本發(fā)明屬于生物，具體涉及一種結(jié)合人il-8抗原的單克隆抗體及其應用。

背景技術(shù)：

1、白介素-8(interleukin-8，il-8)，又稱為cxcl8，屬于cxc亞型，是最早發(fā)現(xiàn)的趨化性細胞因子。il8是一種分子量很小的蛋白，約8kd。成熟的il8包括79aa、72aa、71aa、70aa和69aa六種形式，其中以72aa為主。不同分子量的il-8誘導中性粒細胞趨化和脫顆粒的能力不同，含72個氨基酸的il-8活性最強，即通常所指的成熟il-8。il-8分為α和β兩個亞群，il-8初始翻譯產(chǎn)物為99個氨基酸，在單核和巨噬細胞中剪切成72個氨基酸，分子量為8kda活性物質(zhì)。il-8主要由單核細胞和巨噬細胞分泌，功能是募集和活化中性粒細胞，促使炎癥反應和細胞殺傷。另外腫瘤細胞、成纖維細胞、內(nèi)皮細胞等在il-1β、腫瘤壞死因子α、脂多糖等促炎癥因子的作用下，通過自分泌或旁分泌il-8影響腫瘤細胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移以及腫瘤血管的形成。

2、il-8通過與il-8受體結(jié)合發(fā)揮作用。il-8有2種受體，分別是cxcr1(il-8ra)和cxcr2(il-8rb)。這2個受體存在77％的同源性，都屬于g蛋白偶聯(lián)受體。因為n端存在結(jié)構(gòu)差異，2個受體與il-8的親和性不同，cxcr1與il-8親和性較高。在正常組織細胞中，cxcr1首先與粒細胞趨化蛋白2(gcp-2)結(jié)合形成復合體，然后與il-8結(jié)合發(fā)揮作用；cxcr2與il-8的親和性較低，除il-8外，cxcr2還可以與cxcl1、2、3、5、7等多種配體結(jié)合。il-8刺激cxcr1和/或cxcr2受體后，激活異源三聚體小g蛋白后，il-8信號傳導促進主要效應子(pi3-k)或磷脂酶c活化，從而促進akt，pkc，鈣動員和/或mapk信號傳導級聯(lián)反應的活化。

3、il-8是一種多功能因子，其生物學功能無種屬特異性。早期發(fā)現(xiàn)中性粒細胞是其作用的靶細胞，能特異性趨化中性粒細胞進入炎性組織，促使其脫顆粒，產(chǎn)生超氧陰離子，引起呼吸暴發(fā)；并激活炎性細胞；促進急性期蛋白合成；引起發(fā)熱、參與炎癥病理性損害；促進炎性介質(zhì)釋放；促進成纖維細胞增殖－慢性炎癥，所以在炎性反應中起重要作用。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)il-8能作用于不同細胞，它能促進炎性反應進程、刺激血管的形成、促有絲分裂、調(diào)節(jié)宿主免疫功能等，與多種炎性反應性疾病、腫瘤、免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。

4、近年來，越來越多研究表明腫瘤免疫微環(huán)境中il-8發(fā)揮重要生物學功能：①il-8能夠招募中性粒細胞和巨噬細胞到腫瘤微環(huán)境中，這些細胞在腫瘤發(fā)展中起到關(guān)鍵作用，包括促進血管生成和腫瘤細胞增殖；②il-8可以誘導新血管的形成，這些新血管為腫瘤提供必要的營養(yǎng)和氧氣，支持其快速增長；③促進腫瘤干細胞的活性：il-8可以通過吸引特定的免疫細胞，間接支持腫瘤干細胞的存活和增殖，這些細胞被認為是腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的主要原因。且多項研究證明，il-8與癌癥患者的預后呈負相關(guān)。例如，在黑色素瘤的治療中，高il-8水平與較短的總生存期相關(guān)聯(lián)；在pd-1抑制劑的單一或聯(lián)合治療中，高il-8水平的患者預后也較差。這些研究結(jié)果表明，il-8可能通過抑制適應性免疫和促進免疫耐受，從而對癌癥患者的預后產(chǎn)生負面影響。

