專利名稱：一種治療股骨頭壞死的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療股骨頭壞死的藥物。

背景技術(shù)：
股骨頭壞死全稱股骨頭無菌性壞死，或股骨頭缺血性壞死，由于多種原因?qū)е碌墓晒穷^局部血運(yùn)不良，從而引起骨細(xì)胞進(jìn)一步缺血、壞死、骨小梁斷裂、股骨頭塌陷的一種病變，是臨床常見的關(guān)節(jié)疾病之一。股骨頭壞死，被公認(rèn)為疑難病和慢性病，一旦延誤治療及治療無效，會導(dǎo)致殘疾直至癱瘓，令廣大患者感到非?？膳?，目前尚無可靠藥物治療。在西方醫(yī)學(xué)上，股骨頭壞死素有“十病九癱”和“不死人的癌癥”之稱。自1888年世界醫(yī)學(xué)界首次認(rèn)識股骨頭壞死這一疾病至今，股骨頭壞死已由少見病轉(zhuǎn)變?yōu)槎喟l(fā)病、常見病。尤其是激素的問世及其廣泛應(yīng)用以來，股骨頭壞死的發(fā)病率逐漸上升。股骨頭缺血性壞死是一種漸進(jìn)性疾病，骨組織由缺血到壞死。缺血可以改善，壞死則是不可逆性病理改變。中晚期只能手術(shù)治療為主，同時(shí)必然留下不同程度的功能障礙。非手術(shù)治療的目的，就在于打破骨內(nèi)瘀滯的惡性循環(huán)，使骨缺血過程得以制止，保護(hù)局部血供，重建股骨頭血運(yùn)，促進(jìn)股骨頭的修復(fù)，防止股骨頭的塌陷。目前為止，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)非手術(shù)治療方法有減輕負(fù)重、擴(kuò)張血管、消炎鎮(zhèn)痛以及一些電磁療、體外震波等理療方法。其效果大多不理想，有的尚在探索中。
近年來通過對股骨頭壞死的深入研究，認(rèn)為其屬于祖國醫(yī)學(xué)的“骨蝕”證范疇，病機(jī)多為筋脈瘀滯、肝腎虧損所致。由于筋脈瘀滯，血絡(luò)不暢，不能養(yǎng)血榮筋，筋脈失養(yǎng)，關(guān)節(jié)僵硬活動受限，或則跛行；又由于瘀血阻滯，加之肝腎虧損，不能主骨、生髓，故關(guān)節(jié)膣澀疼痛。與西醫(yī)認(rèn)為股骨頭壞死為骨局部缺血、缺氧所致，有共通之處。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種療效顯著、藥理作用明顯、毒副作用較低、服用方便、適應(yīng)性廣的治療股骨頭壞死和骨折的藥物。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的 它由以下原料制成，其重量比例份數(shù)為丹參8～90份、三七7～80份、續(xù)斷7～80份、牛膝7～80份、黃芪6～70份、延胡索5～60份、兩面針4～50份、制川烏4～50份、煅自然銅1～10份。
本發(fā)明可制備成藥劑學(xué)上允許的劑型，包括顆粒劑、片劑(包括素片、糖衣片、薄膜衣片、咀嚼片、分散片、泡騰片、腸溶片、速釋片、緩釋片、控釋片)、丸劑(含蜜丸、水丸、濃縮丸)、滴丸、膠囊、散劑。
本發(fā)明的制備工藝方法 取三七15％、煅自然銅粉碎成細(xì)粉；續(xù)斷、黃芪、牛膝加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過，濾液合并，濃縮成稠膏，加入乙醇沉淀，濾過，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；其余磨粉，用70％乙醇進(jìn)行滲漉，收集漉液，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；與上述干浸膏合并，制成顆粒。
將顆粒與上述細(xì)粉混合，加入硬脂酸鎂混合壓片，包薄膜衣，得片劑。
將顆粒與上述細(xì)粉混合，加入硬脂酸鎂混合，裝入膠囊，得膠囊劑。
將顆粒與上述細(xì)粉混合，泛制成丸或壓制成丸，干燥，得丸劑。
本發(fā)明提供的治療股骨頭壞死的藥物，用于治療股骨頭壞死疾病以及在骨折的藥物中應(yīng)用。
本發(fā)明以片劑為例，進(jìn)行了藥效學(xué)試驗(yàn)，其藥理作用明顯。見藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果。
本發(fā)明以片劑為例，進(jìn)行了毒理學(xué)試驗(yàn)，其毒性較低。見毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果。
本發(fā)明以片劑為例，進(jìn)行了臨床試驗(yàn)，本發(fā)明對早、中期股骨頭壞死51例，治療6個月，總有效率為95.63％。見臨床試驗(yàn)結(jié)果。
本發(fā)明組成的原料組分能提高成骨細(xì)胞的活性和數(shù)量、促進(jìn)基質(zhì)鈣化、促進(jìn)骨痂生長、加快骨痂形成、消炎鎮(zhèn)痛等藥效作用。見原料組分對股骨頭壞死的藥理作用。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有療效顯著、藥理作用明顯、毒副作用較低、服用方便、價(jià)格適中等特點(diǎn)，具有活血化瘀、行氣止痛、補(bǔ)腎生骨，用于股骨頭壞死病癥和骨折。
藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果 1.1對家兔實(shí)驗(yàn)性骨折的影響[1、2] 選用新西蘭種家兔72只，體重1.8～2.2kg，雌雄兼用。靜脈注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉后，在無菌條件下，使用電動牙機(jī)切割造成雙側(cè)橈骨中段3mm缺損的骨折模型，術(shù)畢縫合傷口，不包扎，不固定，術(shù)后連續(xù)5天肌肉注射青霉素40萬u/只，防止感染。
造模后將動物隨機(jī)均分為5組①模型對照組；②中藥陽性對照組；③本發(fā)明高劑量組；④本發(fā)明片低劑量組。術(shù)后第二天開始給藥，每天1次，分別于給藥后第14天、21天、28天、35天，隨機(jī)從各組取4只家兔，麻醉后，在同樣條件下拍片觀察骨折修復(fù)情況；截取雙側(cè)橈骨，其長度包括骨折上、下端2cm的正常骨質(zhì)，用10％福爾馬林溶液固定1周，作組織學(xué)切片(縱切)，HE染色，光鏡下觀察骨痂變化。
觀察指標(biāo)與結(jié)果 ①肉眼觀察藥后14天，各組家兔骨折斷端呈捶指狀膨大，各組均有3～5例家兔骨折斷端形成潰瘍；藥后21天，中藥陽性對照組和高劑量組家兔骨折斷端膨大明顯，潰瘍數(shù)減少；藥后28天，空白組折斷端膨大程度小于其它組；藥后35天，中藥陽性對照組及高劑量組折斷端膨大程度略大于其它組，除空白組有2例潰瘍尚未完全愈合外，其它各組基本愈合。
②X線片觀察分析，由骨科醫(yī)生對X片進(jìn)行分析與評分，評分方法“+”骨折斷端邊緣趣向模糊，骨膜輕度反應(yīng)，無骨痂可見；“++”斷端邊緣模糊，骨痂反應(yīng)淺淡，骨痂少量，密度較淡，邊緣不整齊；“+++”斷端邊緣仍可見，但接近消失，骨膜反應(yīng)較深，骨痂量增多，但尚未填滿缺損，密度增深，邊緣較輕；“++++”斷端邊緣完全消失，骨膜反應(yīng)近似骨影，骨痂填滿缺損，與骨皮質(zhì)密度相同并相互連接。評分結(jié)果按等級指數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，見表1-1-1。
表1-1-1本發(fā)明對家兔骨折愈合的X線觀察(n＝8)
③組織形態(tài)學(xué)觀察采用半定量骨痂記分法對組織學(xué)切片中的四種骨痂(內(nèi)骨痂、外骨痂、橋梁骨痂、聯(lián)接骨痂)內(nèi)所見到的各類組織分別記分，其中血腫“1”分，成纖維細(xì)胞“2分”，軟骨細(xì)胞和骨樣組織“3”分，小骨梁“4”分，板層骨和髓腔貫通“5”分，將所得分值相加，再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見表1-1-2。
表1-1-2本發(fā)明對家兔骨折模型骨痂組織學(xué)的影響(x±s，n＝8)
與空白對照組比較*P＜0.05 1.2對大鼠骨折愈合的影響[3] 選用Wistar大鼠120只，體重200～250g，雌雄兼用。腹腔注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉，在無菌條件下手術(shù)，用電動牙機(jī)切割造成右下肢脛骨中段2mm寬骨缺損的骨折模型，術(shù)畢縫合傷口，不包扎、不固定。術(shù)后連續(xù)3天肌肉注射青霉素40萬u/只，防止感染。
術(shù)后第二天隨機(jī)分組①模型對照組；②中藥陽性對照組；③本發(fā)明片高劑量組；④本發(fā)明片中劑量組；⑤本發(fā)明片低劑量組。另設(shè)一組正常對照組。
分組后開始給藥，分別于給藥后第14天、21天、28天、35天，隨機(jī)從各組取5只大鼠，取血分離血清，測定血清中鈣、磷水平及血清堿性磷酸酶(ALP)含量；以原骨折處和缺損處為中心取出脛骨標(biāo)本約10mm，用10％福爾馬林溶液固定1周，作組織學(xué)切片(縱切)，HE染色，光鏡下觀察骨痂變化。觀察指標(biāo)與結(jié)果 ①測定血清中鈣、磷水平及血清堿性磷酸酶(ALP)含量，結(jié)果見表1-2-1、1-2-2、1-2-3、1-2-4。
②組織學(xué)檢查分析骨痂變化情況(評分方法同14.1)，結(jié)果見表1-2-5。
表1-2-1藥后14天大鼠血清中鈣、磷水平及ALP含量(x±s，n＝5)
與正常對照組比較**P＜0.01 表1-2-2藥后21天大鼠血清中鈣、磷水平及ALP含量(x±s，n＝5)
與空白對照組比較*P＜0.05 表1-2-3藥后28天大鼠血清中鈣、磷水平及ALP含量(x±s，n＝5)
與空白對照組比較*P＜0.05 表1-2-4藥后35天大鼠血清中鈣、磷水平及ALP含量(x±s，n＝5)
與空白對照組比較*P＜0.05 表1-2-5本發(fā)明對大鼠骨折模型骨痂組織學(xué)的影響(x±s，n＝5)
