本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是涉及一種il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠模型在篩選治療自身免疫性骨髓纖維化的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

骨髓纖維化(myelofibrosis)是一種造血系統(tǒng)疾病，多發(fā)于老年人，主要特征為骨髓中網(wǎng)狀纖維組織增生，通常表現(xiàn)為造血干細(xì)胞異常增多、髓系細(xì)胞增生、貧血、脾臟腫大、脾臟與肝臟的髓外造血、生存率下降等。絕大多數(shù)情況下，骨髓纖維化患者伴有jak2、calr、mpl等基因突變，出現(xiàn)髓系細(xì)胞腫瘤。骨髓纖維化的發(fā)病機(jī)制被認(rèn)為主要是基因突變所導(dǎo)致的造血干細(xì)胞分化功能紊亂、巨核細(xì)胞異常活化等所引發(fā)的成纖維細(xì)胞活化并產(chǎn)生大量膠原。

但少數(shù)骨髓纖維化患者伴隨有自身免疫病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合癥、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、原發(fā)性膽汁性膽管炎等。這種自身免疫性骨髓纖維化往往不具有jak2、calr、mpl等基因突變，會(huì)出現(xiàn)淋巴細(xì)胞在骨髓中的浸潤(rùn)，可以被免疫抑制劑皮質(zhì)類(lèi)固醇所治療。但是目前對(duì)于自身免疫性骨髓纖維化的研究還很少，尚不清楚自身免疫性骨髓纖維化的具體發(fā)病機(jī)制。因此需要合適的動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)行藥物研發(fā)，但是目前缺乏自發(fā)自身免疫性骨髓纖維化的動(dòng)物模型。

il-2rα(-/-)小鼠由于缺乏il-2rα分子，調(diào)節(jié)性t細(xì)胞的發(fā)育與功能受到了影響，因此il-2rα(-/-)小鼠有著嚴(yán)重的全身性自身免疫病，表現(xiàn)為脾臟和淋巴結(jié)變大、t細(xì)胞尤其是cd8⁺t細(xì)胞增多、血清中抗體含量上升、自發(fā)結(jié)腸炎等[willerford,d.m.,etal.(1995).immunity3(4):521-530]。之前的工作發(fā)現(xiàn)il-2rα(-/-)小鼠具有門(mén)脈炎癥與膽管破壞，并且血清中可以檢出抗線(xiàn)粒體抗體(ama)，血清中多種炎性細(xì)胞因子的含量升高，表明il-2rα(-/-)小鼠具有這些類(lèi)似于人類(lèi)原發(fā)性膽汁性膽管炎的癥狀，因此可以作為原發(fā)性膽汁性膽管炎的動(dòng)物模型[wakabayashi,k.,etal.(2006).hepatology44(5):1240-1249]。il-2rα(-/-)小鼠的結(jié)腸炎主要由cd4⁺t細(xì)胞引起，而自身免疫性膽管炎主要由cd8⁺t細(xì)胞引起[hsu,w.,etal.(2009).hepatology49(1):133-140]。但是il-2rα(-/-)小鼠的自身免疫性膽管炎并不是很?chē)?yán)重，門(mén)脈炎癥與膽管破壞的水平較低，也沒(méi)有發(fā)展到肝纖維化的程度。而且il-2rα(-/-)小鼠同時(shí)存在著結(jié)腸炎，而結(jié)腸炎通常不存在于人類(lèi)原發(fā)性膽汁性膽管炎患者中。因此我們雜交得到了il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠，該小鼠與il-2rα(-/-)小鼠相比，結(jié)腸炎的程度較低，門(mén)脈炎癥與膽管破壞的水平的程度更高，出現(xiàn)了肝纖維化，表明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠具有更嚴(yán)重的自身免疫性膽管炎[yao,y.,etal.,(2014).jautoimmun51:99-108]。

之前的骨髓纖維化動(dòng)物模型如jak2^v617f小鼠[marty,c.,etal.,(2010).blood116(5):783-7]、gata1^low小鼠[vannucchi,a.m.,etal.,(2002).blood100(4):1123-32]、myb^boo小鼠[papathanasiou,p.,etal.,(2010).blood116(26):5849-58]等，可以模擬人類(lèi)骨髓纖維化的多種癥狀。但是尚缺乏自身免疫性骨髓纖維化的動(dòng)物模型。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠模型在篩選治療自身免疫性骨髓纖維化的藥物中的應(yīng)用。

il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)模型小鼠具有多種類(lèi)似人類(lèi)自身免疫性骨髓纖維化的特征。

本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

本發(fā)明提供一種il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠模型在篩選治療自身免疫性骨髓纖維化的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供一種培育作為自身免疫性骨髓纖維化動(dòng)物模型的il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的方法，包括下述步驟：

