本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種止血材料及其制備方法。

背景技術(shù)：

臨床實(shí)踐的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示受傷或術(shù)后無法控制的出血是造成死亡的主要原因，在醫(yī)療現(xiàn)場止血手段是非常重要的，在止血以及完全止血之前，縮短止血時(shí)間與減少失血量都非常重要。如果不能完全止血，手術(shù)中出血?jiǎng)t會(huì)影響視野，使手術(shù)的難度增加，手術(shù)后出血?jiǎng)t容易感染，導(dǎo)致手術(shù)后護(hù)理困難，甚至出現(xiàn)再次手術(shù)的情況。近年來醫(yī)用可吸收止血材料引起了各國醫(yī)學(xué)界和產(chǎn)業(yè)界的高度重視，許多大型醫(yī)藥公司都力圖研制開發(fā)出自己的新型止血材料，如奧地利林茨市hafslundnycomed醫(yī)藥公司研制開發(fā)的taehocomd可吸收創(chuàng)面止血封固劑、gelfix止血材料以及surgieel再生纖維素止血材料等，目前常用的可吸收止血材料有纖維蛋白膠、明膠海綿、氧化纖維素、微纖維膠原、殼聚糖及藻酸鈣纖維等，它們的作用機(jī)理和使用方法不盡相同，止血效果也有差別?，F(xiàn)有技術(shù)中常用的止血方法包括(1)用機(jī)械手段的止血方法，(2)加速局部血凝固的止血方法。在使用機(jī)械方法例如綁扎或縫合不能有效止血的情況下，通常需要使用止血材料用于局部止血。而可吸收止血材料在各種外科手術(shù)中，可以直接減少機(jī)體失血從而有效維持血容量，避免全身凝血藥物使用所帶來的不良反應(yīng)，從而減少輸血及手術(shù)時(shí)間；減少術(shù)后滲出、降低并發(fā)癥，因此可吸收止血材料的應(yīng)用與研發(fā)就受到各國醫(yī)學(xué)界和產(chǎn)業(yè)界的高度重視。目前國內(nèi)外已上市的可吸收止血材料有纖維蛋白膠、明膠海綿、氧化纖維素、改性淀粉、殼聚糖及藻酸鈣纖維等。

可溶性止血紗布，在國外又稱速即紗surgicel，是一種再生氧化纖維編織紗塊，屬于羧甲基纖維素類止血材料。surgicel貼敷后10s即于接觸處快速溶解，1-3min創(chuàng)面滲血逐漸減少至停止變?yōu)槟z體，此時(shí)黏附力變強(qiáng)，但與活動(dòng)性出血?jiǎng)?chuàng)面的黏附力較差，止血時(shí)間的長短與創(chuàng)面滲血量、出血量及創(chuàng)面部位、個(gè)體差異有關(guān)。伍尚敏研究結(jié)果顯示使用surgicel術(shù)后觀察傷口及創(chuàng)面無再出血、滲血、感染、液化及異物反應(yīng)，周圍無紅腫硬結(jié)和皮疹。留置引流的傷口，引流液無特殊。取皮區(qū)于兩周打開，發(fā)現(xiàn)貼敷surgicel處較傳統(tǒng)凡士林油紗覆蓋處，表皮愈合光整。對(duì)手術(shù)傷口的愈合無明顯影響，均未發(fā)現(xiàn)過敏、感染等不良反應(yīng)。

mnagamatsu等在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的形成研究中發(fā)現(xiàn)，不但會(huì)影響傷口愈合，而且會(huì)通過一種彌漫性化學(xué)機(jī)理引起神經(jīng)損傷。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示氧化纖維素的酸性可能引起神經(jīng)纖維變性，應(yīng)避免對(duì)外圍神經(jīng)直接使用大量氧化纖維素。

steveer等對(duì)氧化纖維素材料進(jìn)行改良研制了一種鈣改性的氧化纖維素止血?jiǎng)摦a(chǎn)品不但生物吸收性良好而且止血作用優(yōu)于氧化纖維素。氧化纖維素和氧化再生纖維素的吸收時(shí)間隨用量和吸收的血量多少，以及局部組織的性質(zhì)而定，一般為3-6周。亦有報(bào)道氧化再生纖維素在骨腔及顱內(nèi)由于吸收血液使體積膨脹而產(chǎn)生壓迫神經(jīng)癥狀。氧化纖維素有很強(qiáng)的吸水性，潮濕因素有損其止血作用，使用時(shí)應(yīng)保持手套、器械干燥光滑。

