一種眼用荷正電納微球藥物載體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥物載體領(lǐng)域，具體涉及一種眼用荷正電納微球藥物載體及其制備方法，實現(xiàn)眼內(nèi)定向轉(zhuǎn)運藥物。
技術(shù)背景
[0002]眼底疾病是極具視覺損傷和致盲風(fēng)險的眼部病變，并且病種多樣，既包括老年黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變等常見的視網(wǎng)膜/脈絡(luò)膜血管性疾病，也包括巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎、急性視網(wǎng)膜壞死等感染性疾病。由于人口老齡化、艾滋病的傳播、不健康生活習(xí)慣和早產(chǎn)兒的救護水平提升等多種因素，近年來眼底疾病的發(fā)病率不斷上升，據(jù)北京市最新的流行病學(xué)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，各類眼底疾病的總發(fā)病率在1.4%以上，需要通過藥物治療的眼底疾病保守估計在1.2%以上。
[0003]玻璃體腔注射藥物是臨床治療眼底疾病的重要方式，盡管如此，玻璃體注射給藥在臨床應(yīng)用上仍存在許多缺陷:(I)半衰期短，需要頻繁的重復(fù)注射;(2)藥物在眼內(nèi)自由彌散，無特異性；(3)無法調(diào)控藥物進入視網(wǎng)膜的不同亞層。
[0004]眼球存在生理性電勢差，有如天然電池，前端為正極，后端為負(fù)極。如圖1所示，同中性或帶負(fù)電荷的粒子相比，帶正電荷的粒子將更趨向于被眼后段的視網(wǎng)膜表面吸附；同時，帶正電的高分子如殼聚糖還被證明可以可逆地打開細(xì)胞間的緊密連接，便于進一步進入視網(wǎng)膜深層。因此，如能巧妙利用眼內(nèi)微電場這一生理特性，通過制備粒徑尺寸和表面電荷可調(diào)控的納微球，研究帶電粒子在眼內(nèi)微電場中的運動行為，系統(tǒng)評價納微球的荷/質(zhì)比對視網(wǎng)膜定向及進入視網(wǎng)膜不同層次的影響，就有可能篩選出能夠用于玻璃體腔注射、可定向視網(wǎng)膜、并能調(diào)控進入視網(wǎng)膜不同亞層的納微球，在此基礎(chǔ)上進一步包埋藥物，實現(xiàn)對于藥物的緩慢釋放，解決眼內(nèi)藥物注射存在的一系列問題。因此，開發(fā)兼具多級定向和緩釋功能的藥物載體系統(tǒng)無疑會很大程度上減少玻璃體腔注射藥物的頻率和副作用，提升治療效果，無論在醫(yī)療價值、社會效益還是市場應(yīng)用上，都前景廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種可眼內(nèi)定向轉(zhuǎn)運藥物的藥物載體，該載體需具有一定的正電荷，經(jīng)過玻璃體腔注射后可以在眼內(nèi)微電場的作用下富集于眼底;進一步通過調(diào)節(jié)電荷量，可以進一步調(diào)控載體滲透進入眼底的不同亞層，從而實現(xiàn)對眼底亞層病變部位的多級靶向作用，解決藥物生物利用度低，毒副作用大等問題，顯著提高治療效果O
[0006]為達到此發(fā)明目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種荷正電納微球藥物載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟:
步驟一、稱取一定量的油溶性高分子溶解于有機溶劑中作為油相，與水相混合后制備水包油型乳液；
步驟二、將步驟一的水包油型乳液在室溫下攪拌過夜至有機溶劑揮發(fā)完畢，用蒸餾水離心洗滌若干次，得到納微球；
步驟三、將上述制得的納微球懸浮于不同濃度的親水性正荷電高分子溶液中，在垂直混懸儀上孵育，進行正電荷修飾；
步驟四、微球的電荷量可以通過高分子的濃度或者電荷基團的取代度來調(diào)節(jié)；
至此，荷正電納微球藥物載體的制備完成。
[0007]其中，進行藥物包埋時，若藥物為疏水性藥物，則在步驟一中將藥物與油溶性高分子一起溶解于油相中進行包埋;若藥物為親水性藥物，則先將其溶解為內(nèi)水相，再采用復(fù)乳的形式進行負(fù)載，或在步驟三或步驟五中與荷電高分子一起吸附在納微球上。
[0008]作為本發(fā)明的優(yōu)選技術(shù)方案，所述步驟一中，水包油型乳液的制備方法為攪拌法、超聲法、沉淀法、均質(zhì)乳化或微孔膜乳化法，優(yōu)選能夠制備出均一乳液的微孔膜乳化技術(shù)。
[0009]優(yōu)選的，所述步驟三中，采用的電荷修飾方法為吸附法或化學(xué)偶聯(lián)法。
[0010]所述步驟一中，油溶性高分子可以為聚乳酸類高分子或聚酯類高分子。
[0011 ] 所述步驟二中得到的納微球的粒徑范圍為Inm?ΙΟμπι，優(yōu)選10?500nm的納米球。
[0012]所述步驟三中，其中正電荷的高分子可以為殼聚糖、季銨化殼聚糖、聚乙烯亞胺或聚賴氨酸。
