一種半胱氨酸的檢測試劑及檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種半胱氨酸的檢測試劑及檢測方法。具體地，所述的試劑組合包含銀納米片溶液；其中，所述的銀納米片溶液中含有保護(hù)劑。以及用所述的試劑組合檢測樣品中半胱氨酸的檢測方法。本發(fā)明的試劑盒具有檢測快速，實(shí)驗(yàn)條件簡易，結(jié)果準(zhǔn)確等特征。
【專利說明】-種半脯氨酸的檢測試劑及檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物小分子的檢測領(lǐng)域，具體涉及一種能夠快速、簡便、靈敏的識別出 水溶液中半脫氨酸的檢測方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 在天然氨基酸中，半脫氨酸是唯一一種含有琉基的氨基酸，在生物體及某些植物 體中起著重要的作用。例如，在生物體中半脫氨酸缺乏時，將會導(dǎo)致生長緩慢，頭發(fā)無光澤， 發(fā)生水腫，肝臟，皮膚損傷及身體虛弱等癥狀。因此對于半脫氨酸的檢測具有重要的意義。 而目前傳統(tǒng)的半脫氨酸檢測方法主要有高效液相層析、電化學(xué)、化學(xué)發(fā)光法、分光光度法 等，該些方法都依賴于氧化還原法，或者得到發(fā)光基團(tuán)，或者英光基團(tuán)，并且借助相關(guān)的大 型精密儀器設(shè)備進(jìn)行檢測，而該些方法操作繁瑣，成本花費(fèi)高且耗時長。
[0003] 文獻(xiàn)"Selectively colorimetric detection of cysteine with triangular silver nanoprisms"中，采用的是半脫氨酸的琉基直接和銀片作用，形成銀硫鍵，長時間的 反應(yīng)使銀原子從銀片上剝落下來，其形貌發(fā)生改變，達(dá)到檢測半脫氨酸的目的。但是該反應(yīng) 常溫下反應(yīng)時間長，需要水浴加熱，促使反應(yīng)的進(jìn)行，并且其比色靈敏度為160nM高于本發(fā) 明的方法（如圖1所示，比色靈敏度為25nM)。
[0004] 因此，本領(lǐng)域尚缺乏一種能夠快速、及時、簡便、準(zhǔn)確地檢測出水溶液中低濃度的 半脫氨酸方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種能夠快速、及時、簡便、準(zhǔn)確地檢測出水溶液中低濃度 的半脫氨酸的試劑盒及檢測方法。
[0006] 本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于檢測半脫氨酸的試劑，所述的試劑包含銀納 米片溶液；其中，所述的銀納米片溶液中含有保護(hù)劑。
[0007] 在另一優(yōu)選例中，所述溶液中，銀納米片的濃度為3nM-100nM。
[000引在另一優(yōu)選例中，所述溶液中，銀納米片的濃度為15nM-25nM。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護(hù)劑：
[0011] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[001引 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸堿金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鐘、巧樣酸軸，或其組合。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；堿金屬 鹽、堿±金屬鹽，或其組合。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑的抑值為3-10。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述試劑的抑值為4-9,較佳地為5-8。
[0017] 本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于檢測半脫氨酸的試劑盒，所述的試劑盒包括 如本發(fā)明第一方面所述的試劑；或
[0018] 所述的試劑盒包括組分：
[0019] (i)銀納米粒子前驅(qū)體；
[0020] (ii)還原性試劑；和
[0021] (iii)保護(hù)劑。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述的銀納米粒子前驅(qū)體是可溶性銀鹽。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，或其水溶液，其中，所述的 可溶性測酸鹽優(yōu)選測氨化軸、測氨化鐘，或其組合。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[00巧]在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護(hù)劑：