殼聚糖(chitosans)具有止血、促進(jìn)血管內(nèi)皮生長、使肌原纖維代替膠原纖維的作用，在體內(nèi)可被完全吸收。殼聚糖是來源于海洋的天然高分子化合物，是天然的動(dòng)物性食物纖維。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明其無任何急性和長期毒性，安全性相當(dāng)于砂糖(ld為16g/kg)。殼聚糖是甲殼質(zhì)脫乙?；某跫?jí)衍生物，是一種多聚糖物質(zhì)，化學(xué)名稱為b(1-4)-2-氨基-2-脫氧-d-葡聚糖。殼聚糖的基本單位是葡萄糖胺，而葡萄糖胺是人體內(nèi)存在的物質(zhì)，因此，殼聚糖與人體細(xì)胞有良好的親和性，無排斥反應(yīng)，生物相容性好，可以生物降解，并有止血作用。殼聚糖的止血性在于殼聚糖帶有一定量的電荷，它的分子可以直接將創(chuàng)面上的紅細(xì)胞連接在一起，促使血液凝固，從而達(dá)到止血效果。此外，還有抑制多種細(xì)菌和真菌生長的作用，由殼聚糖做成的創(chuàng)面敷料還具有吸水透氧性，使得敷料下的創(chuàng)面組織可以得到足夠的氧分壓，有利于上皮細(xì)胞從周圍爬行，抑制成纖維細(xì)胞的生長的功能，所有這些特點(diǎn)都賦予它作為創(chuàng)面止血材料的良好性能。但是，由于殼聚糖本身止血作用有限，對(duì)于廣泛出血?jiǎng)?chuàng)面的止血效果不很理想，常采用復(fù)合其他止血?jiǎng)┓椒ㄈ缒蜃?、氯化鈣等。趙宏霞等利用膠原蛋白和殼聚糖制備了復(fù)合膜，大大降低了止血海綿的成本；且該復(fù)合膜止血作用良好，也是一種較好的止血材料。

腦、腎臟、肝臟、脾臟等實(shí)質(zhì)性臟器創(chuàng)面出血的治療是外科領(lǐng)域面臨的難題，國內(nèi)外許多大型制藥公司都力圖研發(fā)出止血迅速，并且不影響臟器功能的可吸收性止血材料。目前常用的可吸收止血材料有纖維蛋白膠、明膠海綿、氧化纖維素、微纖維膠原、殼聚糖和微孔多聚糖等。其中來源于淀粉的saph是純化的植物淀粉經(jīng)過特殊工藝制成的球狀微小顆粒，內(nèi)有多個(gè)孔道，且孔徑基本均一，具有很強(qiáng)的吸水性，能迅速吸收血液中的水分，并將血液中體積大于孔道孔徑的有形成分(如血小板、紅細(xì)胞、血蛋白、凝血酶和纖維蛋白等)聚集在顆粒表面，形成一種凝膠狀混合物，達(dá)到即可止血的作用；同時(shí)通過使血液濃縮，加速內(nèi)源性凝血過程，縮短凝血時(shí)間，形成局部凝血塊，最終形成纖維蛋白凝塊，而產(chǎn)生快速止血作用。

