專利名稱：脂質(zhì)體凝膠制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及一種脂質(zhì)體凝膠制劑，特別是丹皮酚免疫脂質(zhì)體凝膠制劑。本發(fā)明還涉及該凝膠制劑的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
增生性瘢痕(Hypertrophic scars, HS)是一種漸進(jìn)性、病理性并難以逆轉(zhuǎn)的皮膚疾病，常發(fā)生在深度創(chuàng)傷(如手術(shù)、燒燙傷)修復(fù)過程中，由大量微細(xì)血管生成、成纖維細(xì)胞增殖、膠原過度沉積導(dǎo)致真皮過度纖維化引起。醫(yī)學(xué)研究結(jié)果已表明，瘢痕增生的程度與創(chuàng)傷皮膚部位的微血管密度呈正相關(guān)，其中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelialgrowth factor, VEGF)在生理及病理血管再生中起關(guān)鍵性作用。發(fā)生組織創(chuàng)傷后，炎癥、過敏反應(yīng)、缺氧、內(nèi)分泌紊亂等因素，導(dǎo)致膠原合成與降解之間的平衡被打破，角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞大量分泌VEGF等細(xì)胞因子，這些過量的細(xì)胞因子，與相應(yīng)的受體結(jié)合后，產(chǎn)生免疫調(diào)控作用，形成無序的組織愈合反應(yīng)，最終導(dǎo)致病理性結(jié)局。尤其是VEGF與相應(yīng)受體結(jié)合后，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分化增殖和遷移，刺激血漿纖維蛋白外滲并沉積在細(xì)胞外基質(zhì)中，誘導(dǎo)大量的血管生成，這些新生血管輸送氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)、轉(zhuǎn)運(yùn)代謝產(chǎn)物，促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成過量的膠原纖維，是導(dǎo)致表皮生成異化的主導(dǎo)因素。 在增生性瘢痕的治療方案中，目前臨床常用手術(shù)切除和藥物治療手段。手術(shù)治療通常需要進(jìn)行植皮和放射線或激光照射輔助治療，且平均復(fù)發(fā)率達(dá)50%以上。治療藥物主要有類固醇類激素(局部注射或涂抹)、抗代謝藥物(局部注射或口服)和硅制劑(涂抹或噴霧)，其中激素類藥物顯效快，但長期應(yīng)用會(huì)出現(xiàn)局部副作用和全身反應(yīng)，如皮膚萎縮、局部毛細(xì)血管擴(kuò)張及色素沉著等；抗代謝藥物一般為抗癌制劑，毒副作用突出，影響正常皮膚組織細(xì)胞的代謝和活性；硅制劑無副作用且病人順從性好，但只對(duì)保持壓力的部位(如四肢)有效。有鑒于此，有必要提供一種治療增生性瘢痕的制劑，其既能夠抑制血管過度增生及膠原纖維過快沉積，又不影響正常皮膚組織和細(xì)胞的代謝和活性；避免使用抗瘢痕增生藥物引起的并發(fā)癥等副作用，從而既能抑制新生血管、組織纖維過度增殖又降低甚至消除全身毒副反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種用于治療增生性瘢痕的脂質(zhì)體凝膠制劑，所述脂質(zhì)體凝膠制劑包括脂質(zhì)體、凝膠材料和甘油，所述脂質(zhì)體包封有丹皮酚并且在表面通過聚乙二醇結(jié)合有血管內(nèi)皮生長因子抗體。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述血管內(nèi)皮生長因子抗體為貝伐單抗，其連接在聚乙二醇長鏈的自由端。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述貝伐單抗是通過貝伐單抗-聚乙二醇-二油酰磷脂酰乙醇胺而結(jié)合到脂質(zhì)體表面的。