(1)將il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)小鼠進(jìn)行雜交，培育得到il-12p40(+/-)il-2rα(+/-)小鼠；

(2)將步驟(1)培育得到的il-12p40(+/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)小鼠進(jìn)行雜交，培育得到il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠；

(3)將步驟(2)培育得到的il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠進(jìn)行自交培育，鑒定得到il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠。

其中步驟(1)所用的il-2rα(-/-)小鼠(b6.129s4-il2ratm1dw)與il-12p40(-/-)小鼠(b6.129s1-il12btm1jm)購(gòu)自美國(guó)jackson實(shí)驗(yàn)室。

其中鑒定小鼠il-12p40基因的方法是用基因分型方法鑒定小鼠后代中是否存在il-12p40的野生型基因；鑒定小鼠il-2rα基因的方法是用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中cd4陽(yáng)性細(xì)胞的cd25的平均熒光強(qiáng)度。il-2rα(-/-)小鼠的cd4陽(yáng)性細(xì)胞不包括cd25陽(yáng)性的細(xì)胞；而il-2rα(+/-)小鼠cd4陽(yáng)性細(xì)胞的cd25的平均熒光強(qiáng)度為il-2rα(+/-)小鼠的一半，據(jù)此可以鑒定小鼠的il-2rα基因。

本發(fā)明還涉及通過(guò)本發(fā)明的培育方法獲得的il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明該小鼠可以用作自身免疫性骨髓纖維化模型來(lái)篩選治療自身免疫性骨髓纖維化的藥物。

本發(fā)明中我們觀察到與對(duì)照小鼠il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠相比，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的外周血中紅細(xì)胞和白細(xì)胞的數(shù)目顯著減少，血紅蛋白的含量和紅細(xì)胞壓積顯著下降。部分il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟出現(xiàn)造血集落，he染色顯示出脾臟結(jié)構(gòu)發(fā)生改變并且出現(xiàn)大量的巨核細(xì)胞，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟中出現(xiàn)大量的lsk(lin^-c-kit⁺sca-1⁺)細(xì)胞，這些結(jié)果均表明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟出現(xiàn)了髓外造血。同時(shí)il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的肝臟中出現(xiàn)了造血島，肝臟中出現(xiàn)大量的lsk細(xì)胞，證明肝臟同樣出現(xiàn)了髓外造血。

本發(fā)明中我們發(fā)現(xiàn)il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的股骨和脛骨顏色偏白，he染色和網(wǎng)狀纖維銀染的結(jié)果表明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓出現(xiàn)了纖維化。同時(shí)il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中b細(xì)胞、紅細(xì)胞數(shù)目下降，表明產(chǎn)生b細(xì)胞、紅細(xì)胞的造血功能下降。il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中l(wèi)sk細(xì)胞的比例和數(shù)目顯著上升，但是骨髓嵌合實(shí)驗(yàn)證明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓造血能力較弱。

本發(fā)明中我們發(fā)現(xiàn)與對(duì)照小鼠相比，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞的數(shù)目顯著增高，并且更傾向于effectormemory表型，能表達(dá)更高水平的ifn-γ。并且il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞的比例與骨髓中l(wèi)sk細(xì)胞的比例呈正相關(guān)。這些結(jié)果提示了活化的t細(xì)胞導(dǎo)致了il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的造血功能異常。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的造血系統(tǒng)異常。經(jīng)過(guò)檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠能較好的模擬人類(lèi)自身免疫性骨髓纖維化的癥狀。

本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：

(1)目前骨髓纖維化的動(dòng)物模型無(wú)法自發(fā)自身免疫病，難以模擬人類(lèi)的自身免疫性骨髓纖維化。il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠具有自發(fā)產(chǎn)生貧血、骨髓纖維化、骨髓t細(xì)胞浸潤(rùn)、髓外造血等特征。因此，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠可以作為一個(gè)合適的自身免疫性骨髓纖維化的動(dòng)物模型。

(2)il-12p40在免疫系統(tǒng)中是一種很重要的細(xì)胞因子，能夠影響cd4⁺t與cd8⁺t細(xì)胞的功能與分化；il-2rα是il-2受體的α鏈，對(duì)于維持免疫系統(tǒng)的平衡起著關(guān)鍵作用。我們雜交得到il-12p40與il-2rα雙缺陷的小鼠，即il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠。我們發(fā)現(xiàn)與對(duì)照小鼠il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠相比，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠出現(xiàn)了造血系統(tǒng)的異常，包括外周血中紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)目減少；骨髓中cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞大量浸潤(rùn)，lsk細(xì)胞(lin^-c-kit⁺sca-1⁺細(xì)胞)的比例和數(shù)目上升，骨髓造血能力下降，骨髓出現(xiàn)大量網(wǎng)狀纖維；脾腫大，脾臟和肝臟出現(xiàn)髓外造血。因此，該小鼠可以作為一種動(dòng)物模型用于篩選治療自身免疫性骨髓纖維化藥物。