白芨多糖是一種安全、有效的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑、抗血管生成藥物以及傳統(tǒng)的單純tac治療。在治療潰瘍型結(jié)腸炎、手術(shù)中止血、急性上消化道大出血以及促進(jìn)傷口皮膚愈合等方面，也有著廣闊的應(yīng)用空間。作為一種天然高分子材料，白芨多糖是極有發(fā)展前途的生物敷料材料，具有良好的生物相容性和生物可降解性。以明膠和白芨膠為支架材料把中藥提取物復(fù)合到其中，通過冷凍干燥法制備海綿狀多孔材料，空隙分布均勻，互相連通，用于培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞，能夠使細(xì)胞更好地黏附生長。白芨多糖能增強(qiáng)血小板第三因子活性，顯著縮短凝血時(shí)間及凝血酶原形成時(shí)間，抑制纖維蛋白溶酶活性，對(duì)局部出血有止血作用，對(duì)實(shí)質(zhì)性器官(肝、脾)、肌肉血管出血等外用止血效果頗好。另外蘆薈可通過促進(jìn)創(chuàng)面組織的膠原更新來影響創(chuàng)面的愈合；魔芋葡甘露聚糖又稱魔芋多糖，是一種以黏液狀葡聚糖粒子形式存在于魔芋球莖中的高分子水溶性多糖，含量高達(dá)55％以上，也有很好的止血作用。

中藥涼血止血藥物中的多糖成分也有很好的止血作用，比如：地榆多糖、蒲黃多糖、茜草多糖、仙鶴草多糖以及苧麻根多糖等。

上述的止血材料雖然能起到一定的止血作用，但在臨床應(yīng)用上仍然存在一些問題。例如，纖維蛋白膠在臨床手術(shù)止血中應(yīng)用較為廣泛，但纖維蛋白膠成分屬于血液制品，存在抗原性和病毒性疾病傳播的危險(xiǎn)，其應(yīng)用安全性受到一定的質(zhì)疑，且成本較高；明膠海綿的創(chuàng)面組織附著力較差，容易破裂和脫落，對(duì)于較大的出血其止血效果欠佳；氧化纖維素較疏松，被機(jī)體吸收快，但可能導(dǎo)致再出血，且其產(chǎn)生的高酸性環(huán)境會(huì)通過一種彌漫性化學(xué)機(jī)理引起神經(jīng)損傷；殼聚糖、羧甲基殼聚糖、海藻酸、改性淀粉等屬于天然多糖，在生產(chǎn)上存在批次穩(wěn)定性差、質(zhì)控困難等問題。因此，開發(fā)安全性更好，止血效果更佳的止血材料勢在必行。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一在于提供一種止血材料。

本發(fā)明的另一目的在于提供所述止血材料的制備方法。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了下述技術(shù)方案：

所提供的止血材料，即一種使用動(dòng)物真皮制備的微纖維膠原止血材料，微纖維膠原產(chǎn)品和血液的混合物具有足夠的抗拉強(qiáng)度以抵抗纖維分離進(jìn)而密封傷口，具有良好的止血性能，而且具有優(yōu)良的生物相容性，在體內(nèi)完全降解吸收，能應(yīng)用于體內(nèi)廣泛的部位；另外，生產(chǎn)上易于加工、滅菌及質(zhì)量控制。

優(yōu)選地，所述止血材料為微纖維膠原止血材料，其制備方法包括下述步驟：

(1)原料處理：使用硫化鈉4wt％-6wt％，乙醇濃度為40vol％脫毛。常規(guī)試驗(yàn)脫毛時(shí)候，硫化鈉4wt％-12wt％的濃度，4wt％-6wt％濃度過低，脫毛過慢且效果不好，使用濃度過高則會(huì)對(duì)皮膚造成損傷，本發(fā)明中用于脫毛的硫化鈉濃度范圍為4wt％-6wt％，乙醇濃度為40vol％，可以在硫化鈉較低的濃度下達(dá)到很好的脫毛效果；

(2)切碎、纖維化：將上述處理過的原料用切割或研磨機(jī)將膠原制成粗纖維制品；

(3)溶脹控制：膠原進(jìn)行機(jī)械粉碎或暴露在液體介質(zhì)中時(shí)能為氫鍵提供更多的結(jié)合位點(diǎn)，這樣就導(dǎo)致了材料干燥時(shí)會(huì)角質(zhì)化從而難以解聚成纖維或膨松化?？梢允褂糜袡C(jī)液體與水混溶作為水溶液，如低分子量醇、丙酮及類似物，如甲醇，乙醇，異丙醇，丁酮，丙酮等，有機(jī)液體與水比例從9：1至1：1，優(yōu)選3：1的比例。其中，水的比例過高時(shí)，膠原纖維溶脹會(huì)為氫鍵提供過多的結(jié)合位點(diǎn)從而導(dǎo)致致密化。過度角質(zhì)化和/或致密化會(huì)使得隨后的解聚與蓬松化難以達(dá)到所需的堆密度及表面積；