在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)體是由選自蛋黃卵磷脂、腦磷脂、肌醇磷脂、絲氨酸磷脂、核苷酸磷脂、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、氫化大豆卵磷脂、十六烷基磷脂酰膽堿中的一種或多種磷脂組成的。優(yōu)選地，所述脂質(zhì)體是由蛋黃卵磷脂和氫化大豆卵磷脂中的一種或兩者的混合物組成的。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，各種磷脂材料的相變溫度不同，制備溫度需高于相變溫度。實(shí)驗(yàn)優(yōu)選使用蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂中的一種或兩者的混合物。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述凝膠材料選自泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、卡波姆934和卡波姆980中的一種或多種。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述脂質(zhì)體的微粒的粒徑為50至220 nm。本發(fā)明另一方面提供一種用于治療增生性瘢痕的脂質(zhì)體凝膠制劑的制備方法，本發(fā)明人從有機(jī)溶劑注入法、凍融法、薄膜蒸發(fā)法、主動(dòng)載藥法等方法中進(jìn)行篩選脂質(zhì)體 制備方法，發(fā)現(xiàn)其中有機(jī)溶劑注入法最為適宜工業(yè)化生產(chǎn)，且制成的脂質(zhì)體溶液粒徑適宜(50 220nm)，包封率較高(>70%)。本發(fā)明提供的方法包括以下步驟(a)將丹皮酚用乙醇或乙醚溶解，加入磷脂材料、膽固醇、Avastin-PEG-DOPE，攪拌使各成分溶解，得到澄清透明溶液；(b)通過具有細(xì)孔徑的針頭或管道以液流方式將步驟(a)得到的澄清透明溶液注入到pH調(diào)節(jié)劑水溶液中，同時(shí)攪拌；(c)通入N2以去除大部分有機(jī)溶劑；(d)將步驟(c)所得溶液超聲波粉碎或高壓均質(zhì)，得到脂質(zhì)體溶液；和(e)將高分子凝膠材料加入所述脂質(zhì)體溶液中，溶脹完全后，力口入甘油，研磨均勻即得。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，在上述方法中，丹皮酚磷脂材料膽固醇Avastin-PEG-DOPE :凝膠材料甘油的質(zhì)量比為20 60 :300 700 :100 400 :10 30 1000 5000 :100 500，優(yōu)選質(zhì)量為比 30 50 :400 600 :200 300 :15 25 :2000 4000 200 400，最優(yōu)選為 40 :500 :250 20 :3000 :300。通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，膽固醇可以提高脂質(zhì)雙層膜的穩(wěn)定性，但在某些有機(jī)溶劑(如乙醇)中溶解度不佳，含量過高導(dǎo)致形成不了澄明溶液。Avastin-PEG-DOPE可明顯增加藥物的皮膚靶向性能，量少達(dá)不到靶向性能，量多導(dǎo)致脂質(zhì)體粒徑過大。凝膠材料可以提高藥物的透皮效率，但是濃度過高，會(huì)導(dǎo)致粘度增大，無法形成流動(dòng)性較好的凝膠制劑。所述血管內(nèi)皮生長因子抗體起皮膚主動(dòng)靶向作用。丹皮酚為難溶性藥物，穩(wěn)定性較差，加上瘢痕增生部位結(jié)締組織加厚，透皮速率相對(duì)較低，制成脂質(zhì)體制劑可以改善溶解性、穩(wěn)定性及透過率等問題。但是，普通脂質(zhì)體透過角質(zhì)層進(jìn)入真皮組織后，藥物分布較廣泛，且較難避免全身作用，因而選用免疫脂質(zhì)體。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述pH調(diào)節(jié)劑的水溶液的溫度為50至60°C。所述pH調(diào)節(jié)劑是磷酸鹽緩沖系統(tǒng)，緩沖系統(tǒng)的PH值與真皮層(7. 35-7. 45)相近。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，步驟(b)中所述的注入的速度為2至10%體積/分鐘，優(yōu)選4-8%體積/分鐘，最優(yōu)選5%體積/分鐘。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，步驟(b)中所述攪拌的速度為100至500轉(zhuǎn)/分鐘(rpm)，優(yōu)選200至400 rpm,最優(yōu)選300rpm。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，步驟(d)中所述超聲波粉碎或高壓均質(zhì)的次數(shù)為1-6次，優(yōu)選2-4次，最優(yōu)選3次。