與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01 1.3對激素性股骨頭缺血性壞死的影響[4、5] 選取成年健康三黃雞72只，體重1.75～2.00kg。隨機(jī)分為①正常對照組；②模型對照組；③中藥陽性對照組；④本發(fā)明片高劑量組；⑤本發(fā)明片中劑量組；⑥本發(fā)明片低劑量組。除正常對照組外其余各組于第1、3周靜脈注射馬血清10ml/kg，共2次，同時(shí)胸肌注射地塞米松1.5mg/kg，1次/周，共6周。正常對照組于同時(shí)間注射等量生理鹽水。造模成功后，各組開始給藥，連續(xù)6周，每天1次。模型組和正常對照組每日灌服等量生理鹽水。
觀察指標(biāo)與結(jié)果 ①給藥結(jié)束后(造模12周后)，禁食12h。取靜脈抗凝血進(jìn)行血液流變學(xué)檢查，結(jié)果見表1-3-1、表1-3-2。
表1-3-1本發(fā)明對三黃雞激素性股骨頭壞死血液流變學(xué)的影響(x±s)
與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01，與模型對照組比較△P＜0.05 表1-3-2本發(fā)明對三黃雞激素性股骨頭壞死血液流變學(xué)的影響(x±s)
與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01，與模型對照組比較△P＜0.05 ②處死動物，將右側(cè)股骨頭正中冠狀面劈開，10％中性甲醛固定，脫鈣、脫水，HE染色，作組織學(xué)檢查。組織學(xué)檢查結(jié)果顯示模型組病理改變最重，骨小梁間可見較多灶性炎細(xì)胞浸潤，血管明顯充血，血管數(shù)目增多，部分骨小梁嗜堿性強(qiáng)，呈明顯退行性改變。骨松質(zhì)較豐富，呈海綿狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)充滿大量紅細(xì)胞和脂肪滴。中藥陽性對照組及高劑量組改變較輕，干骺端骨小梁較多，血管豐富，骨小梁間有少量分散的灶性炎細(xì)胞浸潤，小部分骨小梁呈退行性改變。骨松質(zhì)較豐富，呈海綿狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)充滿大量紅細(xì)胞和脂肪滴。
1.4對液氮致家兔股骨頭缺血壞死的影響[6、7] 選用新西蘭種家兔60只，體重1.8～2.2kg，雌雄兼用。靜脈注射戊巴比妥鈉30mg/kg麻醉后，在無菌條件下，于左髖關(guān)節(jié)前外側(cè)切開皮膚、分離皮下組織、深筋膜，暴露大轉(zhuǎn)子，順大轉(zhuǎn)子前內(nèi)側(cè)分離組織直達(dá)髖關(guān)節(jié)囊，“T”型切開髖關(guān)節(jié)囊，脫出股骨頭，用相當(dāng)大小的紗布團(tuán)蘸上液氮，立即冷凍股骨頭冠狀面，持續(xù)1min，造成股骨頭壞死，術(shù)畢將股骨頭復(fù)位，分層縫合。術(shù)后連續(xù)5天肌肉注射青霉素40萬u/只，防止感染。
造模后將動物隨機(jī)均分為5組①模型對照組；②中藥陽性對照組；③本發(fā)明片高劑量組；④本發(fā)明片低劑量組。術(shù)后第二天各組開始給藥，每天1次，分別于給藥后第20天、30天、40天，隨機(jī)從各組取4只家兔，麻醉拍攝髖部X片，處死后取出股骨頭標(biāo)本，以10％福爾馬林溶液固定1周，作組織學(xué)切片(縱切)，HE染色，光鏡下觀察，并與對側(cè)股骨頭作比較。
觀察指標(biāo)與結(jié)果 ①X線片檢查給藥后第20天X線片，模型組動物股骨頭密度均無明顯變化，高劑量組和中藥陽性對照組股骨頭密度略有升高。第30天及40天，模型組大體標(biāo)本可見股骨頭冠狀面出現(xiàn)皺縮，且易于鑿切，X線片觀察可現(xiàn)動物股骨頭碎裂、溶解或髖關(guān)節(jié)脫位，中藥陽性對照組及高劑量組略好于其它組，股骨頭密度稍高，未見明顯壞死，結(jié)果見

圖1～圖9。
②組織學(xué)檢查給藥后第20天，模型組多個股骨頭骨組織結(jié)構(gòu)紊亂，骨總量較少；干骺端骨骺板被破壞，骨骺線消失，骨母細(xì)胞消失，大量炎癥細(xì)胞浸潤；骨干部分，骨膜增厚，骨膜下骨小梁稀疏細(xì)少；骨髓腔中充滿大量炎癥細(xì)胞和大量蛋白性液體；干骺端軟骨骨膜粗糙。高劑量組介于模型組和中藥陽性對照組之間，部分骨結(jié)構(gòu)紊亂，新生骨與壞死骨同在；干骺端可見骨骺板中間斷開，斷開處由增生機(jī)化的結(jié)締組織填充；骨骺線附近的骨小梁形成略多；骨干部分骨膜增厚，骨膜下軟骨細(xì)胞增生并逐漸向骨組織轉(zhuǎn)化；骨髓腔中出現(xiàn)少量造血細(xì)胞、脂滴和少量巨噬細(xì)胞；干骺端軟骨骨膜尚好；中藥陽性對照組病理改變較輕。
第30天及40天，模型組多個股骨頭骨組織結(jié)構(gòu)紊亂，骨總量較少；干骺端骨骺板被破壞，破壞處由增生的結(jié)締組織團(tuán)塊充滿，骨膜的包殼將增生機(jī)化、無結(jié)構(gòu)的壞死骨組織和碎片包圍；骨骺板周圍的骨小梁逐漸修復(fù)增多；骨干部分骨膜增厚，骨膜下可見增生的軟骨細(xì)胞已向骨組織轉(zhuǎn)化；骨髓腔中充滿多量造血細(xì)胞、脂滴和少量炎癥細(xì)胞；干骺端軟骨骨膜尚好。高劑量組(恢復(fù)期)，個別標(biāo)本干骺端可見骨骺板中間斷開，斷開處由增生并機(jī)化的結(jié)締組織填充；骨骺線附近的骨小梁形成略多；骨干部分骨膜增厚，骨膜下增生的軟骨細(xì)胞大部分向骨組織轉(zhuǎn)化；骨髓腔中充滿較多造血細(xì)胞、脂滴和少量巨噬細(xì)胞；干骺端軟骨骨膜欠光滑。中藥陽性對照組病理改變較輕。
1.5對“腎上腺素+冰浴”致大鼠血瘀的影響[8] 選用Wistar大鼠96只，體重200～250g，雌雄兼用，隨機(jī)分為5組①模型對照組；②中藥陽性對照組；③本發(fā)明片高劑量組；④本發(fā)明片中劑量組；⑤本發(fā)明片低劑量組。分組后即連續(xù)給藥7天，末次給藥1小時(shí)后，各組大鼠皮下注射腎上腺素2ml/kg(1mg/ml)，30min后將大鼠放入0℃～2℃冰水中冰浴6分鐘。間隔第一次注射腎上腺素2h后再注射1次。各組禁食不禁水，第二天(冰浴24h后)從腹主動脈取血(肝素抗凝)，進(jìn)行血液流變學(xué)指標(biāo)的測定。另取大鼠不注射腎上腺素、不進(jìn)行冰浴，作為正常對照組。同樣取血作血液流變學(xué)指標(biāo)測定。
表1-5-1本發(fā)明對大鼠血液流變學(xué)(血瘀)的影響(x±s，n＝10)
與正常對照組比較*P＜0.05，與模型對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01 表1-5-2本發(fā)明對大鼠血液流變學(xué)的影響(x±s，n＝10)
與正常對照組比較*P＜0.05，與模型對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01 1.6對小鼠足趾瘀血水腫的影響[9] 用厚紙制成一內(nèi)徑略大于200克砝碼的圓筒，長30cm，將小鼠右足置于桌面，足掌向上，把圓筒置于足掌相應(yīng)部位，使砝碼從圓筒上端垂直下落砸中小鼠足掌，造成瘀血水腫，創(chuàng)傷造模后隨機(jī)分為6組①模型對照組；②西藥中藥陽性對照組(地塞米松，皮下注射)；③中藥陽性對照組；④本發(fā)明片高劑量組；⑤本發(fā)明片中劑量組；⑥本發(fā)明片低劑量組。隨后開始用藥，每天1次，連續(xù)5天，第5天給藥后2小時(shí)處死小鼠，切取等同部位的左右足，精確稱重，以兩足重量差為腫脹度，作為評價(jià)藥物對足趾瘀血水腫作用的指標(biāo)。
結(jié)果表明，本發(fā)明高、中劑量組對小鼠足趾瘀血水腫有明顯的抑制作用，見表1-6。
表1-6本發(fā)明對小鼠足趾瘀血水腫的影響(x±s)
與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01 1.7對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹影響[10] 取Wistar大鼠60只，體重200～250g，雌雄兼用，動物隨機(jī)分為6組①模型對照組；②西藥中藥陽性對照組(地塞米松，皮下注射)；③中藥陽性對照組；④本發(fā)明片高劑量組；⑤本發(fā)明片中劑量組；⑥本發(fā)明片低劑量組。實(shí)驗(yàn)前先測量大鼠右足跖周長，分組后開始給藥，每天給藥1次，連續(xù)3天，末次給藥后60min，于右足跖皮下注射1％角叉菜膠50ul，致炎后1、2小時(shí)，各測一次右足跖周長。以給藥前后右足跖周長差值作為腫脹度，評價(jià)藥物的作用。
結(jié)果表明，本發(fā)明高、中劑量組對大鼠足跖腫脹均有明顯的抑制作用，見表1-7。
表1-7本發(fā)明對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(x±s，n＝10)
與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001 1.8對大鼠棉球肉芽腫形成的影響[11] 取Wistar大鼠60只，雌雄兼用，體重200～250g，乙醚麻醉，在無菌條件下作胸部切口，將5mg的滅菌棉球植入兩側(cè)腋窩附近皮下，術(shù)后隨機(jī)分為6組①空白對照組；②西藥中藥陽性對照組(地塞米松，皮下注射)；③中藥陽性對照組；④本發(fā)明片高劑量組；⑤本發(fā)明片中劑量組；⑥本發(fā)明片低劑量組。每組10只。術(shù)后第2天開始給藥，空白對照組給等量生理鹽水(10ml/kg)，每天1次，連續(xù)8天，第9天處死大鼠，剝離并取出棉球肉芽腫組織，放入60℃烘箱內(nèi)干燥12h，然后取出精確稱重，減去原棉球重量，即為肉芽腫凈重，以此評價(jià)藥物對棉球肉芽腫增生的影響。
結(jié)果表明，本發(fā)明高劑量組對大鼠棉球肉芽腫的形成有明顯的抑制作用，見表1-8。
表1-8本發(fā)明對大鼠棉球肉芽腫形成的影響(x±s)
