專利名稱：野山椒根莖總生物堿的提取方法和口腔藥用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及野山椒根莖總生物堿及其提取方法，以該總生物堿作為活性成分的口腔藥用組合物，及其在治療和(或)預(yù)防蟲牙、齲齒和牙痛的藥物制備中的用途。
背景技術(shù)：
目前，可用于治療蟲牙、齲齒和牙痛的藥物以及用于預(yù)防蟲牙、齲齒和牙痛的口腔用品(如牙膏、漱口水、口香糖等)較多。但目前的藥物基本上只是對(duì)、齲齒和牙痛的發(fā)病起抑制作用，解決不了反復(fù)發(fā)病的問題，也就是只能治標(biāo)不能治本，對(duì)于較嚴(yán)重的情況，一般是用手術(shù)處理，但仍然存在復(fù)發(fā)的問題。因此，一但患了、齲齒和牙痛，即使作過藥物或手術(shù)治療，平時(shí)都需要在飲食上注意，才能盡可能地減少牙病的復(fù)發(fā)。這是目前蟲牙患者特別苦惱的事。而對(duì)于預(yù)防、齲齒和牙痛的各種口腔用品，在實(shí)際應(yīng)用中，能夠真正起到預(yù)防作用已經(jīng)很不錯(cuò)了，能起到治療作用的還未見應(yīng)用。野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)傣族語麻獻(xiàn)，在漢語中也稱為蕓香科植物野花椒，別名麻感?！段麟p版納傣藥志》所述的藥材基源生態(tài)環(huán)境生于海拔500m以下的灌叢中，亦有栽培。資源分布分布于云南西雙版納等地。采收和儲(chǔ)藏7-8月采收成熟的果實(shí)，除去雜質(zhì)，曬干根也可入藥?！吨腥A本草傣藥卷》所述性味辛；溫；有小毒；歸經(jīng)胃經(jīng)；性味根味微麻，氣香，性熱，入火、風(fēng)塔。功能主治根、莖通氣除寒，解毒，消腫止痛用于胃寒腹痛，牙痛，風(fēng)濕痹痛。現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)被鑒定的存在于野山椒根莖中的堿類化合物有根含生物堿茵芋堿(skimmianine)，加錫彌羅果堿(edulinine)，左旋-7-去羥基日巴里尼定(ribalinine)， 阿瑞羅甫堿(araliopsine) ο根皮含二氫白屈菜紅堿(dihydrochelerythrine)，氧化白屈菜紅堿(oxychelerythrine), N-乙酉先基番蕩枝堿(N-acetylanonaine), Y -崖椒堿 (Y -fagarine),白屈菜紅堿(chelerythrine),木蘭花堿(magnoflorine), 8_ 甲氧基—N—甲基二甲吡喃并喹啉酮(8-methoxy-N-methylflindersine)和木脂素芝麻素(sesamine)，還含 β-谷甾醇(β-sitosterol) ο野山椒根莖提取物同屬植物的化學(xué)成分主要有生物堿，酰胺，木脂素，揮發(fā)油等， 并篩選出具有溫中止痛，殺蟲止癢等藥理作用的活性成分，但對(duì)本種的化學(xué)成分研究尚未見到詳細(xì)報(bào)道，只對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究，分離出10種化合物其中的茵芋堿 (skimmianine)，加錫彌羅果堿(edulinine)，左旋-7-去羥基日巴里尼定(ribalinine)， 阿 卷羅甫堿(araliopsine)，二 S白屈菜紅堿(dihydrochelerythrine)，氧化白屈菜紅堿(oxychelerythrine), N-乙酉先基番蕩枝堿(N-acetylanonaine), Y _崖椒堿 (Y-fagarine),白屈菜紅堿(chelerythrine),木蘭花堿(magnoflorine)為已知生物堿，其余3個(gè)分別為8-甲氧基-N-甲基二甲吡喃并喹啉酮(8-methoxy-N-methylf lindersine) 和木脂素芝麻素(sesamine)，還含β-谷留醇(β-sitosterol)，只是經(jīng)過化學(xué)和光譜分析鑒定。茵芋堿(skimmianine)，加錫彌羅果堿(edulinine)為已知生物堿，具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛效應(yīng)和抑制神經(jīng)中樞作用，具有與溫中止痛，殺蟲止癢活性相關(guān)的內(nèi)酰氨結(jié)構(gòu)。