用于以長期循環(huán)的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)進(jìn)行局部治療的立體特異性脂質(zhì)的制作方法
【專利說明】用于w長期循環(huán)的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)進(jìn)行局部治療 的立體特異性脂質(zhì)
[0001] 發(fā)明描述
[0002] 本申請(qǐng)?jiān)O(shè)及用于W長期循環(huán)的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)進(jìn)行局部治療的立體特 異性脂質(zhì)。
[0003]本申請(qǐng)尤其設(shè)及一種用于治療腫瘤、尤其是膀脫腫瘤和其它局部腫瘤的熱敏性脂 質(zhì)體。
[0004]本申請(qǐng)尤其設(shè)及W長期循環(huán)的熱敏性脂質(zhì)體進(jìn)行膀脫腫瘤的治療然而，該治療方 法具有普遍的臨床重要性，因?yàn)樗蒞通過醫(yī)用藥物的局部釋放普遍應(yīng)用用于人中和動(dòng)物 中疾病的治療，特別是還在其它腫瘤疾病的情況下，其中其它腫瘤疾病由器官和機(jī)體組織 中腫瘤細(xì)胞的局部定殖(Ansiedlung)引起。
[000引本申請(qǐng)還設(shè)及具有均一和天然構(gòu)型的憐脂，其尤其可W用作本發(fā)明納米載體系統(tǒng) 的組分，例如用作脂質(zhì)體的組分。
[0006]膀脫癌是常見的腫瘤疾病。全世界，每年約130,000人死于膀脫癌。男性的遭遇頻 率是女性的兩倍，平均男性的發(fā)作年齡為69而女性的發(fā)作年齡為73。約95%的膀脫癌起源 于尿道上皮。臨床上，分辨低級(jí)和高級(jí)腫瘤特別重要，因?yàn)楹笳叽嬖诜浅８叩膹?fù)發(fā)和發(fā)展的 危險(xiǎn)。W測(cè)定滲入深度的膀脫腫瘤的組織學(xué)檢測(cè)通過腫瘤的經(jīng)尿道切除（TURB)進(jìn)行。在所 有高級(jí)和T1腫瘤（即粘膜固有層的滲入）中，在初次手術(shù)之后二至六周需要進(jìn)行經(jīng)尿道的后 續(xù)切除。如果腫瘤已經(jīng)侵入肌肉層，則指示根治性膀脫切除。
[0007]除外科方法外，膀脫內(nèi)的化療，即灌輸絲裂霉素C、多柔比星或表柔比星，是一種被 證實(shí)的治療膀脫腫瘤的方法。在低危險(xiǎn)的腫瘤切除之后，推薦僅進(jìn)行早期的灌注(在手術(shù)后 第一個(gè)6小時(shí)內(nèi)），而在中度危險(xiǎn)和高危險(xiǎn)的腫瘤的情況下仍推薦W重復(fù)的化療灌注進(jìn)行的 維持治療。一些灌注每隔一周進(jìn)行并可持續(xù)數(shù)月?；煿嘧⒌奶娲椒锽CG(卡介苗）灌 注。
[0008]盡管有TURB和膀脫內(nèi)化療，但存在淺表性膀脫癌復(fù)發(fā)的高風(fēng)險(xiǎn)。膀脫內(nèi)化療的效 力受到進(jìn)入膀脫內(nèi)有限的穿透深度限制，因?yàn)閷?duì)于細(xì)胞抑制劑尿道上皮層代表非常有效的 屏障。從膀脫的內(nèi)側(cè)向外觀察，膀脫壁由W下組織構(gòu)成：尿道上皮、粘膜固有層、肌層和外 膜。在細(xì)胞抑制劑灌注到膀脫內(nèi)之后，隨著組織深度的增加組織濃度W半對(duì)數(shù)降低。在人類 中，可^顯示，5004111的滲入深度，僅還存在50%的初始組織濃度（胖1611*^'68 16等 PenetrationofmitomycinCinhumanbladder.CancerRes.1993)。采用狗模型，可W 顯示絲裂霉素C的細(xì)胞毒濃度可僅在尿道上皮層內(nèi)獲得，而足夠高的濃度僅在20%的病例 中可在粘膜固有層中獲得W及在不到20%的病例中可在肌層中獲得。例如，在該研究中，1μ g/g(n= 24)的絲裂霉素C的中值濃度在2000皿的組織深度可檢測(cè)出。在2000-3000皿的組織 深度，在18/24的狗中不再檢測(cè)到絲裂霉素C(WientjesMG等Bladderwallpenetration ofintravesicalmitomycinCindogs.(MincerRes. 1991)。總之，膀脫內(nèi)化療的效力受 到所用細(xì)胞抑制劑滲透不充分很大限制。