(4)干燥：采用抽真空氮?dú)獗Ｗo(hù)加熱干燥或者冷凍真空干燥的方法制得膠原纖維束，避免干燥過程中膠原被氧化；

(5)解聚、蓬松：將得到的纖維束使用錘磨機(jī)進(jìn)行處理得到微纖維膠原產(chǎn)品。微纖維化膠原及其衍生物具有足夠的止血及粘合性能；

(6)微纖維膠原材料通過co⁶⁰25kg劑量輻照滅菌，可應(yīng)用于臨床。

優(yōu)選地，加入去垢劑，可在上述步驟(1)-(3)中任一項(xiàng)所述的混合溶液中加入去垢劑，以達(dá)到有效去脂、去雜蛋白及降低免疫原性的目的。去垢劑的選擇，主要選用對(duì)蛋白質(zhì)變性作用影響較小的中性去垢劑，即非離子表面活性劑，有聚乙二醇類：如peg200；多元醇類表面活性劑：如山梨醇、司盤類和吐溫類；優(yōu)先使用吐溫80。

優(yōu)選地，可在上述步驟(1)-(3)中任一項(xiàng)所述的混合溶液中加入酸，以達(dá)到低ph條件下的充分溶脹，使去脂去蛋白更有效；保證止血材料的粘合性能。與含酸的混合溶液處理的時(shí)間應(yīng)延長，以使酸和膠原充分反應(yīng)。纖維膠原分散過程中使用到的水溶液需含有一定量的酸，其中所述纖維化膠原分散摻入。酸含量約為與膠原結(jié)合所需酸的理論化學(xué)計(jì)量的50wt％-90wt％，優(yōu)選60wt％。分散膠原與酸充分反應(yīng)后進(jìn)行漿化與洗滌(水-有機(jī)溶劑混合液)得到上述的膠原鹽。膠原鹽的制備，鹽酸是優(yōu)選的酸，因其成本低廉并易于控制。其他無機(jī)或有機(jī)酸，諸如硫酸，氫溴酸，磷酸，氰基乙酸，乙酸，檸檬酸和乳酸均可。硫酸難于控制。檸檬酸與鹽酸類似。“易于控制的”指膠原纖維的溶脹和水解控制，以防止材料的快速降解為水溶性產(chǎn)物。

膠原產(chǎn)品的預(yù)期用途的適用性可通過體外“hat檢測”或“止血粘合檢測”。為使產(chǎn)品表現(xiàn)出所需的性質(zhì),最好使它含有至少5％的≤1mm有效長度的纖維以及含有不超過10％的＞12mm效長度的纖維。其中，短纖維(≤1mm)的比例低于下限值時(shí)，長纖維會(huì)發(fā)生聚集，止血及粘合性能均會(huì)有所損失。短纖維的比例過高時(shí)，粘合性能會(huì)有所損失。纖維長度分布和蓬松度由堆積密度不超過40kg/m³來保證。堆密度通過將纖維膠原未經(jīng)任何壓縮步驟加入100毫升量筒中稱重測得。

本發(fā)明的微纖維膠原產(chǎn)品可由任何未變性天然膠原或脫灰膠原制備，如，生皮，腸，腱，軟骨或其他高纖維化膠原材料，切碎更易處理。膠原最好在濕/未經(jīng)干燥處理過的狀態(tài)，如果經(jīng)干燥處理，最好將變性降低到最小程度。滿意的原料為新鮮牛皮、小牛皮，鹽漬牛皮，濕鹿皮，豬皮，羊皮以及常規(guī)使用的用于制造皮革的山羊皮。首選原料是未經(jīng)干燥的牛皮或從牛皮等動(dòng)物皮制成的膠原。