因此改進(jìn)野山椒根莖提取物中的總生物堿的提取和純化工藝，對(duì)于更好的利用野山椒根莖提取物總生物堿具有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供以總生物堿堿類化合物為主要成分野山椒根莖提取物；本發(fā)明還提供上述野山椒根莖總生物堿的制備方法；本發(fā)明還提供包括這種野山椒根莖總生物堿以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的口腔藥用組合物；本發(fā)明還提供上述野山椒根莖總生物堿在治療和(或)預(yù)防蟲牙、齲齒和牙痛的藥物制備中的用途以及在口腔用品中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的一種野山椒根莖總生物堿的提取方法，是指采用任何方法從植物野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)中提取獲得的，以生物堿堿類化合物作為主要成分 (或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根莖生物堿是脂溶性的，通過親脂性有機(jī)溶劑，從野山椒根莖中提取獲得的堿類化合物之總重量占提取物總重量的50% …90%，提取物中各種堿類化合物之間的含量比例可以與天然植物的含量比例一致，也可以不一致，所述的堿類化合物是指具有化學(xué)結(jié)構(gòu)，屬于堿類的化合物以及其它形式的衍生物。所述的野山椒根莖作原料，采用含水或不含水的親脂性有機(jī)溶劑作提取溶劑，所述的提取及純化處理過程包括①取野山椒根莖藥材，粉碎，過篩，收集20…40目粒度的粗粉，得A品備用；②向A品中加入A品總量5⑴10倍量的60%…80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉24h ；③在35°C下熱回流，用索氏提取器反復(fù)提取3…5次，每次0. 5 - 3小時(shí)，靜置、過濾，合并濾液，澄清，得澄明提取液；④在25°C和2MPa條件下，采用平均孔徑為0. 25pm的膜對(duì)的上述澄明提取液進(jìn)行微濾，滲透通量為400⑴650L/h · m3 ；⑤再將濾過液依次通過20萬分子量超濾及200分子量納濾，棄去20萬分子量以上膜上液及200分子量納濾膜下液，收集納濾膜上液，濃縮至相對(duì)密度0.9…1.40，得濃縮液；⑥將60 %…80 %乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B
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BFI ；⑦kphadex LH-20柱色譜純化選用kphadex LH-20柱，進(jìn)行色譜純化，上樣前， 柱用兩倍柱容積的80%乙醇平衡；
⑧洗脫液先為60%乙醇，洗脫，繼而用70%乙醇洗脫，再用80%乙醇洗脫，收集 80%乙醇洗脫液；⑨濃縮得干燥品，用丙酮處理，得淡黃色粉末；⑩提取少量的總生物堿液，用kphadex LH_20吸附柱色譜鑒定生物堿有效成分。所述的親脂性有機(jī)溶劑為含水或不含水的甲醇、乙醇、丙酮之一種或幾種任意比例的混合物，其中乙醇含量為80%。所述的吸附柱色譜中的吸附劑為硅膠或氧化鋁，檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品為喹啉。在上述的總生物堿的提取方法中，較好的步驟②是向A品中加入A品總量8…10 倍量的80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉Mh ；本發(fā)明的另一方面是提供用于治療和(或)預(yù)防蟲牙、齲齒和牙痛的口腔藥用組合物，其包括有效治療量的野山椒根莖總生物堿以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的口腔藥用組合物。所述的包括野山椒根莖總生物堿以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，將提取物總生物堿按常規(guī)制劑工藝制成臨床用的噴劑、膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑。與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明是采用野山椒根莖為原料制成藥物及口腔用品，制作簡(jiǎn)單，對(duì)蟲牙、齲齒和牙痛的治療和預(yù)防效果好。