[0009]因此，本發(fā)明的任務(wù)是提供一種治療局部疾病的治療可選方案，并且優(yōu)選治療腫 瘤，尤其是膀脫腫瘤和其它局部腫瘤。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明該任務(wù)通過用于局部治療的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的納米載體系統(tǒng)優(yōu)選為脂質(zhì)體。然而，也可應(yīng)用其它納米載體系統(tǒng)。對(duì) 本發(fā)明必要的是納米載體系統(tǒng)尤其脂質(zhì)體是刺激-敏感性的。根據(jù)本發(fā)明的刺激-敏感性納 米載體系統(tǒng)，尤其刺激-敏感性脂質(zhì)體，作為對(duì)刺激施加的反應(yīng)釋放包封的或締合的活性成 分。適宜的刺激或能源優(yōu)選為熱、射頻，例如放射性淺部和深部高溫系統(tǒng)或膀脫高溫系統(tǒng)， 超聲波如高聚焦超聲化I即)或低強(qiáng)度超聲波化IFU)光，激光，通過加熱流體的傳導(dǎo)，或其它 導(dǎo)致局部加熱和/或使膜尤其包含憐脂的膜不穩(wěn)定的物理原理。
[0012] 借助局部治療，尤其通過包封在刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)中的活性成分的祀向 和快速釋放，局部疾病可W祀向方式進(jìn)行治療而不損害健康組織。另外，系統(tǒng)負(fù)載通過活性 成分的祀向釋放保持最小。
[0013]本發(fā)明尤其設(shè)及一種用于治療腫瘤尤其用于治療膀脫腫瘤的刺激-敏感性、優(yōu)選 熱敏性的脂質(zhì)體。通過采用熱敏性脂質(zhì)體，包封在脂質(zhì)體中的活性成分可通過祀向加熱脂 質(zhì)體而釋放。因此運(yùn)種熱敏性脂質(zhì)體特別適于腫瘤尤其是膀脫腫瘤、或膀脫癌的局部治療。 包封在脂質(zhì)體中的活性成分的釋放可在體內(nèi)期望的位點(diǎn)例如在膀脫壁內(nèi)W祀向方式被誘 導(dǎo)，藉此活性成分，尤其是細(xì)胞抑制劑，可在期望的位點(diǎn)立刻釋放。
[0014]根據(jù)本發(fā)明所用的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)，尤其是熱敏性脂質(zhì)體包含(i)至少 一種具有主轉(zhuǎn)變溫度為〇°C至80°C的憐脂酷膽堿和（ii)至少一種憐脂酷寡聚甘油或/和憐 脂酷甘油二醇或/和至少一種屯、憐脂。
[0015]通過應(yīng)用憐脂酷寡聚甘油，可W配制具有延長血循環(huán)時(shí)間的熱敏性脂質(zhì)體（W0 2002/064116和W0 2004/026282)。運(yùn)些脂質(zhì)體在生理?xiàng)l件下例如（37-38°C)在血流中很穩(wěn) 定，不釋放、或者僅非實(shí)質(zhì)釋放，之前包封在脂質(zhì)體中的活性成分化indnerLH等Novel temperature-sensitiveliposomeswithprolongedcirculationtime.ClinCancer Res.2004；HossannM等Invitrostabilityandcontentreleasepropertiesof phosphatidylglyceroglycerolcontainingthermosensitiveliposomes.Biochim Bio地ysActa.2007)。大多數(shù)脂質(zhì)體在2小時(shí)的時(shí)間內(nèi)仍保留在血液循環(huán)中因此可獲得活 性成分的熱控釋。由于運(yùn)些脂質(zhì)體快速釋放-動(dòng)力學(xué)，其中脂質(zhì)體具有在幾秒鐘、優(yōu)選<15 秒、更優(yōu)選<10秒內(nèi)活性成分的熱-誘導(dǎo)釋放，之前包封的活性成分可通過祀向加熱脂質(zhì)體 至溫度> 39°C、優(yōu)選40-42°C而立即釋放。
[0016]由于根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體在系統(tǒng)循環(huán)中的高穩(wěn)定性，僅有非常低的活性成分的非 特定釋放，運(yùn)些脂質(zhì)體適于W非常特定的方式用于腫瘤、尤其局部腫瘤特別優(yōu)選膀脫癌的 局部治療。在根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體靜脈給藥之后，之前包封的活性成分在期望的位點(diǎn)例如 在膀脫壁內(nèi)的釋放，可通過祀向加熱期望的位點(diǎn)例如膀脫壁而被誘導(dǎo)。