更優(yōu)選地，本發(fā)明提供了一種微纖維膠原止血材料，其通過下述方法制備，所述方法包括下述步驟：原料處理時(shí)加入乙醇，后續(xù)步驟使用去垢劑和酸。

優(yōu)選地，所述制備方法包括下述步驟：

(1)原料處理：使用4wt％-6wt％硫化鈉，40vol％乙醇為動(dòng)物皮脂脫毛；(2)切碎、纖維化：將上述處理過的原料用切割或研磨機(jī)將膠原制成粗纖維制品；(3)溶脹控制：將步驟(2)的粗纖維制品溶于有機(jī)溶劑與水的混合溶液；(4)干燥；(5)解聚、蓬松：將得到的纖維束使用錘磨機(jī)進(jìn)行處理得到微纖維膠原產(chǎn)品；(6)滅菌：co⁶⁰25kg劑量輻照滅菌；

優(yōu)選在步驟(1)～(3)任一步驟中加入去垢劑和/或酸。

優(yōu)選地，步驟(3)中有機(jī)溶劑為低分子量醇、丙酮及類似物，優(yōu)選甲醇，乙醇，異丙醇，丁酮，丙酮，有機(jī)溶劑與水的體積比為9：1至1：1，優(yōu)選3：1；所述步驟(4)中的干燥優(yōu)選真空氮?dú)獗Ｗo(hù)加熱干燥或者冷凍真空干燥。

優(yōu)選地，所述去垢劑選自非離子表面活性劑或多元醇類表面活性劑，優(yōu)選peg200、山梨醇、司盤類和吐溫；所述酸選自無機(jī)酸或有機(jī)酸，優(yōu)選鹽酸、硫酸、氫溴酸、磷酸、氰基乙酸、乙酸、檸檬酸或乳酸。

所述的微纖維膠原止血材料，可制成膜片、紗布，用于醫(yī)學(xué)手術(shù)止血和防粘連。

本發(fā)明還提供了所述微纖維膠原止血材料的制備方法，所述方法包括下述步驟：原料處理時(shí)加入乙醇，后續(xù)步驟使用去垢劑和酸。

優(yōu)選地，所述制備方法包括下述步驟：

(1)原料處理：使用4wt％-6wt％硫化鈉，40vol％乙醇為動(dòng)物皮脂脫毛；(2)切碎、纖維化：將上述處理過的原料用切割或研磨機(jī)將膠原制成粗纖維制品；(3)溶脹控制：將步驟(2)的粗纖維制品溶于有機(jī)溶劑與水的混合溶液；(4)干燥；(5)解聚、蓬松：將得到的纖維束使用錘磨機(jī)進(jìn)行處理得到微纖維膠原產(chǎn)品；(6)滅菌：co⁶⁰25kg劑量輻照滅菌；

優(yōu)選在步驟(1)～(3)任一步驟中加入去垢劑和/或酸。

優(yōu)選地，步驟(3)中有機(jī)溶劑為低分子量醇、丙酮及類似物，優(yōu)選甲醇，乙醇，異丙醇，丁酮，丙酮，有機(jī)溶劑與水的體積比為9：1至1：1，優(yōu)選3：1；所述步驟(4)中的干燥優(yōu)選真空氮?dú)獗Ｗo(hù)加熱干燥或者冷凍真空干燥。

優(yōu)選地，所述去垢劑選自非離子表面活性劑或多元醇類表面活性劑，優(yōu)選peg200、山梨醇、司盤類和吐溫；所述酸選自無機(jī)酸或有機(jī)酸，優(yōu)選鹽酸、硫酸、氫溴酸、磷酸、氰基乙酸、乙酸、檸檬酸或乳酸。

本發(fā)明所述微纖維膠原止血材料及其制備方法具有下述優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明在脫毛過程中使用添加乙醇的方式，降低了硫化鈉的使用濃度，提高了脫毛的效率。

(1)處理過程引入有機(jī)溶劑和非離子型去垢劑，有效去脂去雜蛋白，降低材料免疫原性，防止脫水過程氫鍵暴露產(chǎn)生的角質(zhì)化，同時(shí)進(jìn)行有效病毒滅活。

