本發(fā)明屬于生物化學(xué)，具體涉及一種烯效唑單克隆抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、烯效唑?qū)儆谌蝾惢衔?，是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，具有殺菌除草、抗倒伏，提高耐旱性和作物產(chǎn)量等作用，常用于水稻、小麥、大豆、花生和油菜等作物。據(jù)報(bào)道，烯效唑?qū)θ艘约皠?dòng)物的內(nèi)分泌有一定的副作用，有致畸風(fēng)險(xiǎn)，甚至?xí)贵w內(nèi)器官遭受變異毒害。因此，烯效唑的使用安全性受到廣泛關(guān)注。許多國家陸續(xù)制定烯效唑的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，例如，日本規(guī)定在一些果蔬中烯效唑的殘留限量要求為0.05～0.5?mg/kg；我國食品安全標(biāo)準(zhǔn)《gb2763-2021》規(guī)定，糙米中烯效唑的最大殘留量為0.1?mg/kg，小麥、大豆、花生仁、油菜籽中烯效唑的最大殘留量為0.05?mg/kg，每日容許攝入量為0.02?mg/kg。

2、目前，國內(nèi)外檢測烯效唑的方法主要包括氣相色譜、液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜-質(zhì)譜等儀器分析方法。這些方法繁瑣復(fù)雜，耗時(shí)耗力，對檢測人員的要求高，且不適合現(xiàn)場檢測。而免疫分析法是基于抗原、抗體間的特異性結(jié)合機(jī)理建立的檢測方法，該方法具有操作快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留、真菌毒素等有害物的檢測。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一，提供一種烯效唑單克隆抗體及其應(yīng)用，具體提供一種烯效唑單克隆抗體、編碼基因、烯效唑半抗原、烯效唑抗原及應(yīng)用，本發(fā)明的烯效唑單克隆抗體對烯效唑具有較高的靈敏度與特異性，可以通過間接競爭的方式用于烯效唑農(nóng)藥殘留的免疫學(xué)分析。

2、本發(fā)明的技術(shù)解決方案如下：

3、本發(fā)明的第一方面提供一種烯效唑單克隆抗體，所述烯效唑單克隆抗體包括重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)；

4、所述重鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?idno.5、seq?id?no.6和seq?id?no.7所示；

5、所述輕鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分別如seq?idno.8、seq?id?no.9和seq?id?no.10所示。

6、優(yōu)選地，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

7、優(yōu)選地，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

8、本發(fā)明的第二方面提供編碼所述的烯效唑單克隆抗體的基因，其中，

9、編碼如seq?id?no.5、seq?id?no.6和seq?id?no.7所示的氨基酸序列的核苷酸序列分別如seq?id?no.11、seq、id?no.12和seq?id?no.13所示；

10、編碼如seq?id?no.8、seq?id?no.9和seq?id?no.10所示的氨基酸序列的核苷酸序列分別如seq?id?no.14、seq?id?no.15和seq?id?no.16所示。

11、優(yōu)選地，編碼如seq?id?no.1和seq?id?no.2所示的氨基酸序列的核苷酸序列分別如seq?id?no.3和seq?id?no.4所示；

12、本發(fā)明的第三方面提供一種烯效唑半抗原，用于制備所述的烯效唑單克隆抗體，所述烯效唑半抗原具有如下結(jié)構(gòu)式：

13、。

14、本發(fā)明的第四方面提供一種烯效唑半抗原的制備方法，包括如下步驟：

15、s1、將1,2,4-1h-三唑與5-溴-3,3-二甲基-4-氧代戊酸進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)純化得到化合物1；

16、s2、將所述化合物1與乙酸酐、碳酸鉀和?4-氯苯甲醛進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)純化得到所述烯效唑半抗原；

17、其中，所述化合物1具有如下的結(jié)構(gòu)式：

18、。

19、優(yōu)選地，所述1,2,4-1h-三唑和5-溴-3,3-二甲基-4-氧代戊酸的加入比例為1.5g~2.5g：4ml~6ml；

20、所述化合物1、乙酸酐、碳酸鉀和?4-氯苯甲醛的加入比例為0.5g~1.5g：4ml~6ml?：1.5g?~2.5g：0.6g~1.0g。

21、本發(fā)明的第五方面提供一種烯效唑抗原，用于制備所述的烯效唑單克隆抗體，所述烯效唑抗原具有如下的結(jié)構(gòu)式：

22、；

23、其中，所述bsa為牛血清白蛋白，所述ova為卵清蛋白。

24、本發(fā)明的第六方面提供所述的烯效唑單克隆抗體或所述的基因或所述的烯效唑半抗原或所述的烯效唑抗原在檢測烯效唑中的應(yīng)用。

25、優(yōu)選地，將所述烯效唑單克隆抗體采用間接競爭elisa的方法檢測待測樣本中的烯效唑含量。

26、本發(fā)明至少具有以下有益效果之一：

27、本發(fā)明先通過化學(xué)合成法，制備得到一種烯效唑半抗原；再通過在烯效唑半抗原上偶聯(lián)載體蛋白，得到一種烯效唑抗原；最后通過烯效唑抗原免疫動(dòng)物制備得到烯效唑單克隆抗體。

28、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明提供的烯效唑單克隆抗體對烯效唑具有較高的靈敏度與特異性，所述烯效唑單克隆抗體可以通過間接競爭的方式用于烯效唑農(nóng)藥殘留的免疫學(xué)分析，實(shí)現(xiàn)對食品中烯效唑殘留的高靈敏、準(zhǔn)確、快速檢測，對保障食品安全具有重要意義。

技術(shù)特征：

1.一種烯效唑單克隆抗體，其特征在于，

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的烯效唑單克隆抗體，其特征在于，

3.編碼權(quán)利要求1~2任一項(xiàng)所述的烯效唑單克隆抗體的基因，其特征在于，

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的基因，其特征在于，

5.一種烯效唑半抗原，其特征在于，用于制備權(quán)利要求1~2任一項(xiàng)所述烯效唑單克隆抗體，所述烯效唑半抗原具有如下結(jié)構(gòu)式：

6.權(quán)利要求5所述烯效唑半抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，

8.一種烯效唑抗原，其特征在于，用于制備權(quán)利要求1~2任一項(xiàng)所述烯效唑單克隆抗體，所述烯效唑抗原具有如下的結(jié)構(gòu)式：

9.如權(quán)利要求1~2任一項(xiàng)所述的烯效唑單克隆抗體或權(quán)利要求4~5任一項(xiàng)所述的基因或權(quán)利要求5所述的烯效唑半抗原或權(quán)利要求8所述的烯效唑抗原在檢測烯效唑中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，將所述烯效唑單克隆抗體采用間接競爭elisa的方法檢測待測樣本中的烯效唑含量。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種烯效唑單克隆抗體及其應(yīng)用，涉及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。單克隆抗體的重鏈的互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO?.5、SEQ?ID?NO?.6、SEQ?ID?NO?.7所示；輕鏈的互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO?.8、SEQ?ID?NO?.9、SEQ?ID?NO?.10所示；本發(fā)明還提供了編碼上述氨基酸序列的基因以及用于制備單克隆抗體的烯效唑半抗原和烯效唑抗原；本發(fā)明還提供了所述抗體在檢測烯效唑中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果是公開了高靈敏度與高特異性的烯效唑的單克隆抗體，對烯效唑具有較優(yōu)的檢測靈敏度與特異性。

技術(shù)研發(fā)人員：何慶華,危泰龍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南昌大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15