[0026] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0027] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸堿金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鐘、巧樣酸軸，或其組合。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；（對-賴 醜苯基）苯基麟化堿金屬鹽、（對-賴醜苯基）苯基麟化堿±金屬鹽，或其組合。
[0030] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還包括；含有楓離子的溶液。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，所述的含有楓離子的溶液為楓化鐘溶液。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還包括抑調(diào)節(jié)試劑。
[0033] 在另一優(yōu)選例中，所述的抑調(diào)節(jié)試劑是強(qiáng)酸和/或強(qiáng)堿，較佳地，所述的抑調(diào)節(jié) 試劑選自下組：氨氧化軸、氨氧化鐘、硫酸、硝酸。
[0034] 本發(fā)明的第H方面，提供了一種檢測待測樣品中的半脫氨酸的方法，所述方法包 括：用如本發(fā)明第一方面所述的試劑，或如本發(fā)明第二方面所述的試劑盒對樣品進(jìn)行檢測。 [00巧]在另一優(yōu)選例中，所述方法包括步驟：
[0036] 提供一如本發(fā)明第一方面所述的試劑；
[0037] 提供一樣品水溶液；
[0038] 將所述的試劑加入樣品中使其反應(yīng)，再加入含楓離子的溶液，形成檢測混合液；
[0039] 通過所述檢測混合液光譜學(xué)特征，判斷所述樣品中是否存在半脫氨酸，和/或判 斷樣品中半脫氨酸的含量。
[0040] 在另一優(yōu)選例中，所述的光譜學(xué)特征選自下組；顏色、光吸收強(qiáng)度、吸收光譜峰，或 其組合。
[0041] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括；用肉眼觀察所述檢測混合液的顏色。
[0042] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括；用儀器分析方法檢測所述檢測混合液的顏色。
[0043] 在另一優(yōu)選例中，所述的儀器分析方法選自下組；分光光度檢測法、紫外-可見吸 收光譜法。
[0044] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括；提供一對照混合液，通過比較所述檢測混合液 和所述對照混合液的光譜學(xué)特征，判斷所述樣品中是否存在半脫氨酸，和/或判斷樣品中 半脫氨酸的含量。
[0045] 在另一優(yōu)選例中，所述的對照混合液通過W下步驟制備：
[0046] 提供一不含有半脫氨酸的空白溶液；
[0047] 將所述的試劑加入空白溶液中，并加入含楓離子的溶液，形成對照混合液；
[0048] 通過所述對照混合液和所述檢測混合液的光譜學(xué)特征差異，判斷所述樣品中是否 存在半脫氨酸。
[0049] 在另一優(yōu)選例中，所述的光譜學(xué)特征選自下組；顏色、光吸收強(qiáng)度、吸收光譜峰，或 其組合。
[0050] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括；用肉眼分別觀察所述檢測混合液和所述對照 混合液的顏色。
[0051] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括；用儀器分析方法分別檢測所述檢測混合液和 所述對照混合液的顏色。
[0052] 在另一優(yōu)選例中，所述的儀器分析方法選自下組；分光光度檢測法、紫外-可見吸 收光譜法。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，所述的如本發(fā)明第一方面所述的試劑通過包括W下步驟的方法 制備：
[0054] 提供一溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶液；
[0055] 往上述水溶液中加入還原性試劑，得到銀納米片。
[0056] 在另一優(yōu)選例中，所述的銀納米粒子前驅(qū)體是可溶性銀鹽。
[0057] 在另一優(yōu)選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，或其水溶液，其中，所述的 可溶性測酸鹽優(yōu)選測氨化軸、測氨化鐘，或其組合。
[0058] 在另一優(yōu)選例中，所述溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶液中還含有保護(hù)劑。
[0059] 在另一優(yōu)選例中，所述的溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶液通過W下步驟制備：