[0017]借助該方法，尿道上皮的天然屏障可被克服，包封的醫(yī)用藥物的高組織水平可遠(yuǎn) 至肌層獲得。
[0018]根據(jù)本發(fā)明，治療腫瘤，尤其實(shí)體腫瘤或/和局部腫瘤。淺表腫瘤和轉(zhuǎn)移根據(jù)本發(fā) 明尤其可用脂質(zhì)體治療，因?yàn)樗鼈兛蒞簡單的方式加熱。不過，也可W治療其它腫瘤，例如 中空器官內(nèi)的腫瘤。在運(yùn)種情況下，釋放脂質(zhì)體內(nèi)容物所需要的加熱可例如通過用溫水沖 洗來實(shí)現(xiàn)。其實(shí)例為HN0腫瘤、淋己結(jié)腫瘤、肺腫瘤、腹膜癌、胸膜癌、食管癌、胃癌和膀脫癌。
[0019]根據(jù)本發(fā)明最優(yōu)選治療膀脫腫瘤、或膀脫癌。既治療膀脫癌的原位癌又治療ΤΙ階 段W及其它階段例如Τ2或Τ3階段是可能的。
[0020] 除治療淺表的膀脫腫瘤之外，運(yùn)種方法還可W用于治療肌肉-侵入性腫瘤W確保 膀脫得到保護(hù)。就改善的腫瘤控制和與低的系統(tǒng)副作用率相關(guān)的提高的膀脫-保護(hù)性治療 率而言，與膀脫內(nèi)化療的給藥比較通過此方法獲得的的優(yōu)點(diǎn)，表明該方法將取代傳統(tǒng)的膀 脫內(nèi)化療灌注。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明的脂質(zhì)體優(yōu)選地還包含活性成分，尤其是細(xì)胞抑制劑。除傳統(tǒng)用于膀 脫內(nèi)治療的細(xì)胞抑制劑絲裂霉素C、多柔比星和表柔比星之外，其它細(xì)胞抑制劑諸如吉西他 濱、曲貝替定等也可用于該方法。其它適宜的細(xì)胞抑制劑為銷衍生物諸如順銷、卡銷或奧沙 利銷。多柔比星作為活性成分是最優(yōu)選的。
[0022] 所討論的器官，例如膀脫，可運(yùn)用各種各樣的方法技術(shù)加熱。例如，除W溫水簡單 沖洗膀脫之外，加熱還可W通過電磁波、超聲波或通過激光技術(shù)進(jìn)行。
[0023]包含至少（i)具有主轉(zhuǎn)變溫度為0°C至80°C的憐脂酷膽堿和（ii)至少一種憐脂酷 寡聚甘油或/和憐脂酷甘油二醇或/和屯、憐脂的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)，尤其是熱敏性 脂質(zhì)體，在血清中具有長的半衰期。另外，納米載體系統(tǒng)尤其是脂質(zhì)體的內(nèi)容物，在施加刺 激下例如當(dāng)超過特定的溫度時(shí)，快速釋放，尤其在不到10秒內(nèi)釋放。
[0024]刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)、尤其是根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的熱敏性脂質(zhì)體的組成為憐 脂酷膽堿。基于刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)、尤其是脂質(zhì)體的總重，憐脂酷膽堿優(yōu)選W至少1 重量％、更優(yōu)選至少10重量％、還更優(yōu)選至少30重量％甚至更優(yōu)選至少50重量％、和最高99 重量％、更優(yōu)選最高90重量％和特別優(yōu)選最高80重量％的量存在。
[0025]通過選擇具有適宜主轉(zhuǎn)變溫度的憐脂酷膽堿，可定制刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)， 尤其是熱敏性脂質(zhì)體。表1給出了主轉(zhuǎn)變溫度在0至80°C的范圍內(nèi)的憐脂酷膽堿的主轉(zhuǎn)變溫 度(Tm)。由該表可W看出，主轉(zhuǎn)變溫度依賴于鏈長和依賴于甘油-3-憐酸膽堿的在1位和2位 上或甘油-2-憐酸膽堿在1位和3位上的分布。
[0026] 表 1
[0027] 憐脂的相變溫度(Tm)
[002引
[0029] 列于表1中的值表明，通過采用具有不均勻鏈長和在甘油基本結(jié)構(gòu)上適宜分布的 所述脂肪酸，幾乎可W設(shè)定在0至80°C所述范圍內(nèi)任何期望的溫度。脂肪酸鏈及其在甘油分 子的1位和2位上的分布支配憐脂的物理性質(zhì)。相變溫度與憐脂是憐脂酷膽堿、憐脂酷二甘 油、憐脂酷Ξ甘油還是憐脂酷四甘油無關(guān)。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)、尤其是熱敏性脂質(zhì)體優(yōu)選包含式(I)的 憐脂酷膽堿
