專利名稱：一種治療腫瘤的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療腫瘤的組合物，具體涉及一種含有麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油的組合物。
背景技術(shù)：
麝香酮是天然麝香的主要成分，其分子式為C16H3tlO,分子量為238，其具有麝香的特殊香味，不溶于水，溶于乙醇和油類溶劑。麝香酮對一些腹水瘤、實體瘤等無明顯的抑制作用，但有研究表明，麝香酮對離體動物癌細胞有破壞作用，對動物腫瘤組織的細胞呼吸有明顯的抑制作用，而動物體內(nèi)抗腫瘤實驗未能觀察到療效。白術(shù)為多年生草本，以根莖入藥，具有健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎的功效，其中的揮發(fā)油具有抗腫瘤的作用，據(jù)研究表明，白術(shù)揮發(fā)油的抗腫瘤有效成分可能存在與白術(shù)揮發(fā)油中極小的部位，其抑瘤率較低。在現(xiàn)有技術(shù)中，只是對麝香酮和蒼術(shù)揮發(fā)油抗腫瘤的作用進行了單獨的研究，這兩者結(jié)合的抗腫瘤效果目前沒有相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療腫瘤的組合物，該組合物大大提高了抗腫瘤效果，便于推廣應(yīng)用。研究表明，單用白術(shù)揮發(fā)油具有很好的抗腫瘤作用，單用麝香酮在體內(nèi)無抑制腫瘤的作用，但是發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，在白術(shù)揮發(fā)油中加入微量的麝香酮可以提高白術(shù)揮發(fā)油的抗腫瘤作用，麝香酮與白術(shù)揮發(fā)油的復(fù)配使兩者起到了意料不到的效果，具體作用機理尚未可知。本發(fā)明具體技術(shù)方案如下
一種治療腫瘤的組合物，其特征是以白術(shù)揮發(fā)油和麝香酮為藥物有效成分，麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)量比為1:10000 100000。本發(fā)明在白術(shù)揮發(fā)油中摻加麝香酮，麝香酮的添加量非常的少，僅占白術(shù)揮發(fā)油的0. 001-0. 01%。麝香酮的加入相當(dāng)于增效劑，復(fù)合制劑在治療腫瘤方面的效果有了很大的提高。麝香酮的加入量越大其治療效果越好，考慮到麝香酮的價格很貴，因此優(yōu)選麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)量比為1:40000 70000。本發(fā)明的藥物成分為白術(shù)揮發(fā)油和麝香酮，麝香酮在市場上有賣的，直接買成品即可，白術(shù)揮發(fā)油是從白術(shù)中提取出來的，在現(xiàn)有技術(shù)中也有相關(guān)提取白術(shù)揮發(fā)油的技術(shù)公開，已經(jīng)是比較熟知的技術(shù)了，現(xiàn)今大體有三種提取白術(shù)揮發(fā)油的方法，第一種為水蒸氣蒸餾法，步驟是將白術(shù)藥粉加入4-10質(zhì)量倍的水蒸餾提取2-8h，分離揮發(fā)油，即得。第二種為有機溶劑提取法，步驟為將白術(shù)藥材粗粉加入6-16質(zhì)量倍的有機溶劑(正己烷)中，回流提取2-4次，每次1-3小時，合并提取液，減壓回收溶劑，分離揮發(fā)油，即得。第三種為超臨界萃取法，步驟為將藥材粗分適量置于萃取罐中，按CO2氣瓶一冷卻系統(tǒng)一高壓泵一萃取罐一分離器I 一分離器II循環(huán)的流程進行萃取，萃取條件為壓力15-40MPa，溫度30-60°C，時間30-120min。以上3種提取方法揮發(fā)油提取率的關(guān)系為1>2>3，且經(jīng)過成分分析和藥理學(xué)試驗證明其3種方法提取物的成分比例基本相同，抑制腫瘤效果無明顯差異。所以，生產(chǎn)中可根據(jù)實際條件，任意選擇提取方法。在得到白術(shù)揮發(fā)油和麝香酮藥物有效成分后，再根據(jù)所要制成的劑型，按照現(xiàn)有技術(shù)的指導(dǎo)，加入所需量的輔料，即可制成相應(yīng)的劑型，例如微乳劑、軟膠囊劑、微囊劑等口服劑及注射劑。