與空白對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01； 1.9本發(fā)明的鎮(zhèn)痛作用[12] 1.9.1熱板法 將鋁制槽置于55±0.5℃恒溫水浴中預(yù)熱10分鐘，每次取雌性小鼠1只，放入槽內(nèi)，記錄小鼠出現(xiàn)添后足所需時(shí)間(秒/s)作為該鼠痛閾值。凡添足時(shí)間少于5s或大于30s或有跳躍逃避者，棄之不用。取合格小鼠60只，體重18～22g，隨機(jī)分為空白對照組、西藥中藥陽性對照組(嗎啡，腹腔注射)、中藥陽性對照組、本發(fā)明高劑量組、本發(fā)明中劑量組、本發(fā)明低劑量組，每組12只。分組后各小鼠分別給藥，每天1次，連續(xù)3天，空白對照組給等量生理鹽水(20ml/kg)。分別測定末次給藥后30、60分鐘的痛閾值。每次觀察1min，如1min內(nèi)無痛覺反應(yīng)，痛閾值則以60秒計(jì)算。
結(jié)果表明，本發(fā)明對物理性、外源性致痛的鎮(zhèn)痛作用不明顯，見表1-9-1。
表1-9-1本發(fā)明的鎮(zhèn)痛作用(熱板法)(x±s)
與空白對照組比較**P＜0.01 1.9.2扭體法 取小鼠72只，雌雄兼用，體重18～22g，隨機(jī)分為空白對照組、西藥中藥陽性對照組(嗎啡，腹腔注射)、中藥陽性對照組、本發(fā)明高劑量組、本發(fā)明中劑量組、本發(fā)明低劑量組，每組12只。分組后各小鼠分別給藥，每天1次，連續(xù)3天，空白對照組給等量生理鹽水(20ml/kg)。末次給藥后30分鐘，各小鼠腹腔注射0.6％醋酸0.2ml，觀察小鼠在注射醋酸后20分鐘內(nèi)出現(xiàn)的扭體反應(yīng)次數(shù)。
本發(fā)明高劑量組能明顯減少醋酸致痛引起的小鼠扭體次數(shù)，表明有一定的鎮(zhèn)痛作用，結(jié)果見表1-9-2。
表1-9-2本發(fā)明的鎮(zhèn)痛作用(扭體法)(x±s)
與空白對照組比較*P＜0.05 本發(fā)明的片劑動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(1)肉眼觀可見本發(fā)明高劑量組對家兔實(shí)驗(yàn)性骨折的愈合程度略好于其它組。藥后35d骨折X線片分析與評分結(jié)果，本發(fā)明高劑量組與模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)；藥后28d、35d骨痂組織學(xué)觀察，本發(fā)明高劑量組與模型組比較有顯著性差異(均為P＜0.05)。(2)本發(fā)明高劑量組對大鼠骨折后血清中鈣含量有明顯的提高作用(藥后第14天、21天、28天、35天均為(P＜0.05)；藥后35d骨痂樣本組織學(xué)觀察與評分結(jié)果(P＜0.05)；(3)對三黃雞激素性股骨頭缺血性壞死血液流變學(xué)部分指標(biāo)有明顯的改善作用(與模型組比較，本發(fā)明高劑量組的全血粘度高切變率、低切變率、紅細(xì)胞壓積及紅細(xì)胞變形指數(shù)均為P＜0.05；中劑量組的全血粘度高切變率、紅細(xì)胞壓積及紅細(xì)胞變形指數(shù)均為P＜0.05)；給藥治療6周后組織學(xué)觀察，模型組病理改變最重，中藥陽性對照組及高劑量組改變較輕。(4)給藥治療后第30天及40天，X線片檢查提示中藥陽性對照組及高劑量組對液氮致家兔股骨頭缺血壞死的保護(hù)作用略好于其它組；組織學(xué)檢查，中藥陽性對照組病理改變較輕，高劑量組介于模型組和中藥陽性對照組之間。(5)對大鼠血瘀癥血液流變學(xué)部分指標(biāo)有明顯的改善作用(高劑量組全血粘度高切變率及中劑量組血漿粘度均為P＜0.05；高劑量組血漿粘度P＜0.01)；(6)對小鼠外傷性足趾瘀血水腫有明顯的抑制作用(高劑量組P＜0.01；中劑量組P＜0.05)；(7)對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹有明顯的抑制作用，其中致炎后2h治療效果最好(高劑量組P＜0.01；中劑量組P＜0.05)；(8)對大鼠棉球肉芽腫的形成有明顯的抑制作用(P＜0.05)；(9)高劑量組能明顯減少腹腔注射醋酸溶液致小鼠扭體的次數(shù)(P＜0.05)。
綜上所述本品能明顯促進(jìn)骨折愈合，升高鈣、磷含量，增加骨小梁寬度；明顯改善激素性股骨頭缺血性壞死模型骨頭內(nèi)的血液供應(yīng)，促進(jìn)死骨吸收與新骨形成；明顯改善血瘀癥的血液流動狀況；有較好的消腫鎮(zhèn)痛作用。
毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果 2.1急性毒性試驗(yàn)本實(shí)驗(yàn)觀察了小鼠灌胃給本發(fā)明后動物的急性毒性反應(yīng)，并測定了LD50的值和95％可信限。結(jié)果表明，灌胃41.1、32.9、26.3、21.0以及16.8g生藥/kg后，動物中毒主要癥狀表現(xiàn)為呼吸困難，最后死亡。用Bliss法計(jì)算出小鼠的LD50為25.4生藥g/kg，95％可信限20.5～31.5g生藥/kg。
2.2長期毒性試驗(yàn)本試驗(yàn)旨在觀察本發(fā)明對大鼠進(jìn)行長期灌胃給藥所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)及其程度，以確定其臨床用藥的安全性。取Wistar大鼠為試驗(yàn)對象，高劑量組、中劑量組、低劑量組大鼠分別給予劑量為34.5g生藥/kg、17.25g生藥/kg、8.625g生藥/kg的本發(fā)明(分別為8.42g藥粉/kg、4.21g藥粉/kg、2.1g藥粉/kg)，相當(dāng)于人臨床日擬用劑量的60、30、15倍)，連續(xù)灌胃給藥182天。觀察項(xiàng)目有(1)動物的外觀體征、行為活動、食欲、大小便等一般狀況；(2)紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板及骨髓有核細(xì)胞等血液學(xué)指標(biāo)；(3)谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、乳酸脫氫酶、肌酐、尿素氮、血清總蛋白、白蛋白、血糖、總膽固醇、球蛋白、甘油三脂和膽紅素等血液生化指標(biāo)；(4)心、肝、腎、脾、肺、腦、胸腺、膀胱、腎上腺、子宮、卵巢、睪丸、附睪、前列腺、精囊腺等臟體系數(shù)；(5)心、肝、腎、脾、肺、腦、胸腺、腎上腺、胃、大腸、小腸、膀胱、子宮、卵巢、睪丸、附睪、胰腺、前列腺、精囊腺、骨髓、腦垂體、主動脈、氣管、甲狀腺、甲狀旁腺、視神經(jīng)、坐骨神經(jīng)、淋巴結(jié)、脊髓、唾液腺、食管等器官組織病理學(xué)。結(jié)果顯示本發(fā)明中劑量組、低劑量組在以上各觀測指標(biāo)與空白對照組比較，均未見有明顯的異常改變，但高劑量組大鼠肝、腎出現(xiàn)病理學(xué)改變例數(shù)增多。結(jié)論在本試驗(yàn)條件下，本發(fā)明連續(xù)灌胃給藥182天無毒作用劑量大于34.5g生藥/kg(8.42g藥粉/kg，此劑量相當(dāng)于臨床劑量的60倍)，按擬定的臨床劑量、給藥途徑和療程應(yīng)用本發(fā)明是安全的。
臨床試驗(yàn)結(jié)果 3.1臨床資料 3.1.1診斷標(biāo)準(zhǔn)所有病例均按中華外科雜志1993年召開的股骨頭缺血壞死專題討論會制定的股骨頭壞死診斷標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
3.1.2納入標(biāo)準(zhǔn)①符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡≤70歲；③按照Ficat分期I、II、III期股骨頭壞死者。
3.1.3排除標(biāo)準(zhǔn)①不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)和納入標(biāo)準(zhǔn)；②類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨頭節(jié)結(jié)核、髖關(guān)節(jié)先天發(fā)育不良所致的股骨頭缺血壞死；③有嚴(yán)重的血液系統(tǒng)疾病、糖尿病、皮膚病患者；④未能按治療方案用藥或中途中斷試驗(yàn)者；⑤無系統(tǒng)規(guī)范的治療前后X線片和CT對照者。
3.1.4一般資料本組51例，男性36例，女性15例。年齡在16-70歲，平均年齡45.5歲。因創(chuàng)傷所致者18例，因激素所致者28例，不明原因者5例。病程最長者21個月，最短者3個月，平均8.5個月。其中按按照Ficat分期I期有16例、II期有29例、III期有6例。
3.2治療方法本發(fā)明為片劑，每片重0.7g，每天三次，每次4片，用溫水吞服。3個月為一個療程，連續(xù)用藥1～2個療程。每療程均作X線及CT檢查。治療的第一個療程內(nèi)臥床休息，以后的治療期間避免患肢負(fù)重或行走時(shí)扶雙拐3～6個月。
3.3療效評定 3.3.1髖關(guān)節(jié)疼痛癥態(tài)、功能、關(guān)節(jié)活動度及X線片用藥前后變化評分標(biāo)準(zhǔn)按1995年8月中華骨科學(xué)會骨壞死學(xué)組丹東會議制定的評分標(biāo)準(zhǔn)評定積分，其中疼痛25分、功能18分、關(guān)節(jié)活動度17分，X線40分。
3.3.2療效評定標(biāo)準(zhǔn)按1995年實(shí)行的成年人股骨頭缺血壞死療效判定標(biāo)準(zhǔn)(百分法)評定。優(yōu)≥90分，良75～89分，可60～74分，差＜60分。
3.3.3本發(fā)明對髖關(guān)節(jié)疼痛、功能、活動度及X線片積分的影響，見表1 表1治療前和治療后不同時(shí)間癥狀積分結(jié)果 3.3.4本發(fā)明治療股骨頭缺血壞死的療效評定結(jié)果見表2。