[0060] 將銀納米粒子前驅(qū)體和保護(hù)劑加入去離子水中，形成溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的 水溶液。
[0061] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0062] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護(hù)劑：
[0063] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0064] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0065] 在另一優(yōu)選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸堿金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鐘、巧樣酸軸，或其組合。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；堿金屬 鹽、堿±金屬鹽，或其組合。
[0067] 在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括：用抑調(diào)節(jié)試劑調(diào)節(jié)樣品溶液抑至3-10。 [006引在另一優(yōu)選例中，用抑調(diào)節(jié)試劑調(diào)節(jié)樣品溶液至抑值為4-9,較佳地為5-8。
[0069] 在另一優(yōu)選例中，包括步驟：
[0070] 用所述檢測混合液與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較，判斷待測樣品中是否存在半 脫氨酸和/或判斷待測樣品中半脫氨酸的濃度；
[0071] 或所述方法包括：
[0072] 檢測所述檢測混合液的光譜學(xué)特征，并將所得結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到待測樣品 中半脫氨酸的濃度。
[0073] 在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過如下方法制得：
[0074] 配制一系列含有不同濃度的半脫氨酸的檢測混合液，并加入如本發(fā)明第一方面所 述的試劑，從而制得含有不同濃度的半脫氨酸的檢測混合液；
[00巧]測量各檢測混合液的光譜學(xué)特征；
[0076] 繪制"檢測混合液的光譜學(xué)特征-半脫氨酸濃度"曲線，或繪制"相對光譜學(xué)特 征-半脫氨酸濃度"曲線，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0077] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測混合液的光譜學(xué)特征是各檢測混合液的紫外-可見 吸光度或紫外-可見透光度。
[0078] 在另一優(yōu)選例中，所述的相對光譜學(xué)特征是各檢測混合液相對對照混合液的紫 外-可見吸收峰值對應(yīng)的波長之差。
[0079] 在另一優(yōu)選例中，所述方法包括：用所述檢測混合液與標(biāo)準(zhǔn)比色卡進(jìn)行對比。
[0080] 在另一優(yōu)選例中，所述的樣品水溶液是選自下組的樣品經(jīng)過或未經(jīng)過預(yù)處理制成 的溶液：環(huán)境水樣、生物樣品、固態(tài)環(huán)境樣品、食品、化妝品、人體尿液、血樣，或其組合。
[0081] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可W互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0082] 圖1是本發(fā)明中含不同濃度半脫氨酸溶液的檢測混合液的比色檢測結(jié)果圖。
[0083] 圖2是本發(fā)明得到的檢測混合液的紫外可見光光譜吸收波長-半脫氨酸濃度曲線 圖。
[0084] 圖3是本發(fā)明檢測混合液（包括半脫氨酸樣品與其他20種氨基酸樣品）與對照 混合液的肉眼比色圖。
[0085] 圖4是本發(fā)明檢測混合液得到的相對紫外可見光吸收波長位移-半脫氨酸濃度標(biāo) 準(zhǔn)曲線。
[0086] 圖5是本發(fā)明方法檢測混合液得到的紫外波長位移的特異性結(jié)果。

【具體實(shí)施方式】
[0087] 本發(fā)明人經(jīng)過長期而深入的研究，意外地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)銀納米片溶液中存在半脫氨酸 溶液，加入楓離子溶液時，半脫氨酸會阻擋楓離子與銀原子形成楓化銀復(fù)合物，從而使銀納 米片表面等離子體的共振吸收保持不變，呈現(xiàn)原來溶液的顏色，且上述的顯色反應(yīng)非常明 顯，用肉眼即可判斷。基于上述發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人完成了本發(fā)明。
