本發(fā)明屬于獸用疫苗佐劑，具體涉及一種腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液及其制備方法和應用。

背景技術：

1、疫苗接種是防控牛病毒性腹瀉（bvd）的關鍵手段。當前市場上廣泛應用的疫苗類型主要包括滅活疫苗和亞單位疫苗，這些疫苗通常采用的佐劑為isa201和isa206，它們主要側重于增強特異性細胞免疫和體液免疫應答。然而，在能夠有效提升黏膜免疫應答的佐劑方面，選擇相對有限。黏膜作為機體抵御病原體入侵的首道防線，其免疫機制對于眾多疫苗而言，尤其在防御黏膜病方面，其重要性不亞于特異性細胞及體液免疫應答。目前市場上能夠激發(fā)黏膜免疫的疫苗佐劑大多依賴口服途徑，但這類佐劑主要局限于誘導有效的黏膜免疫，而無法顯著激發(fā)細胞免疫響應，因此其誘導的細胞和體液免疫效果并不理想。另一方面，注射免疫方式則因組織局限性而無法促使免疫細胞向黏膜相關淋巴組織歸巢，進而無法產生有效的黏膜免疫反應。鑒于以上情況，研發(fā)一種成本低廉、副作用小且能同時激活黏膜免疫和系統性免疫應答的新型疫苗佐劑，對于防御黏膜病具有重要意義。

2、刺糖多糖（alhagi?honey?polysaccharide，簡稱ahp）是一種具有免疫調節(jié)活性的天然多糖，能夠激活t細胞、b淋巴細胞和樹突狀細胞（dcs）等關鍵免疫細胞，通過多種途徑增強機體的免疫功能。然而，作為疫苗佐劑，刺糖多糖存在靶向性不足和作用時間較短的缺點。因此，需要開發(fā)一種新的疫苗佐劑以克服這些問題。

技術實現思路

1、為解決現有技術中刺糖多糖存在靶向性不足和作用時間較短的缺點，本發(fā)明提供了一種腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液及其制備方法和應用。為實現上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案來實現。

2、第一方面，本發(fā)明提供了一種腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液。

3、所述腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液為ahppe。

4、所述ahppe是由油相和水相混合而成；所述油相和所述水相的體積比為1：9~13。

5、所述油相由以下原料制成：角鯊烯和維甲酸；所述角鯊烯和所述維甲酸的質量比為1：0.7~0.8。

6、所述水相由以下原料制成：刺糖多糖和氫氧化鋁；所述刺糖多糖和所述氫氧化鋁的質量比為1：10~13。

7、為了克服現有技術中刺糖多糖存在靶向性不足和作用時間較短的缺點，本發(fā)明將刺糖多糖與具有良好緩釋性能的載體相結合，將刺糖多糖和維甲酸（全反式維甲酸）制備成一種新型疫苗佐劑：ahppe。

8、本發(fā)明制備的所述ahppe是以刺糖多糖負載氫氧化鋁為水相，以維甲酸（ra，維生素a酸）和角鯊烯為油相，制備得到了一種疫苗佐劑。其中，油相作為內核，水相為外核緊密連接，不僅增強了乳液的穩(wěn)定性，還可以提升對抗原的吸附能力，進而增強了刺糖多糖的腸道靶向性和延長了作用時間。本發(fā)明提供的所述ahppe不僅可以解決刺糖多糖存在靶向性不足和作用時間較短的缺點，還能解決ra水溶性差不易被機體有效吸收利用的問題，便于藥物的吸收，可以使藥物緩慢地的釋放，有效地延長藥效。

9、第二方面，本發(fā)明提供所述腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液的制備方法，包括如下步驟：

10、將所述氫氧化鋁加水，進行超聲處理后，使所述氫氧化鋁在水中分散均勻，制備得到氫氧化鋁溶液。

11、將所述氫氧化鋁溶液和所述刺糖多糖的水溶液混合，所述氫氧化鋁作為顆粒穩(wěn)定劑，和所述刺糖多糖結合，得到ahp-alum溶液。所述ahp-alum溶液作為所述水相。

12、取所述維甲酸溶于所述角鯊烯中，得到維甲酸-角鯊烯溶液。所述維甲酸-角鯊烯溶液作為油相。

13、將所述ahp-alum溶液（水相）加至所述維甲酸-角鯊烯溶液（油相）中并攪拌均勻，經超聲乳化，構建了一種藥物遞送體系，得到所述ahppe。

14、其中，所述ahp-alum溶液與所述維甲酸-角鯊烯溶液的體積比為9~13：1。

15、本發(fā)明利用超聲乳化法制備新型乳液佐劑，構建了一種同時負載刺糖多糖和ra且能夠吸附大量抗原的疫苗遞送系統。該疫苗佐劑通過維甲酸作用于樹突狀細胞激活ccr9受體介導的腸粘膜歸巢作用產生有效腸道靶向效果。注射小鼠誘導機體產生高水平特異性igg（immunoglobulin?g，igg）抗體和特異性iga（immunoglobulin?a,iga）抗體。