附圖說(shuō)明

圖1是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的血常規(guī)數(shù)據(jù)，包括外周血紅細(xì)胞數(shù)(rbc)、血紅蛋白含量(hgb)、紅細(xì)胞壓積(hct)、白細(xì)胞數(shù)(wbc)和血小板數(shù)(plt)。

圖2是il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟與肝臟的髓外造血情況；其中，a是部分il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟照片，顯示出造血集落；b是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟he染色，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，箭頭指向巨核細(xì)胞；c是il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的肝臟he染色，箭頭指向造血島(hematopoieticislands)。

圖3是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟與肝臟的lsk細(xì)胞數(shù)目。

圖4是il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓纖維化；其中，a是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的股骨和脛骨的外觀對(duì)比；b是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓he染色，可以看出il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中存在著成纖維細(xì)胞，而il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠的骨髓則沒(méi)有這一現(xiàn)象；c是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓網(wǎng)狀纖維銀染，可以看出il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中存在著黑色的網(wǎng)狀纖維，而il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠的骨髓則沒(méi)有這一現(xiàn)象。

圖5是il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓造血功能異常；其中，a是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中各種細(xì)胞亞群的數(shù)目，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中紅細(xì)胞、b細(xì)胞的數(shù)目減少；b是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中l(wèi)sk細(xì)胞的比例和數(shù)目，結(jié)果證明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中l(wèi)sk細(xì)胞的比例和數(shù)目均顯著上升；c是骨髓嵌合實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓造血能力，結(jié)果證明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓造血能力顯著下降。

圖6是il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓t細(xì)胞浸潤(rùn)；其中，a是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中t細(xì)胞數(shù)目，結(jié)果表明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞的數(shù)目均顯著上升；b是il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓中t細(xì)胞表型，結(jié)果表明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞中effectormemory的比例更高，能產(chǎn)生更高水平的ifn-γ；c是il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓lsk細(xì)胞比例與骨髓cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞比例的相關(guān)性分析，結(jié)果證明成正相關(guān)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解，如果沒(méi)有特別說(shuō)明，下述實(shí)施例中所用的化學(xué)試劑均為市售分析純級(jí)別的試劑。下述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)遵照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理進(jìn)行。

il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠模型在專(zhuān)利“201410020633.9、培育作為肝纖維化與原發(fā)性膽汁性肝硬化動(dòng)物模型的il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的方法”中公開(kāi)。

實(shí)施例1.il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的建立

c57bl/6j背景的il-2rα(-/-)小鼠(b6.129s4-il2ratm1dw)[willerford,d.m.,etal.(1995).immunity3(4):521-530]與il-12p40(-/-)小鼠(b6.129s1-il12btm1jm)[magram,j.,etal.(1996).immunity4(5):471-481]購(gòu)自美國(guó)jackson實(shí)驗(yàn)室(thejacksonlaboratory，美國(guó)緬因州，http://www.jax.org/)，飼養(yǎng)于無(wú)特殊病原菌(spf)環(huán)境中。

我們將il-2rα(+/-)小鼠與il-12p40(-/-)小鼠進(jìn)行雜交，得到il-12p40(+/-)il-2rα(+/-)小鼠；再與il-12p40(-/-)小鼠進(jìn)行雜交，得到il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠。實(shí)驗(yàn)中用到的il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠和il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠均由il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠進(jìn)行繁殖。由于il-12p40與il-2rα的突變基因都包含一個(gè)neo基因，所以鑒定小鼠il-12p40基因的方法是用基因分型(genotyping)的方法鑒定il-12p40的野生型基因，鑒定小鼠il-2rα基因的方法是用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中cd4陽(yáng)性細(xì)胞的cd25的平均熒光強(qiáng)度。其中il-2rα(-/-)小鼠的cd4陽(yáng)性細(xì)胞不包括cd25陽(yáng)性的細(xì)胞；而il-2rα(+/-)小鼠cd4陽(yáng)性細(xì)胞的cd25的平均熒光強(qiáng)度為il-2rα(+/-)小鼠的一半，由此可以鑒定小鼠il-2rα基因。所有的小鼠都在11到13周齡用于實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)符合動(dòng)物倫理要求。

實(shí)施例2.血常規(guī)檢測(cè)

收集小鼠的外周血到抗凝管中，吸取150μl血液，通過(guò)全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀收集血常規(guī)數(shù)據(jù)。

結(jié)果見(jiàn)圖1，與il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠相比，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的外周血紅細(xì)胞數(shù)(rbc)、血紅蛋白含量(hgb)、紅細(xì)胞壓積(hct)和白細(xì)胞數(shù)(wbc)均顯著下降，但血小板數(shù)(plt)未有顯著變化。