表2療效評定結(jié)果 原料組分的對股骨頭壞死藥理作用 本發(fā)明的原料組分由丹參、三七、續(xù)斷、牛膝、黃芪、延胡索、兩面針、制川烏、煅自然銅組成，從文獻(xiàn)檢索中我們也查到以下的相關(guān)藥理作用資料，列出如下 三七本品為五加科植物三七(拉丁名Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)的干燥根，收載于《中國藥典》2005年版一部第10頁。吳麗萍等[1]觀察不同劑量的三七總甙對體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞增殖、分化及OPG表達(dá)的影響，探索體外作用的機(jī)制和最佳劑量。采用第2代培養(yǎng)的成骨細(xì)胞分別加入終濃度為0μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的三七總甙，觀察細(xì)胞生長、鈣結(jié)節(jié)形成情況，堿性磷酸酶(ALP)染色、分泌量檢測，骨鈣素(OCN)檢測，MTT法觀察成骨細(xì)胞增殖，免疫組化SP法結(jié)合陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測成骨細(xì)胞OPG表達(dá)。結(jié)果成骨細(xì)胞在7d可鋪滿瓶壁，30d可形成鈣結(jié)節(jié)，三七總甙可促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖ALP、OCN的分泌，以50μg/ml時(shí)作用明顯。三七總甙可促進(jìn)成骨細(xì)胞OPG的表達(dá)，在50μg/ml時(shí)作用明顯。結(jié)論三七總甙可促進(jìn)大鼠成骨細(xì)胞的增殖、分化，促進(jìn)成骨細(xì)胞OPG的表達(dá)，以50μg/ml時(shí)作用明顯。
唐麗靈等[2]認(rèn)為，骨組織的生長發(fā)育受到力學(xué)因素的調(diào)控.對大鼠顱蓋骨中分離出的成骨細(xì)胞施加周期性拉伸刺激，結(jié)果表明500微應(yīng)變的加載明顯促進(jìn)了細(xì)胞的增殖，而1000和1500微應(yīng)變的拉伸抑制了細(xì)胞的增殖.各應(yīng)變水平的拉伸增加了細(xì)胞與基底間的黏附力和細(xì)胞的鋪展面積.用熒光探針Fluo-3/AM測定拉伸對成骨細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+濃度的影響.發(fā)現(xiàn)在500微應(yīng)變下拉伸5min后成骨細(xì)胞胞內(nèi)Ca2+濃度比對照組有明顯增加.用三七總皂苷阻斷胞內(nèi)Ca2+通道后，成骨細(xì)胞對應(yīng)變的響應(yīng)仍表現(xiàn)出胞內(nèi)Ca2+濃度的升高；但與未加三七總皂苷的加載組相比，胞內(nèi)Ca2+濃度響應(yīng)應(yīng)變后的升高由原來的92.9％的增加降低到28.6％的增加.說明在成骨細(xì)胞響應(yīng)周期性拉仲應(yīng)變的過程中胞內(nèi)Ca2+濃度的升高既有胞外鈣內(nèi)流的參與，也有胞內(nèi)鈣庫的釋放作用，其中胞外鈣通過跨膜通道的內(nèi)流起主要作用。
李峻輝等[3]將30只兔隨機(jī)分為空白對照組、模型組、治療組，于實(shí)驗(yàn)后8，16周分別進(jìn)行血液流變學(xué)、血脂測定，16周處死動物行組織形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果治療組動物血漿和全血粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、總膽固醇、甘油三酯均明顯低于模型組(P＜0.05)，股骨頭空骨陷窩數(shù)雖沒有達(dá)到正常水平，但較模型組有明顯改善(P＜0.05)。結(jié)論iv經(jīng)股動脈穿刺介入給予大劑量絡(luò)泰(血塞通粉針)治療股骨頭壞死，可以降低血脂，改善血液循環(huán)，改善股骨頭的供血情況，從而促進(jìn)壞死骨修復(fù)和新生骨再生。
王一菱等[4]通過研究建立炎癥動物模型，應(yīng)用三七總皂甙(TSPN)、電針(EA)進(jìn)行治療，并用納洛酮(Nx)阻斷兩者作用，用組織化學(xué)的方法對TSPN和EA的效應(yīng)進(jìn)行比較。結(jié)果可見痛閾(PT)在TSPN組、EA組和EA加TSPN組均顯著提高，且硝基藍(lán)四氮唑試驗(yàn)(NBT)陽性的多形核白細(xì)胞(PMN)和醋酸萘酚酯酶(ANAE)的點(diǎn)型亞群計(jì)數(shù)均明顯增加，以上的全部效應(yīng)均被納洛酮部分阻斷；TSPN組與Nx組腹腔肥大細(xì)胞脫顆粒率無明顯差異。由此可見，TSPN與EA效應(yīng)相似，具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛及免疫調(diào)整作用。這提示三七總皂甙可能是阿片樣肽受體的激動劑而不具有成癮副作用。
宋烈昌等[5]三七(Panax notoginseng)在中醫(yī)臨床上是治療跌打損傷的要藥?！侗静菥V目》記載“三七根止血、散血、定痛、金刃箭傷、跌撲杖瘡血出不止者、嚼爛涂或?yàn)槟街?、其血即止，亦主吐血、衄血、下血，血痢，崩中?jīng)水不止、產(chǎn)后惡血不下、血運(yùn)、血痛赤目癰、虎咬，蛇傷諸病。”近年來關(guān)于三七提取物對心血管系統(tǒng)的藥理活性報(bào)導(dǎo)較多，而抗炎止痛鎮(zhèn)靜方面的實(shí)驗(yàn)研究尚未見報(bào)導(dǎo)。本文報(bào)告三七總皂甙在這方面的藥理作用，為三七及其復(fù)方成藥治療跌打損傷，坐骨神經(jīng)痛等臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
丹參本品為唇形科植物丹參(拉丁名Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根莖，收載于《中國藥典》2005年版一部52頁。王俊國等[6]丹參是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中用以活血化瘀的首選中藥，本身可單獨(dú)成方，被廣泛地應(yīng)用于臨床各科。本文擬就諸多丹參促進(jìn)骨折愈合的研究報(bào)道作一綜述。1丹參的主要成分及相關(guān)藥理學(xué)作用丹參的有效成分可分為水溶性及脂溶性兩大部分。其水溶性部分為酚性芳香酸(簡稱酚酸)以及該類酸縮合成的多酚芳酸，已分離到丹酚酸乙(Salvianic acid B)、丹酚酸丙(Salvianic acid C)、丹參素(丹參酸甲，Salvianic acid A)、原兒茶。
喻堅(jiān)[7]為了探討大鼠脛骨閉合性骨折早期愈合過程中血清、骨痂及骨組織中鈣、鋅的變化以及應(yīng)用丹參治療后的影響。將20只Wistar種大白鼠，隨機(jī)分成兩組，實(shí)驗(yàn)組和對照組各10只，用定點(diǎn)手法折骨術(shù)造成大鼠左脛腓骨中段閉合性骨折。實(shí)驗(yàn)組按0.06ml/10g體重，腹腔注射丹參注射液(3g/ml)1次/d。對照組注射同等量的生理鹽水。兩組動物于術(shù)前、術(shù)后第4、8、12天時(shí)自眼球采血1ml。術(shù)后第13天處死，取骨痂及骨標(biāo)本，采用原子吸收測定鈣、鋅含量。結(jié)果表明丹參可明顯增加血清和骨痂中鈣、鋅含量，降低骨折斷端鄰近骨組織中鋅的含量。提示丹參促進(jìn)骨折愈合的作用與其提高血清鋅含量，加強(qiáng)骨折斷端鄰近骨組織中鋅的動員，以及通過提高骨痂中鋅含量來加速骨痂組織生長和鈣化過程有關(guān)。
王福生等[8]觀察丹參對成骨細(xì)胞缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用。以人髂骨骨膜為材料進(jìn)行成骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)，經(jīng)丹參預(yù)處理后，行模擬缺血-再灌注采用噻唑藍(lán)比色法測定細(xì)胞的存活率。結(jié)果預(yù)處理組成骨細(xì)胞的存活率明顯高于對照組。結(jié)論丹參對人成骨細(xì)胞缺血-再灌注有明顯的保護(hù)作用。
陳建常等[9]，通過動物實(shí)驗(yàn)觀察丹參關(guān)節(jié)內(nèi)注射對關(guān)節(jié)缺血再灌注損傷后退行性關(guān)節(jié)炎的防治作用。將63只新西蘭大白兔隨機(jī)分成對照、缺血2h，缺血5h用丹參和不用丹參5個組，分別于缺血、再灌注1d和1、4、8、12、16周取股骨外髁軟骨及滑膜行大體和光鏡觀察，以及再灌注后8周和16周軟骨厚度測量。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組關(guān)節(jié)軟骨、滑膜早期有缺血再灌注損傷，并逐漸演變成早期退行性關(guān)節(jié)炎改變，而這些病變用丹參組明顯輕于未用丹參組。結(jié)論丹參能有效地減輕關(guān)節(jié)軟骨及滑膜缺血再灌注損傷及退行性改變。
史煒鑌等[10]觀察丹參有效部位(RS9403)對骨折愈合過程中前膠原、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)基因表達(dá)模式的影響，分析RS9403促進(jìn)骨折愈合作用的分子機(jī)理。將健康成年Wistar大鼠24只，作雙側(cè)橈骨骨折模型，隨機(jī)分成RS9403組、陽性對照藥三花接骨散組(三花組)和空白對照組(空白組)，分別以RS9403、三花接骨散和生理鹽水灌胃給藥，術(shù)后3天、1周、2周和4周后處死大鼠取材，采用不脫鈣的大鼠骨痂組織冰凍切片進(jìn)行原位雜交，觀察骨痂組織中前膠原和TGFβ1基因的表達(dá)。結(jié)果骨折后第3天，RS9403組與三花組的骨折端TGFβ1 mRNA的表達(dá)明顯高子空白組，并已出現(xiàn)血型膠原基因的表達(dá)。骨折第1周末，成纖維細(xì)胞和軟骨細(xì)胞樣細(xì)胞的III型前膠原基因表達(dá)占主導(dǎo)，RS9403組與三花組II、I型前膠原與TGFβ1基因的表達(dá)較空白組里同步增強(qiáng)趨勢。骨折第2周末，I型前膠原mRNA表達(dá)明顯增加，RS9403組和三花組中肥大軟骨細(xì)胞明顯多于空白組，II型前膠原mRNA的表達(dá)呈現(xiàn)顯著的衰落趨勢。