16、優(yōu)選地，使用細胞超聲粉碎儀，將所述氫氧化鋁進行超聲破碎，超聲功率15?w~25w，變桿6，超聲3?s~5?s，停止3?s~5?s。

17、優(yōu)選地，所述ahp-alum溶液中所述刺糖多糖（ahp）的濃度為0.4?mg/ml~0.5?mg/ml；所述ahp-alum溶液中所述氫氧化鋁（alum）的濃度為5?mg/ml~7?mg/ml。

18、優(yōu)選地，所述維甲酸-角鯊烯溶液中所述維甲酸的濃度為0.6?mg/ml~0.7?mg/ml；所述維甲酸-角鯊烯溶液中所述角鯊烯的質量比為50%~60%。

19、優(yōu)選地，所述ahp-alum溶液與所述維甲酸-角鯊烯溶液的體積比為9~13：1。

20、優(yōu)選地，所述超聲乳化的條件為超聲功率19?w~21?w，變桿6，超聲3.5?s~4.5?s，停止3.5?s~4.5?s。

21、第三方面，本發(fā)明提供了所述腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液在提高動物機體免疫力中的應用。所述腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液即所述ahppe，所述ahppe用于制備動物腹瀉疫苗的佐劑。

22、優(yōu)選地，所述動物腹瀉疫苗的佐劑是由所述ahppe與抗原混合，共孵育而成。

23、所述抗原與所述ahppe的體積比為1：1~4。

24、所述抗原為動物腹瀉病毒。

25、優(yōu)選地，所述動物腹瀉病毒包括牛病毒性腹瀉病毒。

26、上述本發(fā)明的一種或多種實施例取得的有益效果如下：

27、1、本發(fā)明提供了一種腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液。所述腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液為ahppe。本發(fā)明制備的所述ahppe是以刺糖多糖負載氫氧化鋁為水相，以維甲酸和角鯊烯為油相，制備得到了一種疫苗佐劑。其中，油相作為內核，水相為外核緊密連接，不僅增強了乳液的穩(wěn)定性，還可以提升對抗原的吸附能力，進而增強了刺糖多糖的腸道靶向性和延長了作用時間。本發(fā)明制備的所述ahppe不僅可以解決刺糖多糖存在靶向性不足和作用時間較短的缺點，還能解決ra水溶性差不易被機體有效吸收利用的問題，便于藥物的吸收，可以使藥物緩慢地的釋放，有效地延長藥效。

28、2、本發(fā)明制備的所述ahppe可作為bvdv疫苗佐劑，通過注射能夠誘導機體產生有效黏膜免疫和系統性免疫反應。

29、3、本發(fā)明提供的所述ahppe的制備方法中的制備過程溫和簡便，安全、耐受性良好的藥用輔料賦予其良好的生物安全性，可實現疫苗規(guī)?；慨a。

技術特征：

1.一種腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液，其特征在于，所述腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液為ahppe；

2.權利要求1所述的腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述超聲處理的條件如下：

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述ahp-alum溶液中所述刺糖多糖的濃度為0.4?mg/ml~0.5?mg/ml；所述ahp-alum溶液中所述氫氧化鋁的濃度為5?mg/ml~7?mg/ml。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述維甲酸-角鯊烯溶液中所述維甲酸的濃度為0.6?mg/ml~0.7?mg/ml；所述維甲酸-角鯊烯溶液中所述角鯊烯的質量比為50%~60%。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述超聲乳化的條件為超聲功率19?w~21?w，變桿6，超聲3.5?s~4.5?s，停止3.5?s~4.5?s。

7.權利要求1所述的腸道靶向的刺糖多糖-鋁佐劑皮克林乳液在提高動物機體免疫力中的應用，其特征在于，所述ahppe用于制備動物腹瀉疫苗的佐劑。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述動物腹瀉疫苗的佐劑是由所述ahppe與抗原混合，共孵育而成：

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述動物腹瀉病毒包括牛病毒性腹瀉病毒。

技術總結
本發(fā)明屬于獸用疫苗佐劑技術領域，具體涉及一種腸道靶向的刺糖多糖?鋁佐劑皮克林乳液及其制備方法和應用。所述腸道靶向的刺糖多糖?鋁佐劑皮克林乳液為AHPPE，所述AHPPE是由油相和水相混合而成：所述油相和所述水相的體積比為1：9~13；所述油相由以下原料制成：角鯊烯和維甲酸；所述角鯊烯和所述維甲酸的質量比為1：0.7~0.8；所述水相由以下原料制成：刺糖多糖和氫氧化鋁；所述刺糖多糖和所述氫氧化鋁的質量比為1：10~13。本發(fā)明提供的制備方法解決了維甲酸難溶于水和刺糖多糖代謝速度快的問題，同時，注射AHPPE能夠誘導機體產生有效系統性免疫和腸道黏膜免疫。

技術研發(fā)人員：阿得力江·吾斯曼,賽福丁·阿不拉,周恩,何廣延,付強,買占海,劉丹丹
受保護的技術使用者：新疆農業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15