[0031]
[0032]其中Ri和R2各自獨(dú)立地代表具有12至24個(gè)碳原子的控殘基。
[0033] Ri和R2優(yōu)選地相互獨(dú)立地為飽和的或單不飽和或多不飽和的、優(yōu)選線性烷基殘基， 尤其是飽和烷基殘基。Ri和R2各自獨(dú)立地進(jìn)一步優(yōu)選為C14-至C20-，尤其是C14-至C18-殘 基。
[0034] 優(yōu)選地，Ri和R2各自獨(dú)立地為線性飽和的C12-至C24-、尤其是C12-至C20-烷基殘 基。
[003引最優(yōu)選地，Ri和R2獨(dú)立地為線性飽和的C14-、C16-或C18-烷基殘基。
[0036]在其它實(shí)施方案中，Ri和R2優(yōu)選地各自獨(dú)立地為C13-至C19-、尤其是C13-至C17-殘 基。最優(yōu)選地，R哺R2獨(dú)立地為線性飽和的C13-、C15-或C17-烷基殘基。
[0037] 適宜的憐脂酷膽堿為，例如，1-棟桐酷基-2-油酷基甘油-3-憐酸膽堿、1-硬脂酷 基-2-油酷基-3-憐酸膽堿、1-棟桐酷基-2-月桂酷基甘油-3-憐酸膽堿、1-山齋酷基-2-油酷 基甘油-3-憐酸膽堿、1-硬脂酷基-2-月桂酷基甘油-3-憐酸膽堿、1,3-二肉豆違酷基甘油-2-憐酸膽堿、1,2-二肉豆違酷基甘油-3-憐酸膽堿、1-棟桐酷基-2-肉豆違酷基甘油-3-憐酸 膽堿、1-硬脂酷基-2-肉豆違酷基甘油-3-憐酸膽堿、1-肉豆違酷基-2-棟桐酷基甘油-3-憐 酸膽堿、1，3-棟桐酷基甘油-2-憐酸膽堿、1，2-二棟桐酷基甘油-3-憐酸膽堿、1-肉豆違酷 基-2-硬脂酷基甘油-3-憐酸膽堿、1-硬脂酷基-3-肉豆違酷基甘油-2-憐酸膽堿、1-硬脂酷 基-2-棟桐酷基甘油-3-憐酸膽堿、1-棟桐酷基-2-硬脂酷基甘油-3-憐酸膽堿、1，3-二硬脂 酷基甘油-2-憐酸膽堿、1，2-二硬脂酷基甘油-3-憐酸膽堿、1，2-二花生酷基甘油-3-憐酸膽 堿、1，2-二山齋酷基甘油-3-憐酸膽堿和1，2-雙二十四酷基甘油-3-憐酸膽堿。
[0038]刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)，尤其是熱敏性脂質(zhì)體，包含至少一種具有在35°C至42 °C范圍內(nèi)、還更優(yōu)選在39°C至41°C范圍內(nèi)的主轉(zhuǎn)變溫度的憐脂酷膽堿。包含所述憐脂酷膽 堿的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)，尤其是熱敏性脂質(zhì)體，具有內(nèi)容物的釋放溫度，該釋放溫 度允許脂質(zhì)體在正常循環(huán)(在37°C下）中穩(wěn)定并由于熱的作用(尤其是熱的局部作用，在39 °0至41°0的溫度下）釋放其內(nèi)容物。具有40至43°C的釋放溫度的刺激-敏感性納米載體系 統(tǒng)，尤其是熱敏性脂質(zhì)體，為特別優(yōu)選。根據(jù)本發(fā)明的刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)，尤其是熱 敏性脂質(zhì)體，特別優(yōu)選地包含至少一種選自1,3-二棟桐酷基-憐脂酷膽堿和1,2-二棟桐酷 基-憐脂酷膽堿的憐脂酷膽堿。
[0039]刺激-敏感性納米載體系統(tǒng)，尤其是熱敏性脂質(zhì)體，優(yōu)選包含天然構(gòu)型的式（I)的 憐脂酷膽堿：
[0040]
[0041] 其中
[0042]r1、r2如上定義，
[0043]sn=立體特異性編號(hào)
[0044]PC=憐酸膽堿 [004引Tm=相變溫度
[0046]構(gòu)型：天然的
[0047]名稱:1，2-二酷基-sn-甘油-3-憐酸膽堿
[0048]用于治療應(yīng)用的優(yōu)選的憐脂酷膽堿為具有約40°C相變溫度的那些。刺激-敏感性 納米載體系統(tǒng)、尤其是脂質(zhì)體的Tm，可通過添加Tm<40°C的憐脂酷膽堿或通過添加Tm>40°C 的憐脂酷膽堿調(diào)至期望的溫度。已經(jīng)證明>4個(gè)C此基團(tuán)的燒鏈長度的差別導(dǎo)致相分離并因 此應(yīng)當(dāng)避免。
[0049]對(duì)于不依賴于在約37°C下的穩(wěn)定性和在42°C下的活性成分釋放的其它應(yīng)用，可W 使用具有< 37°C或> 45°C