本發(fā)明再一方面提供本發(fā)明的脂質(zhì)體凝膠制劑在制備治療增生性瘢痕的藥物中的用途。本發(fā)明的脂質(zhì)體凝膠制劑臨床應(yīng)用時(shí)直接貼敷在瘢痕增生部位，尤其是手術(shù)、燒燙傷后、沒有或兼有炎癥的深度創(chuàng)傷部位。由于該丹皮酚透皮凝膠制劑應(yīng)用人體生理相容性好的磷脂等材料包封藥物，有效改善丹皮酚水溶性差、穩(wěn)定性差的問題。將VEGF抗體修飾脂質(zhì)體表面，利用脂質(zhì)體載體的促進(jìn)滲透作用，將脂質(zhì)微粒透過表皮進(jìn)入真皮層，定向結(jié)合病變皮膚部位VEGF受體，同時(shí)釋放包封藥物，實(shí)現(xiàn)藥物在瘢痕增生部位的定位滯留。與報(bào)道的其他抗瘢痕增生藥物制劑或治療方案相比，復(fù)發(fā)率低，降低毒副作用發(fā)生率，并可應(yīng)用于身體任何瘢痕增生的部位。 此外，本發(fā)明提供的用于治療增生性瘢痕的脂質(zhì)體凝膠制劑的制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)1)制劑無有毒溶劑殘留，不含可能引起皮膚刺激性或其他不良反應(yīng)的輔料；2)與市場上現(xiàn)售的抗瘢痕增生藥物相比，毒副作用小，病人順應(yīng)性好，透皮速率理想，有效調(diào)節(jié)皮膚免疫細(xì)胞因子；3)制備技術(shù)可工業(yè)化實(shí)施，制成的脂質(zhì)體凝膠粘度適宜，穩(wěn)定性好，符合藥典要求。


圖I是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中脂質(zhì)體凝膠制劑形成過程中脂質(zhì)體微粒的透射電鏡圖，從圖中可看出微粒大小均一，外緣呈圓形，形態(tài)規(guī)整。圖2是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中脂質(zhì)體凝膠制劑形成過程中脂質(zhì)體粒徑分布圖，可見平均粒徑為約120 nm，符合正態(tài)分布。圖3是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中丹皮酚脂質(zhì)體凝膠制劑與常規(guī)丹皮酚凝膠的體外釋藥曲線，其中D代表本發(fā)明的脂質(zhì)體凝膠制劑； 代表常規(guī)凝膠，可見本發(fā)明的脂質(zhì)體凝膠制劑的釋藥曲線明顯優(yōu)于常規(guī)的丹皮酚凝膠。圖4是本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中丹皮酚脂質(zhì)體凝膠制劑抑制人體血管內(nèi)皮細(xì)胞(HVEC)的抑制情況示意圖，可見本發(fā)明的凝膠制劑對(duì)HVEC有明顯的抑制效果，并且在5至8 mg/mL的濃度時(shí)顯示出較好的效果。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例以及測試?yán)敿?xì)描述本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解的是，這些實(shí)施例僅是對(duì)本發(fā)明的原理的示例性闡釋，不應(yīng)作為對(duì)本發(fā)明的限制?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)已證實(shí)，丹皮酚能抑制細(xì)胞內(nèi)O2自由基產(chǎn)生，將皮膚中沉積色素還原褪色，具有良好的改善創(chuàng)面愈合作用。體外的實(shí)驗(yàn)還表明，丹皮酚能降低人體血管內(nèi)皮細(xì)胞中的VEGF水平，抑制微血管增殖。同時(shí)，伴隨瘢痕增生早期發(fā)生的炎癥同樣不可忽視，炎癥細(xì)胞釋放組織胺等成分，常引發(fā)皮膚紅腫、疼痛及表皮修復(fù)異常，甚至導(dǎo)致手術(shù)切除治療的失敗。丹皮酚能顯著抑制毛細(xì)血管通透性的提高，減少炎癥組織中PGE2的含量。因此，將丹皮酚應(yīng)用于增生性瘢痕的藥物治療方案可同時(shí)發(fā)揮抑制VEGF水平及改善炎癥的作用。本發(fā)明提供的脂質(zhì)體凝膠制劑包括脂質(zhì)體、凝膠材料和甘油等，該脂質(zhì)體包封有丹皮酚并且在表面通過聚乙二醇結(jié)合有血管內(nèi)皮生長因子抗體。在本發(fā)明的具體實(shí)施方式
中，所述血管內(nèi)皮生長因子抗體可為與血管內(nèi)皮生長因子特異性結(jié)合的貝伐單抗(Avastin)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以預(yù)期到，可以選擇與血管內(nèi)皮生長因子特異性結(jié)合的其他物質(zhì)來結(jié)合到脂質(zhì)體表面，以實(shí)現(xiàn)靶定作用。在優(yōu)選的實(shí)施方式中，本發(fā)明提供Avastin-PEG-DOPE作為制備本發(fā)明脂質(zhì)體凝膠制劑的原料。當(dāng)然，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以預(yù)期，也可使用Avastin-PEG-DSPE作為制備本發(fā)明脂質(zhì)體凝膠制劑的原料，它們的原理大致相同。