本發(fā)明涉及生物，具體的，本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)染色體外mycl基因擴(kuò)增的探針組合及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、肺癌是我國(guó)目前發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，患病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。小細(xì)胞肺癌（small?cell?lung?cancer,?sclc）是一種惡性度高、預(yù)后較差的肺癌亞型，既往文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)ycl基因擴(kuò)增是sclc的預(yù)后不良標(biāo)志物（qin,?j.,?et?al.,?mycl1?amplificationand?expression?of?l-myc?and?c-myc?in?surgically?resected?small-cell?lungcarcinoma.?pathology?oncology?research?:?por,?2021.?27:p.?1609775）。國(guó)外的研究表明，這種mycl擴(kuò)增可能是位于染色體外環(huán)狀dna（ecdna）上，并與不良預(yù)后相關(guān)（pongor,l.s.,?et?al.,?extrachromosomal?dna?amplification?contributes?to?small?celllung?cancer?heterogeneity?and?is?ass℃iated?with?worse?outcomes.?cancerdiscovery,?2023.）。

2、?最近還有文獻(xiàn)報(bào)道，ecdna介導(dǎo)的myc基因擴(kuò)增（ecmyc），包括myc、mycn、mycl，能促進(jìn)sclc的化療耐藥，此外，申請(qǐng)人前期發(fā)表的工作提示，具有ecmyc擴(kuò)增的sclc的免疫細(xì)胞尤其是t細(xì)胞減少，呈現(xiàn)出顯著的免疫抑制性（zhang,?j.?et?al.?p3.13d.04extrachromosomal?myc-paralogs?amplification?defines?immunosuppressivemicroenvironment?with?metastatic?potential?in?small?cell?lung?cancer.?journalof?thoracic?oncology,?volume?19,?issue?10,?s360?-?s361），因此包括mycl在內(nèi)的染色體外myc家族的擴(kuò)增有望作為廣泛期sclc免疫聯(lián)合化療的生物標(biāo)志物。

3、目前，myc基因的擴(kuò)增金標(biāo)準(zhǔn)采用fish來(lái)測(cè)定，然而，市面上的成熟探針多為myc或mycn單色探針（如淋巴瘤中myc擴(kuò)增探針，神經(jīng)母細(xì)胞瘤m中mycn單色探針已經(jīng)獲批用于臨床診斷），國(guó)際上曾報(bào)道m(xù)ycl斷裂探針（break-apart?probe）用于科研實(shí)驗(yàn)，而國(guó)內(nèi)尚無(wú)商品化的mycl擴(kuò)增探針用于臨床診斷。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、基于現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供一種用于檢測(cè)染色體外mycl基因擴(kuò)增的fish探針組合。

2、在一種實(shí)施方式中，該fish探針組合由bac克隆片段rp11-318b17、rp11-204l3、rp11-378i20和rp11-469b24組成，將mycl對(duì)應(yīng)兩個(gè)bac克隆片段rp11-318b17和rp11-204l3標(biāo)記為相同的任意一種顏色的熒光；rp11-378i20和rp11-469b24二者標(biāo)記為相同、但與rp11-318b17和rp11-204l3顏色不同的熒光標(biāo)記。

3、在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，rp11-318b17和rp11-204l3均標(biāo)記為紅色熒光，rp11-378i20和rp11-469b24均標(biāo)記為綠色熒光；或者將標(biāo)記的熒光顏色互換。

4、本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供上述fish探針組合在制備用于檢測(cè)染色體外mycl基因擴(kuò)增的試劑中的應(yīng)用。

5、本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供一種檢測(cè)染色體外mycl基因擴(kuò)增的試劑盒，該試劑盒包含前述的fish探針組合。

6、相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益的技術(shù)效果：

7、1）本發(fā)明首次推出mycl擴(kuò)增探針（amplification?probe）用于臨床診斷，擴(kuò)增探針在檢測(cè)直觀性、定量分析、臨床指導(dǎo)價(jià)值和操作簡(jiǎn)便性方面均優(yōu)于斷裂探針，在實(shí)際應(yīng)用中更適合檢測(cè)已知擴(kuò)增的靶向治療相關(guān)基因，極大降低了檢測(cè)成本；

8、2）本發(fā)明針對(duì)sclc的fish圖像中的mycl染色，具有良好的特異性和敏感性，可用于判讀臨床樣本mycl基因擴(kuò)增情況；

9、3）本研究已經(jīng)100余例開(kāi)展包括陽(yáng)性和陰性對(duì)照在內(nèi)的mycl探針測(cè)試，發(fā)現(xiàn)約10%（10/104）的患者存在mycl基因擴(kuò)增。

技術(shù)特征：

1.一種用于檢測(cè)染色體外mycl基因擴(kuò)增的fish探針組合，該fish探針組合由bac克隆片段rp11-318b17、rp11-204l3、rp11-378i20和rp11-469b24組成，將mycl對(duì)應(yīng)兩個(gè)bac克隆片段rp11-318b17和rp11-204l3標(biāo)記為相同的任意一種顏色的熒光；rp11-378i20和rp11-469b24二者標(biāo)記為相同、但與rp11-318b17和rp11-204l3顏色不同的熒光標(biāo)記。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的fish探針組合，其特征在于，rp11-318b17和rp11-204l3均標(biāo)記為紅色熒光，rp11-378i20和rp11-469b24均標(biāo)記為綠色熒光；或者將標(biāo)記的熒光顏色互換。

3.權(quán)利要求1或2所述的fish探針組合在制備用于檢測(cè)染色體外mycl基因擴(kuò)增的試劑中的應(yīng)用。

4.一種檢測(cè)染色體外mycl基因擴(kuò)增的試劑盒，該試劑盒包含權(quán)利要求1或2所述的fish探針組合。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)染色體外MYCL基因擴(kuò)增的探針組合及應(yīng)用。該探針組合由BAC克隆片段RP11?318B17、RP11?204L3、RP11?378I20和RP11?469B24組成。該探針組合用于檢測(cè)染色體外MYCL基因擴(kuò)增具有100%的雜交效率。不但方便、快速、可靠，而且成功率高，可用于制備用于檢測(cè)染色體外MYCL基因擴(kuò)增的試劑盒。

技術(shù)研發(fā)人員：李曉,楊帆,張經(jīng)緯,琚研,金岳圻,楊恩策,張會(huì)清
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京大學(xué)人民醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15