(2)本發(fā)明采用氮?dú)獗Ｗo(hù)抽真空或者冷凍真空干燥的方式進(jìn)行干燥，使膠原材料不被氧化變性，易保持微纖維膠原的活性，提高止血效果。

(3)處理過程中引入酸，生成膠原鹽酸鹽，以達(dá)到低ph條件下的充分溶脹，使去脂去蛋白更有效；保證止血材料的粘合性能。

(4)通過co⁶⁰25kg劑量輻照滅菌，可防止干熱滅菌帶來的材料氧化變性，保證材料止血性能。

(5)本發(fā)明所述微纖維膠原止血材料，具有足夠的止血及粘合性能。

(6)本發(fā)明制備的微纖維膠原止血材料創(chuàng)面組織附著力較好，不易被機(jī)體快速吸收，且具有優(yōu)良的生物相容性，在體內(nèi)完全降解吸收，能應(yīng)用于體內(nèi)廣泛的部位。

(7)本發(fā)明制備的微纖維膠原止血材料在生產(chǎn)上易于加工、滅菌及質(zhì)量控制。

附圖說明

圖1表示使用不同止血材料后的止血時(shí)間；

圖2表示使用不同止血材料后出血量。

實(shí)施例

下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明實(shí)施例所述方法僅僅是用于說明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對(duì)本發(fā)明制備方法的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。實(shí)施例中用到的所有原料和溶劑均，如無特別說明，均為商購產(chǎn)品。

本發(fā)明所述微纖維膠原止血材料，通過下述一般性方法制備：

(1)原料處理：配制含有4％硫化鈉、40％乙醇濃度的脫毛劑，將脫毛機(jī)均勻涂抹于動(dòng)物皮膚表面，2分鐘后使用刀片將動(dòng)物皮膚表面的毛去除，清洗得到的無毛動(dòng)物真皮；

(2)切碎、纖維化：將原材料用切割或研磨機(jī)將膠原制成粗纖維制品；

(3)溶脹控制：膠原進(jìn)行機(jī)械粉碎或暴露在液體介質(zhì)中時(shí)能為氫鍵提供更多的結(jié)合位點(diǎn)，這樣就導(dǎo)致了材料干燥時(shí)會(huì)角質(zhì)化從而難以解聚成纖維或膨松化。可以使用有機(jī)液體與水混溶作為水溶液，如低分子量醇、丙酮及類似物，如甲醇，乙醇，異丙醇，丁酮，丙酮等，有機(jī)液體與水比例從9：1至1：1，優(yōu)選3：1的比例。其中，水的比例過高時(shí)，膠原纖維溶脹會(huì)為氫鍵提供過多的結(jié)合位點(diǎn)從而導(dǎo)致致密化。過度角質(zhì)化和/或致密化會(huì)使得隨后的解聚與蓬松化難以達(dá)到所需的堆密度及表面積；

(4)干燥：采用抽真空氮?dú)獗Ｗo(hù)加熱干燥或者冷凍真空干燥的方法制得膠原纖維束，避免干燥過程中膠原被氧化，抽真空氮?dú)獗Ｗo(hù)加熱為在氮?dú)獗Ｗo(hù)氛圍下60℃真空干燥22h。冷凍真空干燥過程如下：