其中，微乳劑的輔料可在卵磷脂、豆磷脂、泊洛沙姆、阿拉伯膠、大豆油、吐溫-80、甘油和抗氧劑中的至少一種中進行選擇；軟膠囊劑的輔料為大豆油、PEG(聚乙二醇)和抗氧劑中的至少一種；微囊劑的輔料可在明膠、阿拉伯膠、PVA (聚乙烯醇)、電解劑和固化劑中進行選擇；注射劑的輔料可在注射用水、注射用油、注射用乳化劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑中選擇。各輔料成分都是現(xiàn)有技術(shù)中常用的輔料，在此不再詳述。輔料的量滿足制劑要求即可，優(yōu)選的，藥物有效成分(白術(shù)揮發(fā)油和麝香酮的混合物)與輔料的質(zhì)量比為1:1 50。本發(fā)明在白術(shù)揮發(fā)油中摻加了微量的麝香酮得到組合物，麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油起到協(xié)同作用，經(jīng)實驗證實，麝香酮的加入大大提高了白術(shù)精油的抗腫瘤效果，所得組合物對腫瘤的治療作用比單用白術(shù)揮發(fā)油提高了很多，效果顯著，且本發(fā)明制劑制備工藝、所需設(shè)備簡單，有利于推廣大規(guī)模生產(chǎn)。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進行進一步的闡述，應(yīng)該明白的是，下述說明主要是為了解釋本發(fā)明，并不對其內(nèi)容進行限定。下述實施例中用到的白術(shù)揮發(fā)油采用水蒸汽蒸餾法提取而得，麝香酮為在市場上購得。實施例1
取生白術(shù)飲片4Kg，粉碎成粗粉，加水(5倍量)提揮發(fā)油至盡(約他)，收集揮發(fā)油，備用。以白術(shù)揮發(fā)油和麝香酮為藥物有效成分制成復(fù)合制劑，麝香酮與白術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)量比分別為 1 10000、1 20000、1 40000、1 60000、1 70000、1 100000。根據(jù)不同的需要可以將上述有效成分制成不同劑型的制劑，例如微乳劑、軟膠囊劑、微囊劑等口服劑及注射劑等。這些劑型的制備及所用的輔料在現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)很普遍，因此本領(lǐng)域的技術(shù)人員完全可以按照現(xiàn)有技術(shù)的指導(dǎo)完成不同劑型的制備。一般，藥物有效成分與輔料的質(zhì)量比為1:1 50。在本實施例中，口服微乳劑的輔料可在吐溫-80、阿拉伯膠、甘油、大豆油和抗氧劑中進行選擇，其制備過程是精密量取細1吐溫-80置于100 ml燒杯中，再加入2ml甘油、阿拉伯膠液細1和22ml純化水，攪拌均勻得到水相，精密量取麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油組合物與大豆油混合液8ml為油相緩慢注入水相中，繼續(xù)攪拌均勻，然后經(jīng)過高壓乳勻機，即得麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油組合物的微乳劑40ml。注射微乳劑的輔料可為卵磷脂、豆磷脂、泊洛沙姆、大豆油、甘油和抗氧劑中的至少一種，其制備過程是精密量取卵磷脂或豆磷脂置于100 ml燒杯中，再加入甘油適量于注射用水中至32ml，攪拌均勻得到水相，精密量取麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油組合物與大豆油混合液8ml為油相緩慢注入水相中，繼續(xù)攪拌均勻，然后經(jīng)過高壓乳勻機，即得麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油組合物的微乳劑40ml。軟膠囊劑的輔料可為大豆油、PEG (聚乙二醇)和抗氧劑中的至少一種，制備過程是內(nèi)容物為麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油組合物與大豆油和PEG的混合液，其組合物與大豆油的比為1:1. 5。囊材選用明膠甘油水(1 0. 5 0. 8)?？紤]到膠囊的穩(wěn)定性和美觀性，在膠囊殼中可使用適量的遮光劑和著色劑。微囊劑的輔料為明膠、阿拉伯膠、PVA、電解劑和固化劑中的至少一種，制備過程是以上述口服微乳劑為囊心物，以明膠和阿拉伯膠為囊材，采用復(fù)凝聚法制備得麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油組合物的微囊劑。下面以麝香酮與白術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)量比為1 :60000的復(fù)合制劑為例，研究其治療腫