符詩聰?shù)萚11]探討丹參提取的有效部位(丹參-9403)對骨折愈合的影響。用Wistar大白鼠進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)骨折(橈骨中1/3)造模后，隨機(jī)分為4組(即丹參-9403、金葡液、生理鹽水及丹參注射液組)，術(shù)后第2天開始分別灌胃各組藥物，連續(xù)喂養(yǎng)25、39、50天后處死，取完整橈骨，置于島津Autograph萬能材料測試儀上測定3點(diǎn)抗折強(qiáng)度的載荷、應(yīng)力。結(jié)果丹參-9403組在39天的載荷指標(biāo)和25、39、50天應(yīng)力指標(biāo)最高，分別為(6.20±1.32)牛頓(N)，(5.71±3.58)N/mm2、(8.27±2.42)N/mm2、(66.25±26.51)N/mm2，與其他各組比較，有顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)論丹參-9403具有提高骨折斷端強(qiáng)度的作用。
丁寅等[12]研究丹參對體外骨髓細(xì)胞培養(yǎng)中破骨細(xì)胞生成的作用。采用小鼠長骨骨髓體外培養(yǎng)方法，通過檢測抗酒石酸磷酸酶(TRACP)陽性細(xì)胞生成數(shù)，反映破骨細(xì)胞的生成情況。結(jié)果1.0g/L丹參可明顯抑制TRACP陽性細(xì)胞的生成，其生成數(shù)僅為對照組的29.8％；PGE2(10-7mol/L)及1.25(OH)2D3(10-8mol/L)產(chǎn)生明顯的促進(jìn)作用，與對照組比較，TRACP陽性細(xì)胞生成數(shù)分別增加了6.04和6.68倍；丹參還可明顯抑制PGE2和1.25(OH)2D3的作用，混合培養(yǎng)組TRACP陽性細(xì)胞生成數(shù)僅僅是單純加PGE2和1.25(OH)2D3組的35.2％和39.3％，特別是多核破骨細(xì)胞數(shù)大量減少。結(jié)論丹參可抑制骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)中破骨樣細(xì)胞的生成，主要抑制破骨母細(xì)胞向成熟破骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，而成骨細(xì)胞可能在其中發(fā)揮了作用。
劉福云等[13]報(bào)道近年來國內(nèi)外學(xué)者對Perthes病，頑固性跟痛癥，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎等進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)這些疾病與骨內(nèi)高壓密切相關(guān)〔1～3〕。因此，尋找預(yù)防骨內(nèi)高壓的方法和藥物，成為當(dāng)前研究的熱門課題，丹參是活血化瘀，調(diào)節(jié)血液液循環(huán)的藥物。
符詩聰?shù)萚14]，60只SD大鼠進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)骨折(橈骨中上1/3)造模后，分為丹參注射液組，生理鹽水組，丹參不同方法提取有效成分1、2、3組。術(shù)后第2d開始灌胃，50d后處死，取完整橈骨，置于Instron2211多功能材料測試儀上測定三點(diǎn)抗彎強(qiáng)度。結(jié)果表明丹參2組的抗彎強(qiáng)度最高，力為2.35N，與其它各組比較，P＜0.05，說明此組丹參提取物具有提高大鼠橈骨骨折斷端力學(xué)強(qiáng)度的作用。
丁寅等[15]選擇克隆化成骨細(xì)胞株——MC3T3-E1細(xì)胞，采用細(xì)胞培養(yǎng)方法，觀察細(xì)胞內(nèi)DNA合成與堿性磷酸酶(ALPase)活性，了解丹參對體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞生長、分化與代謝的影響。研究結(jié)果顯示，丹參明顯增強(qiáng)MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)ALPase活性，5.0mg/ml濃度時(shí)，丹參對MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性影響最大，比對照組增強(qiáng)約135％。丹參這種促進(jìn)作用只限于分化晚期的MC3T3-E1細(xì)胞，而對分化早期細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性產(chǎn)生抑制作用。其次，這種作用還與藥物作用時(shí)間有關(guān)。但是，丹參對各生長分化期的MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)DNA合成均無影響。本研究結(jié)果表明，丹參有明顯增強(qiáng)體外培養(yǎng)分化晚期的MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性的作用，這種作用不是通過促進(jìn)細(xì)胞增殖，而是改善細(xì)胞功能實(shí)現(xiàn)的，并且受丹參藥物濃度與作用時(shí)間的影響，說明丹參可能在促進(jìn)正畸牙齒移動中新生牙槽骨形成方面發(fā)揮作用。
丁寅等[16]為了了解丹參對體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞生長、分化與代謝的影響，選擇克隆化成骨細(xì)胞株MC3T3-E1細(xì)胞，采用細(xì)胞培養(yǎng)方法，觀察細(xì)胞內(nèi)DNA合成與堿性磷酸酶(ALPase)活性.結(jié)果丹參明顯增強(qiáng)MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)ALPase活性，丹參濃度為5.0g/L時(shí)，對MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)ALPase活性影響最大，比對照組強(qiáng)約135％。丹參這種促進(jìn)作用只限于分化晚期的MC3T3-E1細(xì)胞，而對分化早期細(xì)胞內(nèi)的ALPase活性起抑制作用，其次，這種作用還與藥物作用時(shí)間有關(guān).但是，丹參對各生長分化期的MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)DNA合成均無影響。
結(jié)論丹參可明顯增強(qiáng)體外培養(yǎng)分化晚期MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)的ALPase活性，該作用不是通過促進(jìn)細(xì)胞增殖，而是改善細(xì)胞功能而實(shí)現(xiàn)的，并且受丹參藥物濃度與作用時(shí)間的影響，說明丹參可能在正畸牙齒移動中促進(jìn)新生牙槽骨的形成方面發(fā)揮重要作用。
徐榮輝等[17]研究實(shí)驗(yàn)用雞胚額骨分離細(xì)胞體外培養(yǎng)結(jié)合組織化學(xué)技術(shù)觀察丹參注射液對成骨細(xì)胞樣細(xì)胞增殖、分化和成骨功能的影響。發(fā)現(xiàn)(1)丹參能明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞樣細(xì)胞的分裂和增殖。(2)丹參能促進(jìn)成骨細(xì)胞樣細(xì)胞提前出現(xiàn)偽足伸縮運(yùn)動和胞外吐作用，使丹參組的培養(yǎng)液內(nèi)出現(xiàn)大量細(xì)小漂浮性顆粒，該顆粒對酸性粘多糖染色呈陽性反應(yīng)。(3)成骨細(xì)胞樣細(xì)胞經(jīng)發(fā)育后能分泌直徑約為3um的小光狀顆粒。這種顆粒顯酸性粘多糖著色(早期)，膠原和鈣鹽著色(晚期)在細(xì)胞集落周圍聚集、融合。形成骨小結(jié)節(jié)和骨小片，并愈積愈大。經(jīng)四環(huán)素活體標(biāo)記后在熒光顯微鏡下呈金黃色，因此是新生骨組織。丹參組織形成的骨小結(jié)節(jié)和骨小片在數(shù)量上和體積上明顯大于對照組。
張丁等[18]在離體狀態(tài)觀察丹參注射液對離體破骨細(xì)胞的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)舛炔坏陀?.01mg/ml時(shí)，對破骨細(xì)胞起抑制作用。作者推測丹參通過其鈣離子阻滯作用，改變了破骨細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)節(jié)蛋白的活性，進(jìn)而降低了胞漿內(nèi)Ca++和cAMP的濃度，使離體破骨細(xì)胞的活性降低。
鄭謙等[19]丹參煎制劑有改善骨組織的血供作用，實(shí)驗(yàn)選用SD大鼠120只，造成單側(cè)下頜體實(shí)驗(yàn)性骨折。實(shí)驗(yàn)組60只，骨折后肌注丹參0.5ml，手術(shù)3、5、7、10、15、20天用放射性微球分布技術(shù)測定骨折遠(yuǎn)中段及其周圍軟組織的流量變化。結(jié)果顯示丹參能明顯改善骨折段及其軟組織的血供。