a.產(chǎn)品預(yù)凍

開凍干機(jī)，先給前箱隔板降溫至-35℃以下，接著再給后箱冷凝器降溫至—60℃以下，然后抽真空、升溫，進(jìn)入升華階段。

b.第一次升華

溫度由-35℃以下升至-25℃，溫度保持1h。

c.第二次升華

溫度由-25℃升溫至-15℃，溫度保持9h。

d.第三次升華

溫度由-15℃升至-5℃，溫度保持7h。

e.第四次升華

溫度由-5℃升至0，溫度保持5-6h。

f.升溫

溫度由0℃升至25℃，從開始升溫計(jì)時(shí)，保持2h。

(5)解聚、蓬松：將得到的纖維束使用錘磨機(jī)進(jìn)行處理得到微纖維膠原產(chǎn)品。微纖維化膠原及其衍生物具有足夠的止血及粘合性能。

(6)微纖維膠原材料通過co⁶⁰25kg劑量輻照滅菌，可應(yīng)用于臨床。

實(shí)施例1

1.采用含有4wt％硫化鈉、40vol％乙醇的脫毛劑將牛皮脫毛。

2.未加工牛真皮切成3.0cm正方狀，冷凍備用。

3.解凍1天，用2-8℃水溶液洗滌數(shù)次，排除多余水后，使用切割機(jī)將牛皮切成0.60-1.50cm的小片或小塊。

4.切好的小塊與碎冰混合再次通過切割機(jī)纖維化，使纖維化后的固體含量為35wt％，離心使固體含量為40wt％。

5.所有液體處理都在25-28℃之間進(jìn)行。向12.5kg纖維化混合物加入37.5kg乙醇和200ml12n鹽酸(濃鹽酸)混合物?；旌蠑嚢?h，離心使固體含量為50wt％。

6.向上述離心后混合物加入31.7kg乙醇和317g吐溫80混合物，混合攪拌3h,離心使固體含量為50wt％。

7.上述離心后混合物加入到47.5kg乙醇中，混合攪拌3h,離心使固體含量為50wt％。

8.抽真空氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下60℃干燥22h。

9.將抽真空氮?dú)飧稍锼玫睦w維束使用錘磨機(jī)進(jìn)行處理。

10.co⁶⁰25kg劑量輻照滅菌，得到所得產(chǎn)品。

實(shí)施例2

1.采用含有4wt％硫化鈉、40vol％乙醇的脫毛劑將牛皮脫毛，

2.未加工牛真皮切成3.0cm正方狀，冷凍備用。

3.解凍1天，用2-8℃水溶液洗滌數(shù)次，排除多余水后，使用切割機(jī)將牛皮切成0.60-1.50cm的小片或小塊。

4.切好的小塊與碎冰混合再次通過切割機(jī)纖維化，使纖維化后的固體含量為35％，離心使固體含量為40wt％。

5.所有液體處理都在25-28℃之間進(jìn)行。向12.5kg纖維化混合物加入37.5kg乙醇和200ml12n鹽酸(濃鹽酸)混合物。混合攪拌5h，離心使固體含量為50wt％。

6.向上述離心后混合物加入31.7kg乙醇和317g吐溫80混合物，混合攪拌3h，離心使固體含量為50wt％。

7.上述離心后混合物加入到47.5kg乙醇中，混合攪拌3h,離心使固體含量為50％。

8.冷凍真空干燥。

9.將真空冷凍干燥所得的纖維束使用錘磨機(jī)進(jìn)行處理。

10.co⁶⁰25kg劑量輻照滅菌，得到所得產(chǎn)品。

止血效果研究：

取15只大鼠，按體重隨機(jī)分為3組，將大鼠麻醉，剖開腹部，擠出肝葉，用手術(shù)剪刀做“十”字創(chuàng)傷模型，分別使用紗布(a組)、avitene(b組)、新型微纖維膠原止血材料(c組)進(jìn)行止血，使用材料后，覆蓋提前裁剪好的濾紙，帶濾紙充滿血后更換濾紙，分別記錄avitene、新型微纖維膠原止血材料、紗布的止血時(shí)間與出血量。

止血效果：將三組大鼠，分別使用紗布、avitene、新型微纖維膠原止血材料后記錄止血時(shí)間(見附圖1)與出血量(見附圖2)。由圖可知，使用微纖維膠原以及新型微纖維膠原止血材料的止血時(shí)間及出血量均要大大低于使用紗布來止血的大鼠，且新型微纖維膠原止血材料的止血時(shí)間以及出血量明顯短于微纖維膠原。avitene采用了干烤滅菌的方式，而本研究采用了鈷60照射滅菌，干烤相比γ射線，對(duì)于膠原結(jié)構(gòu)的破壞更明顯，會(huì)顯著影響材料的吸水性、封閉傷口的能力，對(duì)止血效果形成較大影響。

由結(jié)果可以得到以下結(jié)論：新型微纖維膠原止血材料作為一種止血材料，其整體質(zhì)量可控，止血效果良好。