[0013]本發(fā)明還保護一種荷正電納微球藥物載體，其特征在于:其利用權(quán)利要求1?5任意一項所述的方法制備形成，粒徑范圍為Inm?ΙΟμπι，優(yōu)選1nm?500nm;電荷范圍為0.1?2 O Omv，優(yōu)選 5 ?50mv。
[0014]此外，還保護上述荷正電納微球藥物載體作為眼內(nèi)疾病治療用藥物定向轉(zhuǎn)運載體的應(yīng)用。其中，所述眼內(nèi)疾病為老年黃斑變性、糖尿病視網(wǎng)膜病變、視網(wǎng)膜靜脈阻塞、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、巨細(xì)胞病毒性視網(wǎng)膜炎或急性視網(wǎng)膜壞死。
[0015]所述眼內(nèi)疾病治療用藥物是小分子化學(xué)藥物、蛋白質(zhì)多肽類藥物、抗體藥物或基因藥物等其中的一種或者多種聯(lián)用。
[0016]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢在于:
1、本發(fā)明藥物載體帶正電荷，可以實現(xiàn)在眼內(nèi)的定向轉(zhuǎn)運，經(jīng)過玻璃體腔注射后，在眼內(nèi)微電場作用下富集于眼底;通過調(diào)節(jié)載體的荷電量，可以進一步調(diào)控載體滲透進入眼底的不同亞層，從而實現(xiàn)對眼底亞層病變部位的多級靶向作用，解決藥物生物利用度低，毒副作用大等問題，顯著提高治療效果；
2、本發(fā)明藥物載體可使用的原料來源廣泛，可針對不同眼底疾病裝載不同的藥物，具有普適性。
【附圖說明】
[0017]圖1是不同荷正電納微球藥物載體在眼內(nèi)微電場作用下的運動及分布示意圖；
圖2是不同荷電NP的制備不意圖；
圖3是NP++的掃描電鏡圖；
圖4是NP—、NP-、NPO、NP+、NP++不同的荷電NP置于稀釋的凝膠中在體外模擬微電場作用下的運動情況；
圖5a是體外滲透模擬裝置示意圖；
圖5b是不同荷電的NP滲透單層RF/6A視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的定量數(shù)據(jù)； 圖5c是不同荷電的NP滲透單層RF/6A細(xì)胞的激光共聚焦照片；
圖5d是不同荷電的NP對離體豬眼視網(wǎng)膜的滲透情況；
圖6a是注射不同荷電NP(熒光標(biāo)記)后的離體眼球熒光成像；
圖6b是不同荷電NP的眼內(nèi)滯留時間；
圖6c不同荷電NP在眼底的滲透情況；
圖7a為眼底血管造影圖片；
圖7b脈絡(luò)膜新生血管鋪片；
圖7c脈絡(luò)膜新生血管面積分析；
圖7d治療后眼壓數(shù)據(jù)。
【具體實施方式】
[0018]以下通過【具體實施方式】來進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案，所述實施例僅是幫助理解本發(fā)明，不應(yīng)視為對本發(fā)明的具體限制。如圖1所示，是不同荷正電納微球藥物載體在眼內(nèi)微電場作用下的運動及分布示意圖理論上，本發(fā)明藥物載體帶正電荷，可以實現(xiàn)在眼內(nèi)的定向轉(zhuǎn)運，經(jīng)過玻璃體腔注射后，在眼內(nèi)微電場作用下富集于眼底;通過調(diào)節(jié)載體的荷電量，可以進一步調(diào)控載體滲透進入眼底的不同亞層，從而實現(xiàn)對眼底亞層病變部位的多級靶向作用，解決藥物生物利用度低，毒副作用大等問題，顯著提高治療效果。理論上，只要是正電荷的藥物載體均具備上述多級靶向的潛力，制備方法和所用材料并不局限于上述內(nèi)容。
[0019](I)稱取一定量的油溶性高分子溶解于二氯甲烷中作為油相，1#%聚乙烯醇(polyvinyl alcohol，PVA)為水相，混合后制備0/W(水包油)型乳液，室溫攪拌過夜至二氯甲烷揮發(fā)完畢后，用蒸餾水離心洗滌5次，即可得到納微球。其中油溶性高分子可以為聚乳酸類高分子、聚酯類高分子等;其中制備乳液的方法可以是通過攪拌、超聲、均質(zhì)乳化或者微孔膜乳化的技術(shù)，優(yōu)選能夠制備出均一乳液的微孔膜乳化技術(shù);其中納微球的粒徑范圍在Inm?ΙΟμπι，考慮到小粒徑具有更高的荷質(zhì)比，有利于在微電場中的運動，優(yōu)選10?500nm的納米球(Nanopart icle，NP)。
[0020](2)將上述制得的NP懸浮于不同濃度親水性的正荷電高分子溶液中，在垂直混懸儀上孵育后，高分子將借助靜電作用吸附于負(fù)電荷的NP上，用去離子水離心洗滌既得帶不同程度正電荷的NP。其中正電荷的高分子可以為殼聚糖、季銨化殼聚糖、聚乙烯亞胺、聚賴氨酸等;其中載體電荷范圍在0.1?200mv，優(yōu)選5-50mv，以兼顧荷電量和生物安全性。
[0021](3)作為對照組，(2)中的NP可以進一步懸浮于不同濃度親水性的負(fù)荷電高分子溶液中，在垂直混懸儀上孵育后，高分子將借助靜電作用吸附于正電荷的納微球上，用去離子水離心洗滌即得帶不同程度