1、易于制作、應(yīng)用；2、其藥物對(duì)蟲牙、齲齒和牙痛的治療效果好，痊愈率高，基本不復(fù)發(fā)3、其口腔用品不但預(yù)防效果好，還可起到比較好的治療作用的特點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明提供的一種野山椒根莖總生物堿的提取方法，是指采用任何方法從植物野山椒(Zanthoxylum simulans Hance)中提取獲得的，以生物堿堿類化合物作為主要成分 (或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根莖生物堿是脂溶性的，通過親脂性有機(jī)溶劑，從野山椒根莖中提取獲得的堿類化合物之總重量占提取物總重量的50% …90%，提取物中各種堿類化合物之間的含量比例可以與天然植物的含量比例一致，也可以不一致，所述的堿類化合物是指具有化學(xué)結(jié)構(gòu)，屬于堿類的化合物以及其它形式的衍生物。實(shí)施例1按以下步驟進(jìn)行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入56Kg的70%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；野山椒根莖原料經(jīng)粗粉碎、浸潤后，由于溶劑的流動(dòng)浸出，促使固、液兩相產(chǎn)生較高的相對(duì)運(yùn)動(dòng)速度，擴(kuò)散邊界層變得更薄，加快了藥材中溶質(zhì)向溶劑中的擴(kuò)散，提高浸出效率。③在35°C下熱回流，用索氏提取器反復(fù)提取3…5次，每次0. 5…3小時(shí)，靜置、過濾，合并濾液，澄清，得澄明提取液；
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④在25°C和2MPa條件下，采用平均孔徑為0. 25pm的膜對(duì)的上述澄明提取液進(jìn)行微濾，滲透通量為400⑴650L/h · m3 ；⑤再將濾過液依次通過20萬分子量超濾及200分子量納濾，棄去20萬分子量以上膜上液及200分子量納濾膜下液，收集納濾膜上液，濃縮至相對(duì)密度0.9…1.40，得濃縮液；由于浸出溫度較煎煮法低，既可預(yù)防藥材內(nèi)淀粉、膠體物質(zhì)過度糊化、膨脹，影響溶質(zhì)滲出，又可避免因其大量浸出而造成分離、濃縮困難；⑥將70%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；⑦kphadex LH-20柱色譜純化選用kphadex LH-20柱，進(jìn)行色譜純化，上樣前， 柱用兩倍柱容積的80%乙醇平衡；野山椒根莖總生物堿提取液中尚存在大量的靴質(zhì)、蛋白質(zhì)、淀粉、細(xì)菌、熱原等大分子物質(zhì)以及許多微粒、亞微粒和絮狀物等，它們不但沒有藥效作用，而且嚴(yán)重影響產(chǎn)品質(zhì)量，普通分離方法(如沉降、過濾等)不僅難以除盡，而且容易損耗有效成分甚至浪費(fèi)大量的有機(jī)溶媒。選擇合適的超濾膜可將上述雜質(zhì)有效除去，而又不損失有效成分、提高消毒液的澄明度和穩(wěn)定性。⑧洗脫液先為60 %乙醇，洗脫，繼而用70 %乙醇洗脫，再用80 %乙醇洗脫，收集 80%乙醇洗脫液；⑨濃縮得干燥品，用丙酮處理，得淡黃色粉末；⑩提取少量的總生物堿液，用kphadex LH-20吸附柱色譜鑒定生物堿有效成分。羥丙基葡聚糖凝膠kphadeX LH 一 20可在極性有機(jī)溶劑或他們與水組成的混合溶劑中膨潤使用。苯環(huán)上所帶的一 OH越多，極性越強(qiáng)，在kphadex LH-20上滯留的時(shí)間越長，堿性物質(zhì)比酸性或中性物質(zhì)在kphadex LH-20上滯留的時(shí)間更長。故本項(xiàng)目的中野山椒根莖總生物堿能很好地與酸性、中性成分進(jìn)行分離。按常規(guī)膠囊劑制備工藝，取提取物總生物堿90Kg，預(yù)膠化淀粉適量，將總生物堿粉碎過80目篩，備用，準(zhǔn)確稱取處方量的總生物堿及預(yù)膠化淀粉，混合均勻，填充于空心膠囊殼中，得100萬粒膠囊，每粒含總生物堿90mg?？诜?，每日2次，每次2粒。實(shí)施例2按以下步驟進(jìn)行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入50Kg的70%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實(shí)施例1，將70%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；濃縮得干燥品，用丙酮處理，得即得提取物總生物堿。按常規(guī)軟膠囊劑制備工藝，取提取物總生物堿90Kg，植物油適量，軟膠囊囊材適量，將總生物堿粉碎過80目篩，備用，準(zhǔn)確稱取處方量的總生物堿，加植物油適量，使總生物堿混懸在植物油中或與植物油混合成稠膏狀，采用軋制法，填充于較膠囊中，得100萬粒軟膠囊，每粒含總生物堿90mg?？诜咳?次，每次2粒。