[0088] 術(shù)語
[0089] 如本文所用，術(shù)語"樣品"指任何含有半脫氨酸的物質(zhì)，如泥±樣品、環(huán)境樣品、生 物樣品等。優(yōu)選地，若樣品為非水溶液狀態(tài)，可通過本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)手段預(yù)處理，轉(zhuǎn)化為 水溶液狀態(tài)。所述的樣品水溶液中可w含有任何雜質(zhì)，如金屬離子、有機(jī)可溶性雜質(zhì)、微生 物、塵±等。本發(fā)明所述的樣品中半脫氨酸的含量沒有特別限制，可低至lO^M。
[0090] 如本文所用，術(shù)語"紫外可見光的波長位移"指待測樣品半脫氨酸檢測混合液的最 高吸收峰對應(yīng)的波長（W)與對照混合液的最高吸收峰對應(yīng)的波長（W0)的差值（W-W0)。
[0091] 術(shù)語"檢測混合液"指待測樣品與本發(fā)明的試劑W及含楓離子的溶液形成的混合 液。
[0092] 術(shù)語"標(biāo)準(zhǔn)樣品"是指已知溶液中半脫氨酸濃度的樣品，或空白樣品。
[0093] 術(shù)語"空白樣品"是指已知不含半脫氨酸的樣品。
[0094] 術(shù)語"對照混合液"指標(biāo)準(zhǔn)樣品與本發(fā)明的試劑W及含楓離子的溶液形成的混合 液。所述的標(biāo)準(zhǔn)樣品可W是已知半脫氨酸濃度的樣品，或不含半脫氨酸的空白樣品。
[0095] 半脫氨酸檢測試劑（試劑盒）
[0096] 本發(fā)明提供一種能夠快速、實(shí)時、準(zhǔn)確和簡便地檢測出水溶液體系中半脫氨酸含 量的試劑。
[0097] 當(dāng)初始的銀納米片溶液中加入一定濃度的半脫氨酸溶液時，半脫氨酸與銀納米片 結(jié)合，阻擋楓離子與銀原子形成楓化銀復(fù)合物，使得銀納米片表面等離子體的共振吸收保 持不變，呈現(xiàn)原來溶液的顏色。通過該種抗形貌改變的方法，實(shí)現(xiàn)對水溶液中半脫氨酸的實(shí) 時、快速、簡便的檢測。
[0098] 本發(fā)明的半脫氨酸檢測試劑包含銀納米片溶液，其中，所述的銀納米片溶液中含 有保護(hù)劑。
[0099] 所述的保護(hù)劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可溶性的（對-賴醜 苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0100] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護(hù)劑：
[0101] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0102] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0103] 在另一優(yōu)選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸堿金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鐘、巧樣酸軸，或其組合。
[0104] 在另一優(yōu)選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；堿金屬 鹽、堿±金屬鹽，或其組合。
[0105] 較佳地，所述的試劑的抑值為3-10,更佳地為4-9,最佳地為5-8。
[0106] 本發(fā)明的檢測試劑還可W制備成試劑盒形式，所述的試劑盒包括如本發(fā)明所述的 試劑。
[0107] 在另一優(yōu)選例中，本發(fā)明的檢測試劑還可W制備成如下的試劑盒形式：
[0108] 所述的試劑盒包括組分：
[0109] (i)銀納米粒子前驅(qū)體；
[0110] (u)還原性試劑；和
[0111] (iii)保護(hù)劑。
[0112] 使用時，將銀納米粒子前驅(qū)體與還原性試劑、保護(hù)劑混合，從而形成銀納米片溶 齊U，用于檢測半脫氨酸。
[0113] 在另一優(yōu)選例中，所述的銀納米粒子前驅(qū)體是可溶性銀鹽。
[0114] 在另一優(yōu)選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，或其水溶液。所述的可溶性 測酸鹽優(yōu)選為測氨化軸、測氨化鐘，或其組合。
[0115] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0116] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護(hù)劑：
[0117] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0118] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0119] 在另一優(yōu)選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸堿金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鐘、巧樣酸軸，或其組合。