徐榮輝等[20]丹參注射液有促進(jìn)雞胚額骨分離細(xì)胞培養(yǎng)生長作用，組織化學(xué)觀察，實(shí)驗(yàn)用雞胚額骨分離細(xì)胞體外培養(yǎng)組合組織化學(xué)技術(shù)觀察丹參注射液對骨細(xì)胞樣細(xì)胞增殖、分化和成骨功能的影響并進(jìn)行組織化學(xué)觀察。發(fā)現(xiàn)(1)丹參注射液能明顯促進(jìn)成骨細(xì)胞樣細(xì)胞的分裂和增殖。(2)丹參注射業(yè)能促進(jìn)成骨細(xì)胞樣細(xì)胞提前出現(xiàn)偽足伸縮運(yùn)動和胞外吐作用，使丹參組的培養(yǎng)液內(nèi)出現(xiàn)大量細(xì)小漂浮性顆粒，該顆粒對酸性粘性多糖染色呈陽性反應(yīng)。(3)成骨細(xì)胞樣細(xì)胞經(jīng)發(fā)育后能分泌直徑約為3μm的小光狀顆粒。這種顆粒顯酸性粘多糖著色(早期0，膠原和鈣鹽著色(晚期)在細(xì)胞集落周圍集、融合。形成骨小結(jié)節(jié)和骨小片，并越積越大。經(jīng)四環(huán)素活性標(biāo)記后在熒光顯微鏡下呈金黃色，因此是新骨組織。丹參注射液組織形成的骨小節(jié)和骨小片在數(shù)量上和體積上明顯大于對照組。
徐榮輝等[21]該學(xué)者又做了丹參注射液地雞胚胎股骨器官培養(yǎng)生長的影響研究，實(shí)驗(yàn)用孵育9天的雞胚，在無菌條件下取右側(cè)股骨用1640、Eagle、199和BGJb等四種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)(對照組)；左側(cè)股骨用含0.8％丹參注射液的上述4種培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)(丹參組)。在38℃二氧化碳培養(yǎng)箱用旋轉(zhuǎn)管培養(yǎng)法分析培養(yǎng)1、2和3周。發(fā)現(xiàn)丹參雞胚股骨生長率非常顯著地高于對照組(P＜0.01)。在離體培養(yǎng)條件下，股骨的生長主要表現(xiàn)在兩端，股骨骨干部則無明顯改變，亦未見骨髓組織形成。
徐榮輝等[22]丹參注射液對積胚額骨分離細(xì)胞培養(yǎng)生長還有調(diào)節(jié)作用。丹參能促進(jìn)骨細(xì)胞樣細(xì)胞成熟，分泌膠原性物質(zhì)和AIP，并使鈣鹽在膠原基質(zhì)上沉積，形成骨小節(jié)。但是濃度過高能導(dǎo)致對成骨細(xì)胞樣細(xì)胞生長的抑制。
張菊英等[23]丹參注射液對小鼠骨折愈合中鈣沉積有明顯的影響。實(shí)驗(yàn)用成年雄性健康小鼠。體重25～35g，以45Ca沉積量為指標(biāo)觀察骨形成的速度，用自制骨折器造成小鼠右股骨中段閉合骨折，骨折后每天給予丹參注射液0.5ml(口服)。給藥后5、7、9、13分別處死小鼠，處死前48小時(shí)尾靜脈注射0.2ml45Ca-氧化鈣溶液，測定左右股骨及右脛骨上、中、下三段的放射活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)正常小鼠左右骨相應(yīng)部位鈣沉積相似，右股骨中段骨折后，生理鹽水組與丹參組小鼠的中段股骨鈣沉積不斷升高，而股骨上、下二段反而下降，丹參組下降更顯著。說明丹參可以從臨近骨組織中調(diào)動比生理鹽水更多的鈣，以更好的滿足新骨形成對鈣的需要，從而使骨折愈合加速。
劉季蘭等[24]另報(bào)道，有學(xué)者采用C57BL純種成年健康小鼠，觀察了丹參注射液對小鼠骨折愈合中鈣再吸收的影響。結(jié)果表明，正常小鼠左右股骨及脛骨上段的放射活性均隨時(shí)間而不斷下降；注射45Ca后不同時(shí)間造成右股骨中段骨折后，生理鹽水組小鼠骨折部位的放射活性卻低于相應(yīng)健側(cè)；丹參組小鼠中這種變化更為顯著。
柴本甫等[25]通過電子顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)使用丹參注射液后，可使家兔骨折部位骨痂形成提前，且更為致密。骨生成細(xì)胞分布部位及數(shù)量增加；成纖維細(xì)胞除有外行改變外，細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成活動更為旺盛，細(xì)胞的正常變性過程也加快，細(xì)胞外膠原纖維增多，并進(jìn)入成纖維細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)；有增多的破骨細(xì)胞出現(xiàn)在不同的骨痂部b為，促進(jìn)骨的改建，另外，成纖維細(xì)胞腫脹的線粒體內(nèi)出現(xiàn)眾多致密鈣顆粒，從而使骨痂有更多更早的鈣鹽沉積。
徐任生等[26]對家兔前肢脛骨骨折實(shí)驗(yàn)中也證明丹參可促進(jìn)各者愈合。
徐榮輝等[27]丹參對家兔皮膚切口愈合有明顯的促進(jìn)作用。實(shí)驗(yàn)用體重為2～3kg的雄性家兔，分對照組和丹參組，所有家兔右上肢用電剪剃毛，在戊巴比妥鈉靜脈麻醉(30mg/kg)及無菌技術(shù)下作右前壁下1/3部位掌面皮膚全層縱行切口，長約1.5cm，皮膚切口作間縫合。手術(shù)當(dāng)天起對照組每天加生理鹽水2ml。丹參組每天注射同一批號丹參注射液2ml。注射最多不超過13針，宰殺當(dāng)天停止注射。對照組于手術(shù)后1～10日以及17、21、25、30各取家兔2只作系列觀察；用藥組于術(shù)后1日、3、5、7、9、13、17、2125、30日各取家兔2只作組織學(xué)和組織化學(xué)對比觀察。結(jié)果表明，丹參組的巨噬細(xì)b胞及成堆異物巨噬細(xì)胞的出現(xiàn)均早于對照組，使創(chuàng)傷修復(fù)的清掃階段明顯提前，持續(xù)出現(xiàn)豐富而充血的毛細(xì)血管，另外，丹參組的血管性肉芽組織、膠原性肉芽組織以及疤痕性肉芽組織的出現(xiàn)均顯著早于對照組，說明由于應(yīng)用丹參產(chǎn)生了活血化作用，促進(jìn)了皮膚切口愈合。丹參的活血化瘀作用可促進(jìn)組織修復(fù)和再生，如加快骨折和皮膚創(chuàng)傷的愈合都可能與它的改善微循環(huán)障礙和血液流變學(xué)等作用有關(guān)，致使局部血流供應(yīng)增多和營養(yǎng)增加，促進(jìn)組織的修復(fù)和再生。還可能通過內(nèi)在調(diào)節(jié)機(jī)制而影響機(jī)體的反應(yīng)性。
續(xù)斷本品為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷(拉丁名Dipsacus asperoides C.Y.Chenget T.M.Ai)的干燥根，收載于《中國藥典》2005年版一部231頁。程志安等[28]在動物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，探討續(xù)斷對成骨細(xì)胞增殖、分化、凋亡、細(xì)胞周期和I型前膠原αmRNA表達(dá)影響。根據(jù)文獻(xiàn)方法培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞株UMR 10 6/01，采用3H Tdr法檢測細(xì)胞增殖，PNPP法、RIA法、茜素紅染色法以及定量RT PCR法分別檢測堿性磷酸酶活性、骨鈣素活性、礦化結(jié)節(jié)形成和I型膠原αmRNA的表達(dá)，從而了解續(xù)斷對成骨細(xì)胞增殖、分化的影響；FCM法檢測細(xì)胞周期。結(jié)果顯示續(xù)斷中、高劑量能顯著促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖、增加堿性磷酸酶的表達(dá)及礦化結(jié)節(jié)形成的數(shù)量，促進(jìn)成骨細(xì)胞骨鈣素和I型前膠原mRNA的表達(dá)(P＜0.01，P＜0.05)，和雌激素組比較差異無顯著性。續(xù)斷高劑量組細(xì)胞增殖率、S期細(xì)胞比率和細(xì)胞增殖指數(shù)等均顯著高于空白對照組(P＜0.01，P＜0.05)，和雌激素組比較差異也無顯著性。細(xì)胞凋亡率和G0G1期細(xì)胞比率顯著低于空白對照組(P＜0.01，P＜0.05)。表明續(xù)斷能有效促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化、增殖，防止成骨細(xì)胞凋亡，可能是該藥促進(jìn)骨折愈合、防治骨質(zhì)疏松的... 卿茂盛等[29]觀察續(xù)斷對大鼠去卵巢骨質(zhì)疏松性骨折模型骨折愈合中生物力學(xué)性能的影響。材料與方法選取30只4月齡大鼠，分為假手術(shù)骨折對照組、去卵巢骨折對照組、去卵巢骨折中藥處理組。后兩組去卵巢3月造成絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型，之后三組均造成橈骨遠(yuǎn)端骨折，灌藥1月后檢測橈骨骨痂生物力學(xué)強(qiáng)度。結(jié)果中藥處理組最大剪切力17.76±1.25N，剪切應(yīng)力1.12±0.13N/mm2，生物力學(xué)性能與基礎(chǔ)骨折對照組相接近，明顯優(yōu)于去卵巢骨折對照組(P＜0.01)。結(jié)論續(xù)斷能改善骨質(zhì)疏松性骨折愈合骨痂的生物力學(xué)性能，具有一定的促進(jìn)骨折愈合的作用。
洪定鋼等[30]為了解中藥續(xù)斷對骨折愈合的影響，我們利用骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)技術(shù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果是該藥能提高成骨細(xì)胞的活性和數(shù)量、促進(jìn)基質(zhì)鈣化、促進(jìn)骨痂生長、加快骨痂的改建。結(jié)論是續(xù)斷可促進(jìn)骨折愈合。