實(shí)施例3.組織病理學(xué)檢驗(yàn)

將小鼠的肝臟、脾臟與骨髓組織固定于4％的中性甲醛中1～2天。骨髓組織再放入脫鈣液(5％鹽酸+5％醋酸)中24小時(shí)。組織經(jīng)脫水并包埋于石蠟當(dāng)中，切成4μm的薄片。薄片脫蠟后進(jìn)行h&e染色。骨髓組織通過(guò)網(wǎng)狀纖維銀染來(lái)顯示纖維化。

結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3，從圖2的he染色圖中可以看到與il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠相比，il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟結(jié)構(gòu)發(fā)生改變、紅髓、白髓的區(qū)分不夠明顯，并且出現(xiàn)了大量的巨核細(xì)胞。il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的肝臟存在著造血島。這些結(jié)果證明了il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟和肝臟中的髓外造血現(xiàn)象。圖3的he染色圖中顯示出il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓出現(xiàn)成纖維細(xì)胞，網(wǎng)狀纖維銀染顯示出il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓可以出現(xiàn)明顯的網(wǎng)狀纖維。

實(shí)施例4.各臟器細(xì)胞的分離與流式細(xì)胞術(shù)

取出肝臟，用含0.2％bsa的pbs進(jìn)行研磨，經(jīng)鋼絲網(wǎng)過(guò)濾后1500rpm離心5min，取沉淀。用40％percoll(gehealthcare公司)重懸沉淀，2000rpm離心20min，取沉淀。脾臟用兩塊玻片與pbs/0.2％bsa進(jìn)行研磨，經(jīng)尼龍網(wǎng)過(guò)濾。取股骨和脛骨，用注射器吸取pbs后吹打骨髓，經(jīng)尼龍網(wǎng)過(guò)濾。所收集的細(xì)胞經(jīng)紅細(xì)胞裂解液處理后通過(guò)血細(xì)胞計(jì)數(shù)器在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。取1×10⁶細(xì)胞，用純化cd16/32抗體(biolegend公司)進(jìn)行封閉，然后標(biāo)記抗cd3、b220、ter119、gr-1、nk1.1、cd11c、cd11b(lineagemarkers)、c-kit、sca-1、cd4、cd8β、cd62l、cd44(biolegend公司)、cd8α(bd公司)的熒光抗體。對(duì)于細(xì)胞因子胞內(nèi)染色，細(xì)胞由含有10％胎牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)基重懸，用含有蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的細(xì)胞刺激cocktail(購(gòu)自ebioscience公司)進(jìn)行刺激，37℃培養(yǎng)4小時(shí)。細(xì)胞用純化cd16/32抗體進(jìn)行封閉，再用抗cd3、cd4、cd8β、nk1.1的熒光抗體(biolegend公司)進(jìn)行標(biāo)記，然后用固定液(biolegend公司)進(jìn)行固定。固定后的細(xì)胞用穿膜液(biolegend公司)進(jìn)行穿膜，再用抗ifn-γ的熒光抗體(biolegend公司)進(jìn)行標(biāo)記。

結(jié)果見(jiàn)圖3、圖5、圖6。圖3顯示il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的脾臟和肝臟中l(wèi)sk細(xì)胞增多。圖5顯示il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓各亞群細(xì)胞中未成熟紅細(xì)胞、成熟紅細(xì)胞和b細(xì)胞的數(shù)目下降，但單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的數(shù)目沒(méi)有顯著改變，表明紅細(xì)胞、b細(xì)胞的生成被削弱。圖6顯示il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠骨髓中cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞的數(shù)目增多，且cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞中效應(yīng)性記憶t細(xì)胞的比例上升，產(chǎn)生ifn-γ的能力增強(qiáng)；并且il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠骨髓中cd4⁺t細(xì)胞和cd8⁺t細(xì)胞的比例與骨髓lsk細(xì)胞的比例成正相關(guān)，提示著骨髓中t細(xì)胞浸潤(rùn)導(dǎo)致了骨髓異常。

實(shí)施例6.骨髓嵌合實(shí)驗(yàn)

用10gy輻照l(shuí)y5.1/ly5.2小鼠，24h后無(wú)菌分離ly5.2il-12p40(-/-)il-2rα(+/-)小鼠和ly5.1il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的全骨髓細(xì)胞，分別取5×10⁵細(xì)胞混合轉(zhuǎn)輸給ly5.1/ly5.2小鼠。8周后檢測(cè)受體小鼠。

結(jié)果見(jiàn)圖5。圖5顯示骨髓嵌合實(shí)驗(yàn)證明il-12p40(-/-)il-2rα(-/-)小鼠的骨髓造血能力顯著下降。

上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。