[0120] 在另一優(yōu)選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；堿金屬 鹽、堿±金屬鹽，或其組合。
[0121] 所述的試劑盒還可W包括含有楓離子的溶液，如楓化鐘溶液。
[0122] 優(yōu)選地，所述的試劑盒還包括抑調(diào)節(jié)試劑，用于調(diào)節(jié)銀納米片溶液的抑至適合檢 測的范圍。
[0123] 在另一優(yōu)選例中，所述的抑調(diào)節(jié)試劑是強(qiáng)酸和/或強(qiáng)堿，較佳地，所述的抑調(diào)節(jié) 試劑選自下組：氨氧化軸、氨氧化鐘、硫酸、硝酸。
[0124] 半脫氨酸檢測方法
[0125] 本發(fā)明人探索出了一種新的方法，能夠快速、及時、簡便、準(zhǔn)確地檢測出水溶液中 低濃度的半脫氨酸，對應(yīng)用于環(huán)境分析及生物醫(yī)學(xué)分析等領(lǐng)域，具有重要的應(yīng)用價值。
[0126] 具體地，本發(fā)明提供了一種半脫氨酸的檢測方法，所述的檢測方法包括：用如本發(fā) 明所述的試劑或試劑盒對待測樣品進(jìn)行檢測。
[0127] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選例中，所述的方法包括步驟：
[012引提供一本發(fā)明的檢測試劑；
[0129] 提供一樣品水溶液；
[0130] 將所述的試劑加入樣品中使其反應(yīng)，再加入含楓離子的溶液，形成檢測混合液；
[0131] 通過所述檢測混合液光譜學(xué)特征，判斷所述樣品中是否存在半脫氨酸，和/或判 斷樣品中半脫氨酸的含量。
[0132] 所述的光譜學(xué)特征可W是（但并不限于）選自下組的特征；顏色、光吸收強(qiáng)度、吸 收光譜峰，或其組合。
[0133] 所述的光譜學(xué)特征可W通過肉眼觀察，如用肉眼觀察所述檢測混合液的顏色；或 通過儀器分析方法檢測所述檢測混合液的顏色，如通過W下的儀器分析方法；分光光度檢 測法、紫外-可見吸收光譜法等。
[0134] 在另一優(yōu)選例中，還可W制備一對照混合液，通過比較檢測組和對照組的光譜學(xué) 特征差異，從而定性或定量地檢測待測樣品中的半脫氨酸。
[0135] 在另一優(yōu)選例中，所述的對照混合液可W通過W下方法制備：
[0136] 提供一空白對比溶液；
[0137] 將所述的試劑加入空白對比溶液中，并加入含楓離子的溶液，形成對照混合液。
[0138] 通過所述對照混合液和所述檢測混合液的光譜學(xué)特征差異，可W判斷所述樣品中 是否存在半脫氨酸。
[0139] 所述的對照混合液可W是用不含半脫氨酸的空白溶液制備的檢測混合液，或用已 知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品制備的檢測混合液。在本發(fā)明中，也可W根據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或國家標(biāo)準(zhǔn)，配制 具有特定濃度半脫氨酸的標(biāo)準(zhǔn)樣品并制備對照混合液，并與待測樣品制備的檢測混合液對 比，從而得出待測樣品中半脫氨酸的濃度是否符合標(biāo)準(zhǔn)。
[0140] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括；用肉眼分別觀察所述檢測混合液和所述對照 混合液的顏色。
[0141] 在另一優(yōu)選例中，所述方法還包括；用儀器分析方法分別檢測所述檢測混合液和 所述對照混合液的光譜學(xué)特征。
[0142] 在另一優(yōu)選例中，所述的儀器分析方法選自下組；分光光度檢測法、紫外-可見吸 收光譜法，或其組合。
[0143] 在所述的檢測方法中，本發(fā)明所述的試劑可W是市售的已配好的試劑，也可W是 現(xiàn)制的。如在本發(fā)明的另一優(yōu)選例中，所述的試劑可W通過包括W下步驟的方法制備：
[0144] 提供一溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶液；
[0145] 往上述水溶液中加入還原性試劑，得到銀納米片。
[0146] 在另一優(yōu)選例中，所述的銀納米粒子前驅(qū)體是可溶性銀鹽。
[0147] 在另一優(yōu)選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，優(yōu)選測氨化軸、測氨化鐘水 溶液，或其組合。
[014引在另一優(yōu)選例中，所述的試劑是用本發(fā)明的試劑盒制備的。
[0149] 在另一優(yōu)選例中，所述的溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶液也可W是現(xiàn)制的，女口 通過W下步驟制備：
[0150] 將銀納米粒子前驅(qū)體和保護(hù)劑加入去離子水中，形成溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的 水溶液。