郭昭慶等[31]研究利用[3H]-TdR摻入法觀察不同濃度的氟化鈉及中藥續(xù)斷組分對體外培養(yǎng)的正常成人成骨細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示，氟化鈉能直接影響成骨細(xì)胞的增殖，且具有雙向調(diào)節(jié)效應(yīng)，在一定濃度范圍內(nèi)(1.25～10μmol/L)能促進(jìn)細(xì)胞增殖，但其有效濃度范圍相對狹窄，濃度過高(＞20μmol/L)反而抑制成骨細(xì)胞的生長。中藥續(xù)斷的兩種組分對成骨細(xì)胞的增殖均具有促進(jìn)作用，但有各自不同的有效濃度范圍。本研究提示氟化鈉對成骨細(xì)胞具有直接的作用。中藥續(xù)斷對成骨細(xì)胞也有促增殖作用，理論上有望從促骨形成方面用于骨質(zhì)疏松的預(yù)防及治療，同時(shí)也為中藥的篩選提供了一條新路。
牛膝本品為莧科植物牛膝(拉丁名Achyranthes bidentata Bl.)的干燥根，收載于《中國藥典》2005年版一部49頁。王筠默[32]、鄭寶燦等[33]據(jù)實(shí)驗(yàn)報(bào)道，牛膝煎劑腹腔注射對酒石酸銻鉀或醋酸所致“扭體反應(yīng)”有抑制作用，表明牛膝具有鎮(zhèn)痛作用。另外文獻(xiàn)報(bào)道，對醋酸熱體反應(yīng)小鼠的作用小鼠口服懷牛膝煎劑有極顯著的鎮(zhèn)痛作用。
宋振玉等[34]實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，對大鼠的甲醛性腳腫，牛膝酒劑有明顯的治療作用。
史玉芬[35]牛膝200％提取液有較強(qiáng)的抗炎消腫作用。而且腎上腺皮質(zhì)功能試驗(yàn)證明牛膝無腎上腺皮質(zhì)激素樣作用。因此牛膝的抗炎作用并非通過腎上腺皮質(zhì)激素所致。牛膝的抗炎消腫機(jī)理認(rèn)為是提高機(jī)體免疫功能，激活小鼠巨噬細(xì)胞系統(tǒng)對細(xì)菌的吞噬作用，以及擴(kuò)張血管、改善循環(huán)、促進(jìn)炎性病吸收等。
孫奮勇等[36]報(bào)道，為了研究牛膝對成骨細(xì)胞株HFOB119的促增殖作用及其分子機(jī)制，制備牛膝含藥血清，醇提法制備牛膝脫皮甾酮，MTT法檢測二者對體外培養(yǎng)的HFOB119的促增殖作用，RT PCR檢測PKARIβ的表達(dá)。結(jié)果牛膝含藥血清與牛膝脫皮甾酮均能促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖，并導(dǎo)致PKARIβ表達(dá)的上調(diào)。結(jié)果初步判定牛膝在體外有促進(jìn)人成骨細(xì)胞增殖的作用，其主要作用成份為脫皮甾酮，并有可能是通過cAMP介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)途徑進(jìn)行的。
高曉燕等[37]報(bào)道，牛膝有散瘀血、消腫痛、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨之功效，為常用中藥之一。歷代文獻(xiàn)明確為治療“骨痹”、“骨痿”(骨質(zhì)疏松癥)的方劑共21個，涉及藥物77種，其中牛膝是出現(xiàn)頻率較高的藥物。通過研究發(fā)現(xiàn)牛膝的醇提物以及醇提物的乙酸乙酯萃取物對成骨樣細(xì)胞UMR106有顯著的促進(jìn)增殖作用。牛膝的醇提物對成骨樣細(xì)胞UMR106有促進(jìn)增殖的作用，增殖率可達(dá)28％，醇提物的石油醚與乙酸乙酯萃取混合物比醇提物有更強(qiáng)的促進(jìn)增殖作用，增殖率可達(dá)47％。本實(shí)驗(yàn)以成骨樣細(xì)胞UMR106的增殖為活性指標(biāo)，對乙酸乙酯萃取物的成分進(jìn)行活性追蹤和分離，得到5種單體化合物，分別測試活性后，發(fā)現(xiàn)脫皮甾酮是牛膝中促進(jìn)成骨樣細(xì)胞增殖的活性成分之一。
高昌琨[38]報(bào)道，懷牛膝水煎液分別以7.1g/kg和14.2g/kg灌胃給維甲酸所致骨質(zhì)疏松大鼠，測其自發(fā)活動數(shù)、血Ca、血P、血中AL P、骨Ca、骨P、骨密度以及骨中HP等指標(biāo)，并與模型組、對照組比較。結(jié)果大鼠的自發(fā)活動數(shù)、骨密度增加，血Ca、血P、骨Ca、骨P以及骨中HP含量增加，血中AL P活性降低。結(jié)論懷牛膝水煎液能顯著增加維甲酸所致骨質(zhì)疏松大鼠的活動能力，阻止維甲酸所造成的大鼠骨礦質(zhì)的丟失，增加其骨中有機(jī)質(zhì)的含量，提高骨密度。
高昌琨等[39]報(bào)道，制作小鼠二甲苯耳腫脹、大鼠蛋清足腫脹、大鼠瓊脂肉芽腫等炎癥模型，研究牛膝總皂苷三種劑量30、100、300mg·kg-1的抗炎作用，運(yùn)用熱板法觀察牛膝總皂苷的鎮(zhèn)痛作用，另外還觀察了牛膝總皂苷對“血瘀”大鼠血液流變學(xué)特性的影響。結(jié)果不同劑量下的牛膝總皂苷能減輕大鼠和小鼠急性炎癥反應(yīng)，降低大鼠瓊脂肉芽腫重量，延長熱板上小鼠舔足時(shí)間，改善大鼠血液流變性。結(jié)論牛膝總皂苷具抗炎鎮(zhèn)痛及活血作用。
李小川等[40]報(bào)道，采用小鼠扭體法、熱板法對懷牛膝總皂苷(Achyranthesbidentata saponins，ABS)分成大、中、小(120mg/kg、60mg/kg、30mg/kg)3個劑量進(jìn)行了鎮(zhèn)痛作用研究。結(jié)果表明ABS具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且作用強(qiáng)度與劑量呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
高曉燕等[41]報(bào)道，考察了牛膝(AchyranthesbidentataBl.)的不同提取部位對成骨樣細(xì)胞UMR106的作用。通過牛膝的醇提液及醇提液的不同提取部位和UMR106成骨樣細(xì)胞共同體外培養(yǎng)，用MTT方法檢測了各部位對細(xì)胞增殖的作用；同時(shí)考察了MTT法的實(shí)驗(yàn)條件。結(jié)果表明牛膝的醇提液及其石油醚和乙酸乙酯萃取的混和物對細(xì)胞具有較強(qiáng)的促進(jìn)增殖作用，而正丁醇層和水層對細(xì)胞增殖無影響；在MTT法中，鋪板細(xì)胞濃度、檢測波長和加入MTT后的孵育時(shí)間均影響吸光度值測定。牛膝中低極性部位可能含有直接作用于成骨細(xì)胞的活性成分。
黃芪本品為豆科植物蒙古黃芪(拉丁名Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao)或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，收載于《中國藥典》2005年版一部。劉心萍等[42]為了觀察黃芪中總黃酮對維甲酸致大鼠骨質(zhì)疏松模型的骨密度、生物力學(xué)的影響，通過維甲酸80mg/kg灌胃形成大鼠骨質(zhì)疏松模型，觀察不同劑量黃芪總黃酮對骨質(zhì)疏松大鼠雙側(cè)股骨以及脊柱骨密度、左股骨最大載荷、最大應(yīng)力、彈性摸量、屈服點(diǎn)值及能量等生物力學(xué)指標(biāo)的影響，并與強(qiáng)骨膠囊對照。結(jié)果黃芪總黃酮對維甲酸致大鼠骨質(zhì)疏松的骨密度值、最大載荷、最大效應(yīng)、屈服點(diǎn)值明顯高于模型組。結(jié)論黃芪總黃酮能提高維甲酸致骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度，增強(qiáng)抗外力沖擊的能力；其作用機(jī)制可能與其擬雌激素樣作用有關(guān)。
王永東[43]觀察黃芪含藥血清對新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞體系增殖、分化及成骨能力的影響，用3月齡SD大鼠12只，隨機(jī)分3組，分別以生理鹽水(NS)、0.5g/mL及5g/mL劑量的黃芪灌胃，取大鼠血清經(jīng)處理終稀釋成1∶20、1∶40、1∶80分別加入成骨細(xì)胞體系，進(jìn)行細(xì)胞增殖(MTT法)、ALP活性測定以及礦化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)。結(jié)果黃芪(0.5g/mL)灌胃的含藥血清在1∶80稀釋比，MTT法所測吸光度A值及ALP活性顯著高于NS對照組；黃芪(5g/mL)灌胃的含藥血清在1∶20稀釋比，MTT法所測吸光度A值及ALP活性亦顯著高于NS對照組；礦化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)兩組含藥血清均顯著高于NS對照組。結(jié)論黃芪在體內(nèi)對成骨細(xì)胞的成骨作用受藥物本身經(jīng)體內(nèi)吸收、代謝后的濃度變化調(diào)節(jié)的影響。
董曉先等[44]為了研究體外定向誘導(dǎo)大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(MSC)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，通過貼壁法分離鼠MSC，體外擴(kuò)增培養(yǎng)。中藥黃芪定向誘導(dǎo)MSC分化為類神經(jīng)元樣細(xì)胞。光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，免疫細(xì)胞化檢測神經(jīng)細(xì)胞特異性抗原標(biāo)志。結(jié)果大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞可通過貼壁法成功分離并可在體外大量擴(kuò)增。黃誘導(dǎo)90min后大部分MSC轉(zhuǎn)變?yōu)樯窠?jīng)元樣細(xì)胞，出現(xiàn)胞體和突起，免疫細(xì)胞化學(xué)染色NSE、Nestin呈陽性、FAP陰性。結(jié)論大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞可在體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細(xì)胞。