在制備本發(fā)明的脂質(zhì)體凝膠制劑之前，需要合成Avastin-PEG-DOPE，其示例性合成工藝如下所示。將32iimol DOPE溶于氯仿中，配置成50mg/ml溶液，加入80 y L三乙胺，加入PEG-(PNP)2氯仿液(Ig — 5ml)，氬氣保護(hù)下室溫?cái)嚢璺跤^夜。減壓蒸發(fā)氯仿，在NaCl溶 液(0. 15mol/L,鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2. 0)中水浴超聲得到pNP-PEG-DOPE膠束，用S印hadex柱分離純化，冷凍干燥，氯仿萃取pNP-PEG-DOPE，-80°C保存。合成pNP-PEG_D0PE反應(yīng)如下所示。
權(quán)利要求
1.一種用于治療增生性瘢痕的脂質(zhì)體凝膠制劑，所述脂質(zhì)體凝膠制劑包括脂質(zhì)體、凝膠材料和甘油，所述脂質(zhì)體包封有丹皮酚并且在表面通過聚乙二醇結(jié)合有血管內(nèi)皮生長因子抗體。
2.如權(quán)利要求I所述的脂質(zhì)體凝膠制劑，其中所述血管內(nèi)皮生長因子抗體為貝伐單抗，其連接在聚乙二醇長鏈的自由端。
3.如權(quán)利要求2所述的脂質(zhì)體凝膠制劑，其中所述貝伐單抗是通過貝伐單抗-聚乙二醇-二油酰磷脂酰乙醇胺而結(jié)合到脂質(zhì)體表面的。
4.如權(quán)利要求I或2或3所述的脂質(zhì)體凝膠制劑，其中所述脂質(zhì)體是由選自蛋黃卵磷月旨、腦磷脂、肌醇磷脂、絲氨酸磷脂、核苷酸磷脂、大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、氫化大豆卵磷脂、十六烷基磷脂酰膽堿中的一種或多種磷脂組成的。
5.如權(quán)利要求I或2或3所述的脂質(zhì)體凝膠制劑，其中所述凝膠材料選自泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、卡波姆934和卡波姆980中的一種或多種。
6.如權(quán)利要求I所述的脂質(zhì)體凝膠制劑，其中所述脂質(zhì)體的微粒粒徑為50至220nm。
7.一種用于治療增生性瘢痕的脂質(zhì)體凝膠制劑的制備方法，所述方法包括 (a)將丹皮酚用乙醇或乙醚溶解，加入磷脂材料、膽固醇、Avastin-PEG-DOPE，攪拌使各成分溶解，得到澄清透明溶液； (b)通過具有細(xì)孔徑的針頭或管道以液流方式將步驟(a)得到的澄清透明溶液注入到PH調(diào)節(jié)劑水溶液中，同時(shí)攪拌； (c)通入N2以去除大部分有機(jī)溶劑； (d)將步驟(c)所得溶液超聲波粉碎或高壓均質(zhì)，得到脂質(zhì)體溶液；和 (e)將高分子凝膠材料加入所述脂質(zhì)體溶液中，溶脹完全后，加入甘油，研磨均勻即得。
8.如權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)體凝膠制劑，其中所述pH調(diào)節(jié)劑的水溶液的溫度為50至60。。。
9.如權(quán)利要求7所述的脂質(zhì)體凝膠制劑，其中步驟(b)中所述的注入的速度為2至10%體積/分鐘。
10.權(quán)利要求I所述的脂質(zhì)體凝膠制劑在制備治療增生性瘢痕的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于治療增生性瘢痕的脂質(zhì)體凝膠制劑，所述脂質(zhì)體凝膠制劑包括脂質(zhì)體、凝膠材料和甘油，所述脂質(zhì)體包封有丹皮酚并且在表面通過聚乙二醇結(jié)合有血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)抗體。本發(fā)明同時(shí)提供該凝膠制劑的制備方法和用途。該凝膠制劑應(yīng)用人體生理相容性好的磷脂等材料包封藥物，有效改善丹皮酚水溶性差、穩(wěn)定性差的問題。將VEGF抗體修飾脂質(zhì)體表面，利用脂質(zhì)體載體的促進(jìn)滲透作用，將脂質(zhì)微粒透過表皮進(jìn)入真皮層，定向結(jié)合病變皮膚部位VEGF受體，同時(shí)釋放包封藥物，實(shí)現(xiàn)藥物在瘢痕增生部位的定位滯留。與報(bào)道的其他抗瘢痕增生藥物制劑或治療方案相比，復(fù)發(fā)率低，降低毒副作用發(fā)生率，并可應(yīng)用于身體任何瘢痕增生的部位。
文檔編號(hào)A61K31/12GK102697705SQ20121001489
公開日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2012年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月18日
發(fā)明者時(shí)軍 申請(qǐng)人:廣東藥學(xué)院