[0151] 其中，所述的保護(hù)劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可溶性的 (對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0152] 在另一優(yōu)選例中，所述的保護(hù)劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護(hù)劑：
[0153] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0154] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0155] 在另一優(yōu)選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸堿金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鐘、巧樣酸軸，或其組合。
[0156] 在另一優(yōu)選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；堿金屬 鹽、堿±金屬鹽，或其組合。
[0157] 在另一優(yōu)選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸堿金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鐘、巧樣酸軸，或其組合。
[0158] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測方法還包括；用抑調(diào)節(jié)試劑調(diào)節(jié)樣品溶液抑至 3-10。
[0159] 在另一優(yōu)選例中，用抑調(diào)節(jié)試劑調(diào)節(jié)樣品溶液至抑值為4-9,較佳地為5-8。
[0160] 在另一優(yōu)選例中，所述的方法還包括步驟：
[0161] 用所述檢測混合液與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較，判斷待測樣品中是否存在半脫氨酸和/ 或判斷待測樣品中半脫氨酸的濃度。
[0162] 其中，所述的標(biāo)準(zhǔn)樣品是預(yù)制的標(biāo)準(zhǔn)樣品，可W是用含有某一特定濃度（如含有 某種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中臨界點(diǎn)的半脫氨酸濃度）的半脫氨酸的水溶液與本發(fā)明的檢測試劑及含 有楓離子的溶液混合制得的標(biāo)準(zhǔn)樣品，或用一系列含有特定濃度的半脫氨酸的水溶液與本 發(fā)明的檢測試劑及含有楓離子的溶液混合制得的標(biāo)準(zhǔn)樣品組合。
[0163] 在另一優(yōu)選例中，還可W預(yù)制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對所述檢測混合液作光譜分析，將分析 所得的光譜學(xué)特征代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而定量測定所述檢測混合液中的半脫氨酸。標(biāo)準(zhǔn)曲線 的制備可W參考本領(lǐng)域的通用方法，或按照W下的步驟：
[0164] 在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過如下方法制得：
[0165] 配制一系列含有不同濃度的半脫氨酸的檢測混合液，并加入如本發(fā)明第一方面所 述的試劑；
[0166] 測量各檢測混合液的光譜學(xué)特征；
[0167] W標(biāo)準(zhǔn)樣品中半脫氨酸的濃度作為橫坐標(biāo)狂)，W各個樣品的光譜學(xué)特征（如吸 收峰值的波長W)，與空白混合液的相應(yīng)光譜學(xué)特征（如吸收峰值的波長W0)的差值（W-W0) 目P，波長位移作為縱坐標(biāo)（Y)，得出其散點(diǎn)圖，并計(jì)算出二者的線性關(guān)系。
[016引一個典型實(shí)施例的結(jié)果如圖4。在測定未知濃度的檢測液時，W含有各個濃度的半 脫氨酸混合液的吸收峰值的波長（W)與空白混合液的吸收峰值的波長（W0)的差值（W-W0) 代入圖4的公式Y(jié)中，即可獲得半脫氨酸的濃度數(shù)值。
[0169] 在另一優(yōu)選例中，還可W制備標(biāo)準(zhǔn)比色卡，用于與本發(fā)明的檢測混合液進(jìn)行對比， 從而定性或定量地檢測樣品中的半脫氨酸。
[0170] 本發(fā)明中，所述的樣品沒有特別的限制，可W是選自下組的樣品經(jīng)過或未經(jīng)過預(yù) 處理制成的溶液：環(huán)境水樣、生物樣品、固態(tài)環(huán)境樣品、食品、化妝品、人體尿液、人體血樣， 或其組合。
[0171] 本發(fā)明中，一種優(yōu)選的快速檢測溶液中的半脫氨酸的方法具體步驟如下：