王永東等[45]觀察黃芪水提液對新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞體系增殖、分化及成骨能力的影響，取24h新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞按細(xì)胞密度1×105個/ml接種96孔培養(yǎng)板，然后將生理鹽水(NS)、黃芪低劑量(0.5g/ml)、黃芪高劑量(5g/ml)，終稀釋成1∶20，1∶40，1∶80分別加入新生大鼠顱骨成骨細(xì)胞體系，進(jìn)行細(xì)胞增殖(MTT法)、AL P活性測定以及礦化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)。結(jié)果黃芪低劑量(0.5g/ml)在1∶80稀釋比，MTT法所測吸光度A值及AL P活性顯著高于NS對照組(P＜0.01)；黃芪高劑量(5g/ml)在1∶20稀釋比，MTT法所測吸光度A值及AL P活性亦顯著高于NS對照組(P＜0.01)；礦化結(jié)節(jié)計(jì)數(shù)兩組均顯著高于NS對照組(P＜0.01)。結(jié)論黃芪在體外對成骨細(xì)胞的增殖與分化具有一定的雙向調(diào)節(jié)作用。
王立春[46]為研究黃芪復(fù)方制劑降低股骨頭缺血壞死骨內(nèi)壓的作用機(jī)理，以雞為受試對象，采用激素造模，將動物分為空白、模型、黃芪復(fù)方制劑和鉆孔減壓四組，動態(tài)觀察了6、8、10、12周的病理改變；骨內(nèi)壓變化及8周時(shí)血流變數(shù)值。結(jié)果(1)8，10周中藥組骨壓與模型組有顯著差異(P＜0.05)。(2)8周時(shí)中藥組血粘滯度與模型組有顯著差異(P＜0.01)。表明黃芪復(fù)方制劑(1)能降低升高的骨壓；(2)能降低血液粘滯度；(3)減少骨壞死的程度和范圍，促進(jìn)修復(fù)。因此，我們認(rèn)為黃芪復(fù)方制劑能夠通過降低骨內(nèi)壓治療股骨頭壞死，使其可能機(jī)制為改變與血液凝集有關(guān)因素。
秦臘梅[47]應(yīng)用UMR 106成骨細(xì)胞株，觀察通補(bǔ)強(qiáng)骨方中的四味主要藥物淫羊藿、女貞子、黃芪、大黃對成骨細(xì)胞株增殖情況的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)四種藥物在適當(dāng)濃度均能促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖。其中黃芪在低濃度(5mg L)即顯示促增殖作用，其作用強(qiáng)度與劑量無明顯聯(lián)系；淫羊藿、女貞子高濃度組(500mg L)較低濃度組(5mg L)促增殖作用有上升趨勢；大黃中濃度(100mg L)有促增殖作用，高濃度(1000mg L)有抑制成骨細(xì)胞增殖作用。
延胡索本品為罌粟科植物延胡索(拉丁名Corydalis yanhusuo W.T.Wang)的干燥塊莖，收載于《中國藥典》2005年版一部94頁。呂富華等[48]報(bào)道，延胡索粉有明顯鎮(zhèn)痛、麻醉作用。用電刺激小鼠尾巴法證明，灌胃延胡索粉有鎮(zhèn)痛作用，其效價(jià)為阿片的1/10，作用持續(xù)2小時(shí)。
綜上所述，本發(fā)明的原料組分能提高成骨細(xì)胞的活性和數(shù)量、促進(jìn)基質(zhì)鈣化、促進(jìn)骨痂生長、加快骨痂形成、消炎鎮(zhèn)痛等藥效作用。
兩面針本品為蕓香科植物兩面針(拉丁名Zanthoxylumnitidum(Roxb.)DC.)的干燥根，收載于《中國藥典》2005年版一部116頁。
自然銅本品為硫化物類礦物黃鐵礦族黃鐵礦，主含二硫化鐵(FeS2)，收載于《中國藥典》2005年版一部95頁。煅自然銅的藥理具有促進(jìn)骨折愈合作用。用X線檢查法，生物力學(xué)測定法，生物化學(xué)測定法，組織檢查法，四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)志檢查法及電子顯微鏡掃描法研究證實(shí)，自然銅能促骨折愈合[49]。在無菌條件下將家兔二前肢造成完全缺損的骨折，觀察給藥組，每天口服2ml自然銅藥液(每毫升相當(dāng)于生藥1g)，給藥5～20天，分別觀察骨痂總膠質(zhì)量，骨痂不溶性膠原量，骨痂鈣、磷含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，自然銅藥液能加快骨痂膠原合成和促進(jìn)鈣、磷沉積，從而加速骨折愈合[50]。微量元素Zn、Fe、Mr、Cu在骨折愈合中起重要作用。自然銅能使實(shí)驗(yàn)性骨折家兔的骨痂中Zn、Fe、Mr含量高于對照組，骨痂中Cu含量出現(xiàn)的高峰較對照組早一周?？梢娮匀汇~還能通過影響骨痂中的微量元素的含量來促進(jìn)骨折愈合[51]。
以自然銅為主藥的接骨散也有加強(qiáng)骨折愈合強(qiáng)度的作用，橫牽引力加強(qiáng)36％～53％；旋轉(zhuǎn)牽引力可加強(qiáng)60％[52]。含有自然銅的七厘散能使骨折患者血液中蛋白質(zhì)及銅含量及實(shí)驗(yàn)性骨折家兔骨折愈合中局部銅含量明顯增加，從而使骨折愈合提前[53]。接骨丹也能使骨折愈合，X片檢查，抗折力及病理切片發(fā)現(xiàn)接骨丹的療效較單用自然銅好[54]。
制川烏本品為川烏的炮制加工品。原植物為毛茛科植物烏頭(拉丁名Aconitum carmichaeli Debx.)的干燥母根，收載于《中國藥典》2005年版一部27頁。

具體實(shí)施例方式 實(shí)施例1 片劑分別稱取三七800g、丹參80g、續(xù)斷800g、牛膝70g、黃芪60g、延胡索600g、兩面針40g、制川烏500g、燃自然筒10g。
先取三七120g、煅自然銅粉碎成細(xì)粉；續(xù)斷、黃芪、牛膝加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過，濾液合并，濃縮成稠膏，加入乙醇沉淀，濾過，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；其余磨粉，用70％乙醇進(jìn)行滲漉，收集漉液，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；與上述干浸膏合并，制成顆粒，再與上述細(xì)粉混合，加入硬脂酸鎂混合壓片，包薄膜衣，得片劑。
實(shí)施例2 膠囊劑分別稱取三七80g、丹參900g、續(xù)斷70g、牛膝400g、黃芪700g、延胡索300g、兩面針500g、制川烏40g、燃自然筒100g。
先取三七12g、煅自然銅粉碎成細(xì)粉；續(xù)斷、黃芪、牛膝加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過，濾液合并，濃縮成稠膏，加入乙醇沉淀，濾過，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；其余磨粉，用70％乙醇進(jìn)行滲漉，收集漉液，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；與上述干浸膏合并，制成顆粒，再與上述細(xì)粉混合，加入硬脂酸鎂混合，裝入膠囊，得膠囊劑。
實(shí)施例3 丸劑分別稱取三七460g、丹參700g、續(xù)斷600g、牛膝800g、黃芪500g、延胡索50g、兩面針400g、制川烏500g、燃自然筒15g。
取三七69g、煅自然銅粉碎成細(xì)粉；續(xù)斷、黃芪、牛膝加水煎煮二次，每次2小時(shí)，濾過，濾液合并，濃縮成稠膏，加入乙醇沉淀，濾過，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；其余磨粉，用70％乙醇進(jìn)行滲漉，收集漉液，回收乙醇，濃縮成稠膏，干燥；與上述干浸膏合并，制成顆粒，再與上述細(xì)粉混合，泛制成丸或壓制成丸，干燥，得丸劑。
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權(quán)利要求
1、一種治療股骨頭壞死的藥物，其特征在于原料組分按重量比例為丹參8～90份、三七7～80份、續(xù)斷7～80份、牛膝7～80份、黃芪6～70份、延胡索5～60份、兩面針4～50份、制川烏4～50份、煅自然銅1～10份，制備成藥劑學(xué)上允許的劑型。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療股骨頭壞死的藥物，其特征在于所述制備成藥劑學(xué)上允許的劑型包括顆粒劑；片劑，如素片、糖衣片、薄膜衣片、咀嚼片、分散片、泡騰片、腸溶片、速釋片、緩釋片、控釋片；丸劑，如蜜丸、水丸、濃縮丸，滴丸、膠囊以及散劑。
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療股骨頭壞死的藥物，其特征在于在制備治療股骨頭壞死和骨折的藥物中應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療股骨頭壞死的藥物，它由丹參、三七、續(xù)斷、牛膝、黃芪、延胡索、兩面針、制川烏、煅自然銅9種原料組成，各種原料的重量配比分別為丹參8～90份、三七7～80份、續(xù)斷7～80份、牛膝7～80份、黃芪6～70份、延胡索5～60份、兩面針4～50份、制川烏4～50份、煅自然銅1～10份。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有療效顯著、藥理作用明顯、毒副作用較低、服用方便、價(jià)格適中等特點(diǎn)，具有活血化瘀、行氣止痛、補(bǔ)腎生骨，用于股骨頭壞死病癥和骨折。
文檔編號A61P19/00GK101293042SQ200810073618
公開日2008年10月29日 申請日期2008年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月13日
發(fā)明者梁永平, 農(nóng)小棉 申請人:廣西壯族自治區(qū)藥物研究所有限公司