yīng)用前景。另外，隨著2008年北京奧運(yùn)會的即將到來，奧運(yùn)會的安全保障工作也成為政府工作的一個重點，延長血小板的保存時間，進(jìn)行足夠的血液儲備以應(yīng)對將來大規(guī)模的突發(fā)事件具有重要的意義。具體實施例方式本發(fā)明的血小板保存液由保養(yǎng)液和血漿混合而成，其中保養(yǎng)液為pH為7.27.3的水溶液，其中含有35%葡萄糖，24%乙酸鈉，24%枸櫞酸鈉，45%磷酸二氫鈉，35%氯化鈉，0.30.5%氯化鉀和0.20.4%氯化鎂。這里，表示溶質(zhì)在保養(yǎng)液中的濃度，單位為g/L。保養(yǎng)液中各組分的功能如下葡萄糖血小板代謝底物，為血小板代謝提供能量；乙酸鹽血小板代謝底物，降低血小板新陳代謝時產(chǎn)生的乳酸；枸櫞酸鹽抗凝，減少乳酸產(chǎn)生；磷酸鹽緩沖物，穩(wěn)定保養(yǎng)液的pH;鈉、鎂離子減少葡萄糖消耗，降低乳酸的形成，延長保存時間，穩(wěn)定血小板膜。將以上各組分分別按下表實施例顯示的配比取量，混合均勻后用醫(yī)用水溶解再定容至1000ml，就得到本發(fā)明中的保養(yǎng)液。<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>將上述保養(yǎng)液與血漿混合即獲得本發(fā)明的血小板保存液，其中加入的血漿為血小板保存液總體積的2030%。血漿能為血小板提供一個更好的緩沖環(huán)境，對保持血小板的活性非常必要。實驗驗證，用100%血小板保養(yǎng)液保存血小板72h后血小板即無活性，所以本發(fā)明的血小板保存液中仍需有一定比例的血漿存在。本發(fā)明血小板保存液功效驗證1、樣品的準(zhǔn)備濃縮血小板(樣品中自帶血漿)平均分配到兩個血小板保存袋中。(1)其中一袋濃縮血小板放入22'C搖床中以60/min頻率振蕩保存，作為對照組(血漿保存組)。(2)第二袋濃縮血小板以4280g/min離心5min，分離血小板與血漿。室溫?zé)o菌情況下輕輕擠出第二袋中70%血漿，同時緩慢加入22'C的相同體積的本發(fā)明實施例的血小板保養(yǎng)液，加入的同時不停振蕩血小板保存袋，使血小板重懸于保養(yǎng)液與血漿的混合液中；把制作好的樣本放入搖床中22。C情況下以60/min頻率振蕩保存，作為實驗組(實驗組編號與實施例編號對應(yīng))。(3)比較組配制比較保養(yǎng)液(按PASIIIM配方)，其中含2.5%乙酸鈉，3.0%枸櫞酸鈉，4.5%磷酸二氫鈉，4%氯化鈉，0.4%氯化鉀和0.3%氯化鎂；其余操作與(2)相同，得到不含葡萄糖的比較組(缺葡萄糖保存組)。這里"X"代表"g/L"。2、體外實驗在不同保存時間點測定兩組血小板在ADP、凝血酶誘導(dǎo)下的最大聚集率和pH。實驗結(jié)果參見表1至表4。表l不同保存時間(d)血小板回收率(100%)(n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>血小板回收率是體外評價血小板功能的一個基礎(chǔ)參數(shù)，反應(yīng)血小板在保存期間形態(tài)的完整的比例。從表1中可以看出，實驗組1~4的5天回收率基本穩(wěn)定在90%以上，與血漿保存組及缺葡萄糖保存組相比對血小板的形態(tài)有著更好的保護(hù)作用，而所有各組5天血小板回收率都超過80%，與文獻(xiàn)報道的5天回收率超過70%結(jié)果相符合。表2不同保存時間(d)保存液體的pH(n=4)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>pH的穩(wěn)定對于血小板是非常重要的，當(dāng)pH降到6.8以下時，血小板的活性就逐步喪失，包括腺嘌呤核苷酸濃度的下降，乳酸生成的下降和血小板的分解等，從表2中可以看出，實驗組在保存5天的條件下pH基本穩(wěn)定在7.3左右，不僅可以提供一個良好的保存血小板的環(huán)境，而且有利于血小板更長時間的保存，而血漿保存組和缺葡萄糖保存組的pH在第五天的時候都有一個明顯的下降，不利于血小板的保存。表3不同保存時間(d)ADP誘導(dǎo)血小板的聚集率(％)(n=4)ADP誘導(dǎo)血小板的聚集率(％)0dId3d5d血漿保存組23.3±9.320.0±7.315.8±2.614.9±3.2實驗組230.8±2.718.4±1.715.8±1.314.1±2.0缺葡萄糖保存組25.5±7.818.9±9.212.3±5.610.4±1.5表4不同保存時間(d)凝血酶誘導(dǎo)血小板的聚集率(％)(n=4)凝血酶誘導(dǎo)血小板的聚集率(％)0dld3d5d血漿保存組99.9±4.575.9±9.162.9±5.761.3±4.5實驗組298.7±1.094.5±1.890.4±10.789.7±5.5缺葡萄糖保存組99.9±080.0±8.873.8±3.565.8±6.9促聚劑體外誘導(dǎo)血小板聚集試驗可以反應(yīng)血小板在體外的聚集功能，其中ADP為血小板的弱促聚劑，凝血酶為血小板的強(qiáng)促聚劑。