[0172] (1)在水溶液中加入巧樣酸化合物，邊攬拌的條件下，加入聚己帰化咯焼麗化合物 作為保護(hù)劑，再加入適量的可溶性銀鹽W及適量的雙氧水，上述混合物加完后攬拌五分鐘， 再快速加入現(xiàn)制的測氨化軸溶液，繼續(xù)攬拌Imin取下，在周圍環(huán)境下放置30min即可得到 藍(lán)寶石色的銀納米片檢測液；并配置一定濃度的楓化鐘溶液。
[0173] (2)配制不含半脫氨酸的水溶液作為空白對比溶液，將對比溶液W及與對比溶液 等體積的被檢測水溶液，并將溶液調(diào)節(jié)成弱酸/弱堿性。從步驟（1)中制得的檢測液，量取 兩份體積相同的檢測液樣品，加入到等量的空白對比溶液和被檢測溶液中，形成第一混合 液和第二混合液；
[0174] (3)往步驟（2)中的第一混合液和第二混合液加入相同量的（1)中配好的楓化鐘 溶液。對比第二混合液與第一混合液的顏色或紫外可見吸收強(qiáng)度、峰值的變化，判斷被檢測 溶液中是否存在半脫氨酸。
[01巧]上述檢測過程中，第一檢測混合液（無半脫氨酸）時的顏色為淺紅色，當(dāng)?shù)诙z測 混合液的顏色相對于第一檢測混合液的顏色變?yōu)樯罴t色或變?yōu)樗{(lán)色時，則判定待測樣本中 含有半脫氨酸，并且半脫氨酸的濃度大于或等于2. 5 X l(T8mol/L。沒有發(fā)生顏色變化，則待 測樣品中不一定含有半脫氨酸。若含有半脫氨酸其濃度低于2. 5X l(T8mol/l，并對未變色 的檢測混合液進(jìn)行紫外可見分光光度計(jì)測量進(jìn)一步確定待測樣品中是否存在半脫氨酸。
[0176] 作為優(yōu)選，提供能夠反映水溶液中半脫氨酸濃度與紫外可見吸收波長關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn) 曲線圖，從而通過本發(fā)明得到的第二混合液的紫外可見吸收波長與該標(biāo)準(zhǔn)曲線圖進(jìn)行對 比，獲得第二混合液中半脫氨酸的濃度。該標(biāo)準(zhǔn)曲線圖的具體繪制方法如下：
[0177] 按照所述的第二混合液的配制方法配制一系列不同濃度的半脫氨酸溶液，在波長 250?900nm區(qū)間內(nèi)掃描其紫外可見吸收波長，W混合液的紫外可見吸收峰值所對應(yīng)的波 長與空白樣品形成的對照混合液的吸收峰值所對應(yīng)的波長的差值為縱坐標(biāo)（波長位移）， 混合液中含有的半脫氨酸濃度為橫坐標(biāo)繪制曲線，即獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，如圖4 ;
[0178] 通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，標(biāo)準(zhǔn)曲線圖繪制時，隨著半脫氨酸濃度的增加，紫外可見吸收峰值 所對應(yīng)的波長范圍優(yōu)選為500?720nm。得到相對紫外可見光波長位移與半脫氨酸濃度的 關(guān)系圖，如圖4。
[0179] 所述的可溶性銀鹽包括硝酸銀、亞硝酸銀和高氯酸銀等，但不限于中的一種或多 種；選用兩種W上時，各化合物之間的比例沒有嚴(yán)格的限制，可為任意比例。
[0180] 所述的聚己帰化咯焼麗包括不同分子量，但不限于及其衍生物的一種或多種；選 用兩種W上時，各化合物之間的比例沒有嚴(yán)格的限制，可為任意比例。
[0181] 所述的巧樣酸化合物包括但不限于指及其類似物，優(yōu)選為巧樣酸、巧樣酸軸、巧樣 酸鐘；選用兩種W上時，各化合物之間的比例沒有嚴(yán)格的限制，可為任意比例。
[0182] 所述的反應(yīng)時間為5-20分鐘；
[0183] 所述的被檢測水溶液可W是環(huán)境中的水樣，例如，河水、湖水W及海水等；可W是 液態(tài)樣品經(jīng)過處理后獲得的樣品，如血液制品、尿液制品等；可W是固態(tài)的環(huán)境樣品（如食 品與蔬菜制品等）經(jīng)過處理后獲得的水溶液。
[0184] 作為優(yōu)選，在步驟（2)中的被檢測液進(jìn)行的抑的調(diào)節(jié)，使其抑值為5到8之間， 然后進(jìn)行步驟（3)的操作，不僅可W節(jié)省檢測時間，而且還可W提高檢測限和靈敏度。對于 強(qiáng)堿性待測樣品溶液，優(yōu)選強(qiáng)酸，優(yōu)先選用硝酸調(diào)節(jié)抑值；對于強(qiáng)酸性待測樣品溶液，優(yōu)選 強(qiáng)堿，特別優(yōu)選利用氨氧化軸/氨氧化鐘溶液調(diào)節(jié)抑值。
[0185] 本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)
[0186] (1)本發(fā)明提供了一種用于檢測水溶液中半脫氨酸的方法，所述的方法可W直接 通過肉眼判別溶液顏色的變化實(shí)現(xiàn)對溶液中半脫氨酸的裸眼比色檢測，也可W通過簡單的 儀器設(shè)備快速檢測溶液體系中的半脫氨酸的含量，從而實(shí)現(xiàn)對被檢測液中半脫氨酸的定性 和定量檢測。
[0187] (2)本發(fā)明的檢測方法操作簡單方便、快速、成本低廉、靈敏度高，并且可W在普通 的實(shí)驗(yàn)室，乃至在采樣現(xiàn)場進(jìn)行快速檢測，適用于生活用水的監(jiān)測W及生物醫(yī)學(xué)分析等領(lǐng) 域，具有廣泛的應(yīng)用價值。