實(shí)施例3按以下步驟進(jìn)行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入63Kg的80 %乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實(shí)施例1，將80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；濃縮得干燥品，用丙酮處理，得即得提取物總生物堿。按常規(guī)片劑制備工藝，取提取物總生物堿90Kg，淀粉48Kg，微晶纖維素33Kg，羧甲基淀粉鈉6. 6Kg，10% PVP乙醇液適量，硬脂酸鎂2. Ig，將總生物堿粉碎過80目蹄，備用， 準(zhǔn)確稱取處方量的總生物堿、淀粉及微晶纖維素，混勻，加10% PVP乙醇液，制軟材，將軟材用16…20目蹄，制粒，40…80°C干燥，加入處方量的羧甲基淀粉鈉及硬脂酸鎂，混勻，20目篩整粒，測(cè)顆粒含量，確定片重，壓片，包衣，得100萬片，每片含總生物堿90mg。口服，每日 2次，每次2片。實(shí)施例4按以下步驟進(jìn)行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入70Kg的80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實(shí)施例1，將80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；濃縮得干燥品，用丙酮處理，得即得提取物總生物堿。按常規(guī)顆粒劑制備工藝，取提取物總生物堿180Kg，可溶性淀粉88Kg，糖精鈉 2. 2Kg, 10% PVP乙醇液適量，將總生物堿粉碎過80目篩，備用，準(zhǔn)確稱取處方量的總生物堿、可溶性淀粉及糖精鈉，混勻，加10% PVP乙醇液，制軟材，將軟材用16 - 20目篩，制粒， 40…80°C干燥，20目篩整粒，測(cè)顆粒含量，確定每袋裝量，得100萬袋顆粒，每袋含總生物堿 ISOmgo熱水沖服，每日2次，每次1袋。實(shí)施例5按以下步驟進(jìn)行總生物堿的提取。①取野山椒根莖藥材7Kg作為原料，粉碎，過篩，收集20 - 40目粒度的粗粉，得A 品備用；②向A品中加入70Kg的80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉 24h ；以下步驟同實(shí)施例1，將80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；按常規(guī)噴劑制備工藝，取提取物總生物堿50Kg的濾液，裝入包裝瓶內(nèi)或帶有噴射頭的包裝瓶內(nèi)，每瓶100g，得到500瓶本發(fā)明的另一方面是提供用于治療和(或)預(yù)防蟲牙、齲齒和牙痛的口腔藥用組合物，其包括有效治療量的野山椒根莖總生物堿以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的口腔藥用組合物。
本發(fā)明的口腔藥用組合物所述的包括野山椒根莖總生物堿以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，將提取物總生物堿按常規(guī)制劑工藝制成臨床用的噴劑、膠囊劑、軟膠囊劑、 片劑、顆粒劑。本發(fā)明的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)如下一、急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)a、受試物——將樣品用蒸餾水配制成250mg/ml ；b、試驗(yàn)動(dòng)物——小鼠20只c、飼料——全價(jià)營養(yǎng)鼠料d、試驗(yàn)方法——將小鼠按性別分為兩組，每組十只，禁食過夜后(自由飲水)一次經(jīng)口灌胃，劑量5000mg/Kg，灌胃量0. 4ml/20go染毒后，繼續(xù)禁食3小時(shí)并觀察14天，記錄各種動(dòng)物中毒反應(yīng)和死亡數(shù)，依據(jù)化學(xué)物質(zhì)急性毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判斷該受試物的毒性級(jí)別。二、多次皮膚刺激性試驗(yàn)a、試驗(yàn)動(dòng)物——白色家兔四只，均為雄性，體重2kg⑴3kgob、飼料——全價(jià)營養(yǎng)兔料；C、試驗(yàn)方法正式實(shí)驗(yàn)前Mh，使用彎頭剪刀將動(dòng)物背部脊柱兩側(cè)毛剪掉，去毛范圍3cmX 3cm。