從表3可以看出，實驗組2在實驗第0天聚集效果最好，隨后的三個時間點實驗組與血漿組差別不大，而比缺葡萄糖對照組的聚集率要好。表4中，保存0天時三組聚集率都高于98%，隨后幾天中血漿保存組和確葡萄糖對照組血小板聚集率不斷下降到60%左右，而實驗組2的血小板聚集率仍然維持在90%，顯示出良好的保存血小板功能的作用。3、體內(nèi)實驗-研究保存后的血小板注入免疫缺陷小鼠體內(nèi)后在小鼠體內(nèi)的存活時間將免疫缺陷小鼠(購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物中心)隨機(jī)分組，每組3只，將分別在22°。保存05天的對照組和實驗組血小板lml從尾靜脈輸入小鼠，按表5的檢測時間檢査各組血小板在小鼠體內(nèi)的存活情況并計算血小板存活率。實驗結(jié)果參見表5。表5不同保存時間(d)在小鼠體內(nèi)血小板的存活率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1組為血漿保存組，2組為保養(yǎng)液保存組。從表5可以看出，每一個保存時間點的檢測，血小板保養(yǎng)液保存組血小板在小鼠體內(nèi)的存活率都要比血漿保存組要高，第0天第2min保養(yǎng)液保存血小板存活率高達(dá)19.2%，而血漿保存組只有7.95%。保存3天和5天后，血小板保養(yǎng)液保存組240min血小板存活率仍然有5.37%與0.09%，而血漿保存組血小板存活率幾乎為0。本實驗表明血小板保養(yǎng)液可以更好的保存血小板的形態(tài)，維持膜的穩(wěn)定性使其能夠更多地避開由于血小板膜破碎以及血小板膜表面蛋白激活表達(dá)引起的血小板體內(nèi)的清除。以上實施例和實驗驗證了本發(fā)明提供的血小板保存液，可以為血小板代謝提供充足的能量，同時降低血小板代謝時乳酸的形成，與單純血漿保存血小板比較，有著更明顯的保持血小板的活性和功能的作用，與缺失葡萄糖的保存液比較，也具有更好的細(xì)胞活性和較高的回收率。本發(fā)明提供的保養(yǎng)液不僅能夠用于血小板的保存方面，其進(jìn)一步意義還在于可以大部分替代珍貴的血漿資源，實驗結(jié)果也驗證了，保養(yǎng)液可以替代7080%的血漿使用，這樣可以大大緩解血漿的供應(yīng)不足，提示了本發(fā)明的應(yīng)用具有廣闊前景。權(quán)利要求1、一種保養(yǎng)液，為pH7.2～7.3的水溶液，其中各組分在水溶液中濃度為3～5％(g/L)葡萄糖，2～4％(g/L)乙酸鈉，2～4％(g/L)枸櫞酸鈉，4～5％(g/L)磷酸二氫鈉，3～5％(g/L)氯化鈉，0.3～0.5％(g/L)氯化鉀和0.2～0.4％(g/L)氯化鎂。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的保養(yǎng)液，其特征在于，為pH7.2的水溶液，其中各組分在水溶液中濃度為4%(g/L)葡萄糖，2.5%(g/L)乙酸鈉，3.0%(g/L)枸櫞酸鈉，4.5%(g/L)磷酸二氫鈉，4%(g/L)氯化鈉，0.4%(g/L)氯化鉀和O.3%(g/L)氯化鎂。3、一種血小板保存液，其特征在于，由權(quán)利要求1或2所述保養(yǎng)液與血槳混合而成，其中血漿占總體積的2030%。全文摘要本發(fā)明提供一種保存濃縮血小板的保存液，是由保養(yǎng)液和血漿混合而成，其中血漿占總體積的20～30％；所述保養(yǎng)液為pH為7.2～7.3的水溶液，其中含有3～5％葡萄糖，2～4％乙酸鈉，2～4％枸櫞酸鈉，4～5％磷酸二氫鈉，3～5％氯化鈉，0.3～0.5％氯化鉀和0.2～0.4％氯化鎂。采用本發(fā)明提供的血小板保存液，可以延長血小板22℃條件下的保存時間，提高保存后血小板的回收率和活性，減少輸血過程中不良反應(yīng)的發(fā)生機(jī)率，并可以緩解血漿的供應(yīng)不足，具有良好的臨床應(yīng)用前景。文檔編號A61K35/14GK101181302SQ200710178358公開日2008年5月21日申請日期2007年11月29日優(yōu)先權(quán)日2007年11月29日發(fā)明者安劉,劉敏霞,扈文博,權(quán)國波,艷王,王捷熙,永郭,穎韓申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所