瘤的作用。一、對S180肉瘤小鼠模型的抑瘤作用1.材料
1. 1實驗動物昆明種小鼠，體重18 22g，8 10周齡，雌雄各半，S180瘤種。1. 2實驗儀器電子天平、ZeissLSM510型激光共聚焦顯微鏡、AO滑動式超薄切片機、多功能顯微鏡。
1.3實驗藥品白術(shù)精油(即白術(shù)揮發(fā)油，下同)、麝香酮與白術(shù)精油組合物、注射用環(huán)磷酰胺(CTX)、生理鹽水、0. 2%戊巴比妥鈉、10%EDTANa2 TNF-Q放射免疫試劑盒、IL-2放射免疫試劑盒、SABC-FITC免疫熒光化學(xué)試劑盒。方法
2.1 S180荷瘤小鼠模型的制備
無菌條件下，取傳代第七天的S180肉瘤小鼠腹水，生理鹽水稀釋，制成2 X IO6個/ml的細胞懸液。取昆明小鼠，每只小鼠右側(cè)腋部皮下注射瘤細胞懸液0. anl，制成S180肉瘤移植性腫瘤模型。2. 2動物分組及給藥
接種24h后，將小鼠隨機分組，每組20只，稱重。第1組為模型組，給予生理鹽水灌胃；第2組為CTX (環(huán)磷酰胺)陽性對照組，給予CTX，用生理鹽水稀釋后腹腔注射(劑量IOOmg/kg)；第3組為純白術(shù)揮發(fā)油微乳組，第4組為麝香酮、白術(shù)揮發(fā)油組合物微乳小劑量組(10 μ 1/kg)，第5組為麝香酮、白術(shù)精油組合物微乳中劑量組(20 μ 1/kg)，第6組為麝香酮、白術(shù)精油組合物微乳大劑量組(40 μ Ι/kg)。白術(shù)揮發(fā)油微乳組給藥劑量為(20 μ 1/kg)。麝香酮與白術(shù)揮發(fā)油組合物各組分別按劑量要求給予相當(dāng)量的麝香酮與白術(shù)精油組合物微乳，生理鹽水組則灌胃給予等量的生理鹽水，灌胃給藥14d。2. 3樣本處理及觀察方法
S180肉瘤小鼠第15d，稱體重，0.洲戊巴比妥鈉麻醉后下腔靜脈取血，10%EDTANa2抗凝，1500r/min離心15min，取血漿，按放試劑盒說明操作、檢測TNF-α及IL-2。頸椎脫臼處死小鼠，取瘤體、胸腺，稱重，計算胸腺指數(shù)、腫瘤生長抑制率。取瘤體，10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟切片。熒光免疫組織化學(xué)法進行腫瘤凋亡相關(guān)基因bcl-2染色，共聚焦顯微鏡觀察，陽性細胞胞漿內(nèi)可見鮮艷的綠色熒光顆粒，計數(shù)表達bcl-2基因的瘤細胞數(shù)，計算陽性細胞表達百分率。SABC-FITC法免疫熒光染色，根據(jù)SABC-FITC免疫熒光化學(xué)試劑盒說明操作，ZeissLSM510型激光共聚焦掃描顯微鏡觀察，每張切片在高倍鏡下隨機觀察5個視野，P53基因表達陽性細胞的胞漿內(nèi)可見綠色熒光，計數(shù)并計算陽性細胞百分率。2. 4統(tǒng)計學(xué)處理
計量資料組間比較用SPSS14. 0統(tǒng)計軟件進行配對t檢驗，以P<0. 05為具有顯著性差
已結(jié)果
3. 1麝香酮、白術(shù)精油組合物對S180肉瘤小鼠瘤重的影響
實驗結(jié)果顯示，麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組、白術(shù)精油組和CTX對照組瘤重明顯低于模型組(P<0. 05)，麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組、CTX對照組瘤重顯著低于白術(shù)精油組(p<0.01)，但麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組之間無顯著性差異；麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組、白術(shù)精油組和CTX對照組胸腺指數(shù)明顯低于模型組(P<0. 01);麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組、CTX對照組胸腺指數(shù)顯著低于白術(shù)精油組(P<0. 01)，但麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組之間無顯著性差異。詳見于表1。 3. 2小鼠S18tl實體瘤組織細胞形態(tài)學(xué)觀察