正式實(shí)驗(yàn)——取受試物0. 5ml涂抹在動(dòng)物左側(cè)去毛皮膚上(另一側(cè)作對(duì)照)，涂抹面積2. 5cmX2. 5cm，每天涂抹一次，連續(xù)涂抹14天。從第二天開始每次涂抹前剪毛，并用清水清除殘留受試物，1小時(shí)后觀察動(dòng)物皮膚反應(yīng)，依據(jù)《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》評(píng)分。三、結(jié)果a、急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)附表為本發(fā)明的噴劑對(duì)小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種野山椒根莖總生物堿的提取方法和口腔藥用組合物，是指采用任何方法從植物野山椒根莖(Zanthoxylum simulans Hance)中提取獲得的，以生物堿堿類化合物作為主要成分(或主要功效成分)的提取物，其特征在于所述的野山椒根莖總生物堿是脂溶性的， 通過親脂性有機(jī)溶劑，從野山椒根莖中提取獲得的堿類化合物之總重量占提取物總重量的 50%…90%，提取物中各種堿類化合物之間的含量比例可以與天然植物的含量比例一致， 也可以不一致，所述的堿類化合物是指具有化學(xué)結(jié)構(gòu)，屬于堿類化合物以及其它形式的衍生物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的總生物堿的提取方法，其特征在于，用野山椒根莖作原料，采用含水或不含水的親脂性有機(jī)溶劑作提取溶劑，所述的提取及純化處理過程包括①取野山椒根莖藥材，粉碎過篩，收集20…40目粒度的粗粉，得A品備用；②向A品中加入A品總量5⑴10倍量的60%…80%乙醇作為提取溶劑，密閉浸泡野山椒根莖粉碎料粗粉24h ；③在35°C下熱回流，用索氏提取器反復(fù)提取3- 5次，每次0. 5…3小時(shí)，靜置、過濾， 合并濾液，澄清，得澄明提取液；④在25°C和條件下，采用平均孔徑為0.25pm的膜對(duì)的上述澄明提取液進(jìn)行微濾， 滲透通量為400⑴650L/h · m3 ；⑤再將濾過液依次通過20萬分子量超濾及200分子量納濾，棄去20萬分子量以上膜上液及200分子量納濾膜下液，收集納濾膜上液，濃縮至相對(duì)密度0. 9…1. 40，得濃縮液；⑥將60%…80%乙醇提取液和濃縮液混合，放置沉淀，抽濾，濾液回收甲醇后得B品；⑦kphadexLH-20柱色譜純化選用kphadex LH-20柱，進(jìn)行色譜純化，上樣前，柱用兩倍柱容積的80%乙醇平衡；⑧洗脫液先用60%乙醇，洗脫，繼而用70%乙醇洗脫，再用80%乙醇洗脫，收集80%乙醇洗脫液；⑨濃縮得干燥品，用丙酮處理，得淡黃色粉末；⑩提取少量的總生物堿液，用kphadexLH-20吸附柱色譜鑒定生物堿有效成分。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的總生物堿的提取方法，其特征在于所述的親脂性有機(jī)溶劑為含水或不含水的甲醇、乙醇、丙酮之一種或幾種任意比例的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的總生物堿的提取方法，其特征在于所述的所述的吸附柱色譜中的吸附劑為硅膠或氧化鋁，檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品為喹啉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述總生物堿的口腔藥用組合物，其特征在于，包括野山椒根莖總生物堿以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，將提取物總生物堿按常規(guī)制劑工藝制成臨床用的噴劑、膠囊劑、軟膠囊劑、片劑、顆粒劑。
全文摘要
用野山椒根莖總生物堿的提取方法和口腔藥用組合物，是以野山椒根莖為原料，取其提取物制成藥劑。本發(fā)明具有易于制作、應(yīng)用；其藥物對(duì)蟲牙、齲齒和牙痛的治療效果好，痊愈率高，基本不復(fù)發(fā)；其口腔藥物不但預(yù)防效果好，還可起到比較好的治療作用的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K125/00GK102423358SQ20111036574
公開日2012年4月25日 申請(qǐng)日期2011年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月18日
發(fā)明者邱宏亮 申請(qǐng)人:邱宏亮