5、因此，研發(fā)可以特異性結(jié)合il-8抗原的單克隆抗體，對il-8相關(guān)疾病的診斷和治療具有重要意義。現(xiàn)有技術(shù)中，cn1309738c專利公開了一種抗il-8單克隆抗體、其可變區(qū)序列及其應用。該發(fā)明公開了一種具有中和il-8生物活性的單克隆抗體以及該單克隆抗體的可變區(qū)序列。其以il-8為免疫源，以小鼠為免疫對象，通過免疫注射小鼠，取免疫小鼠脾臟制備懸液，并使之與骨髓瘤細胞進行細胞融合獲得可表達抗il-8單克隆抗體的雜交瘤細胞株以制備抗il-8單克隆抗體。該單克隆抗體可以與il-8特異性結(jié)合。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種抗il-8的單克隆抗體，該單克隆抗體能夠特異性結(jié)合靶標抗原il-8，為后續(xù)il-8介導的相關(guān)疾病的診斷和治療提供了支持。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

3、抗il-8的單克隆抗體，所述單克隆抗體的重鏈cdr區(qū)包括氨基酸序列如seq?idno.5所示的cdr1、seq?id?no.6所示的cdr2和seq?id?no.7所示的cdr3；所述單克隆抗體的輕鏈cdr區(qū)包括氨基酸序列如seq?id?no.8所示的cdr4、seq?id?no.9所示的cdr5和seq?idno.10示的cdr6。

4、進一步，所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.3所示；所述單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.4所示。

5、進一步，所述il-8為人il-8抗原。

6、本發(fā)明的目的之二在于提供一種編碼前述單克隆抗體的核酸分子。

7、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

8、編碼前述單克隆抗體的核酸分子。

9、進一步，編碼所述單克隆抗體重鏈可變區(qū)的核苷酸序列包含seq?id?no.1所示序列。

10、進一步，編碼所述單克隆抗體輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列包含seq?id?no.2所示序列。

11、本發(fā)明的目的之三在于提供一種用于檢測il-8表達水平的試劑盒。

12、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

13、用于檢測il-8表達水平的試劑盒，所述試劑盒含有前述單克隆抗體。

14、本發(fā)明的目的之四在于提供一種前述單克隆抗體在制備用于診斷和/或治療il-8介導的相關(guān)疾病的產(chǎn)品中的應用。

15、進一步，所述相關(guān)疾病包括covid-19、腫瘤和/或相關(guān)自免疾病。

16、作為更優(yōu)選，所述腫瘤為膠質(zhì)母細胞瘤。

17、本發(fā)明的目的之五在于提供一種前述單克隆抗體在制備用于檢測il-8表達水平的試劑和/或試劑盒中的應用。

18、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

19、前述單克隆抗體在制備用于檢測il-8表達水平的試劑和/或試劑盒中的應用，所述試劑和/或試劑盒用于對il-8介導的相關(guān)疾病的患者進行早期診斷、疾病發(fā)展進程監(jiān)測和/或預后判斷。

20、進一步，用流式分選、免疫組化或elisa進行檢測。

21、進一步，所述相關(guān)疾病包括covid-19、腫瘤和/或相關(guān)自免疾病。

22、作為更優(yōu)選，所述腫瘤為膠質(zhì)母細胞瘤。

23、作為優(yōu)選，所述流式分選中，檢測對象為gl261-mcherry-il-8細胞。

24、本發(fā)明的有益效果在于：

25、1.il-8在機體內(nèi)發(fā)揮多種生物學功能，且與多種疾病相關(guān)。本發(fā)明針對此開發(fā)了一種抗人il-8的單克隆抗體，該抗體能夠特異性結(jié)合人il-8，且具有較好的親和力。經(jīng)過體外實驗驗證，可用于診斷和治療il-8介導的相關(guān)疾病。

26、2.本發(fā)明提供的抗il-8單克隆抗體(b52抗體)可以結(jié)合gl261-mcherry-il-8細胞，并呈現(xiàn)濃度依賴關(guān)系，表明該b52抗體可用于表達il-8細胞的流式檢測。