白術(shù)精油組、麝香酮與白術(shù)精油組合物各劑量組的瘤組織、瘤細胞分布散在，其瘤體普遍小于模型組，瘤組織可見大片狀壞死；瘤細胞明顯少于模型組，且壞死區(qū)及周圍可見大量淋巴細胞、漿細胞浸潤，可見瘤細胞侵潤至肌組織淺層，但淋巴結(jié)、神經(jīng)組織、血管未見侵潤。麝香酮與白術(shù)精油組合物各劑量組瘤體普遍小于白術(shù)精油組，瘤細胞明顯少于白術(shù)精油組。CTX組瘤體雖較各實驗組小，瘤組織可見大片狀壞死，但壞死區(qū)及周圍炎細胞少見。
3. 3麝香酮、白術(shù)精油組合物對S180肉瘤小鼠TNF_a、IL_2的影響
實驗結(jié)果顯示，麝香酮和白術(shù)精油組合物三個劑量組、白術(shù)精油組和CTX對照組小鼠TNF-α含量明顯低于模型組(P<0. 05)，麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組小鼠TNF-α含量顯著低于白術(shù)精油組(P<0. 05)，但麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組之間無顯著性差異；麝香酮和白術(shù)精油組合物三個劑量組、白術(shù)精油組和CTX對照組小鼠IL-2含量明顯高于模型組(P<0. 05)，麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組小鼠IL-2含量顯著高于白術(shù)精油組(P<0. 05)，但麝香酮與白術(shù)精油組合物三個劑量組之間無顯著性差異。詳見于表2。
權(quán)利要求
1.一種治療腫瘤的組合物，其特征是以白術(shù)揮發(fā)油和麝香酮為藥物有效成分，麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)量比為1:10000-100000。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征是麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)量比為1:40000-70000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征是還包括藥學(xué)上可接受的輔料，藥物有效成分與輔料的質(zhì)量比為1:1-50。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其特征是所述劑型為微乳劑、軟膠囊劑、微囊劑等口服劑及注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其特征是微乳劑的輔料為卵磷脂、豆磷脂、泊洛沙姆、阿拉伯膠、大豆油、吐溫-80、甘油和抗氧劑中的至少一種；軟膠囊劑的輔料為大豆油、聚乙二醇和抗氧劑中的至少一種；微囊劑的輔料為明膠、阿拉伯膠、聚乙烯醇、電解劑和固化劑中的至少一種；注射劑的輔料為注射用水、注射用油、注射用乳化劑和滲透壓調(diào)節(jié)劑中的至少一種。
全文摘要
一種治療腫瘤的組合物，以白術(shù)揮發(fā)油和麝香酮為藥物有效成分，麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油的質(zhì)量比為1:10000-100000。本發(fā)明在白術(shù)揮發(fā)油中摻加了微量的麝香酮得到組合物，麝香酮和白術(shù)揮發(fā)油起到協(xié)同作用，經(jīng)實驗證實，麝香酮的加入大大提高了白術(shù)精油的抗腫瘤效果，所得組合物對腫瘤的治療作用比單用白術(shù)揮發(fā)油提高了很多，效果顯著，且本發(fā)明制劑制備工藝、所需設(shè)備簡單，有利于推廣大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號A61K31/122GK102552360SQ20121000722
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月11日
發(fā)明者牟潔, 鄭廣娟 申請人:山東醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校