[018引 做使用銀納米片濃度為> 3nM的檢測試劑，本發(fā)明的方法僅通過肉眼比色，即可 達(dá)到最低2. 5Xl(T8mol/L的檢測下限；通過本發(fā)明方法結(jié)合儀器分析手段，還能夠檢測出 更低濃度的半脫氨酸水溶液樣品，具有非常高的靈敏度。
[0189] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，該些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計(jì)算。
[0190] <材料來源〉
[01川 1.巧樣酸軸：購自國藥化學(xué)試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 2.硝酸銀：購自國藥化學(xué)試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 3.聚己帰化咯焼麗；購自阿拉下試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[0194] 4.雙氧水：購自國藥化學(xué)試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 5.半脫氨酸：購自國藥化學(xué)試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 6.楓化鐘；購自阿拉下試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[0197] 通用方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
[019引 （1)制備本發(fā)明的檢測液：所述的檢測液可W通過W下方法制備：
[0199] 往99. 5血的水中依次加入6血30mM的巧樣酸軸、6血0. 7mM的聚己帰化咯焼麗、 500 y L20mM硝酸銀、240 y L30wt%的雙氧水（W上試劑邊攬拌邊加入），加完后混勻攬拌 5min，再迅速加入1血0. 1M測氨化軸溶液，反應(yīng)Imin后，取下放置30min，即可得到由巧樣酸 根、聚己帰化咯焼麗作為保護(hù)劑的藍(lán)色的銀納米片溶液，作為檢測樣品液；并配置1(T 4M的 楓化鐘溶液。
[0200] (2)制備標(biāo)準(zhǔn)樣品；用去離子水和半脫氨酸配制一系列半脫氨酸濃度依次為 0. 050 y M、0. 075 y M、0. 10 y M、0. 25 y M、0. 50 y M和1. 0 y M的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別取不同濃度的 標(biāo)準(zhǔn)溶液各0. ImL，并各自加入0. 85mL步驟1所制備的檢測樣品液，并加入（1)中制備的楓 化鐘溶液（50 y L)。靜置15分鐘。
[0201] (3)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：對上述制備得到的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行紫外可見分光光度計(jì)測量， 在250?900皿區(qū)間內(nèi)測得的紫外可見吸收波長的變化，并記錄500皿與720皿處之間的 吸收峰值波長，并計(jì)算各個樣品在500?720nm處的吸收峰值波長的差值，W標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃 度作為橫坐標(biāo)，峰值波長的差值作為縱坐標(biāo)(波長位移)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線如 圖4所示。
[0202] 樣品的紫外可見光譜檢測
[0203] 等量的銀納米片溶液（850uL)中加入不同濃度的半脫氨酸（lOOuL)，再加入 50uL1〇- 4M KI，反應(yīng)15min后，進(jìn)行紫外測試。在250?900皿區(qū)間內(nèi)測得的紫外可見吸收 波長的變化，得到檢測混合液的紫外可見光光譜吸收波長-半脫氨酸濃度曲線圖（圖2)。
[0204] 不同種類氨基酸的吸收度檢測
[0205] 分別配制20種天然氨基酸的水溶液，其中半脫氨酸的濃度為5 y M，其他氨基酸的 濃度為500 uM，各取0. ImL加入到等量等濃度的銀納米片溶液中，再加入等量等濃度的KI 溶液，反應(yīng)15min，得到檢測混合液的紫外峰值對應(yīng)的波長與空白對照混合液的峰值對應(yīng)的 波長的差值，作為縱坐標(biāo)作柱狀圖，如圖5所示。結(jié)果顯示，本發(fā)明的試劑能夠特異性地檢 測半脫氨酸。
[0206] 實(shí)施例1 ;河水、湖水、海水水樣中半脫氨酸的檢測
[0207] (1)制備檢測液；往99. 5血的水中依次加入6血30mM的巧樣酸軸、6血0. 7mM的聚 己帰化咯焼麗、500 L20mM硝酸銀、240 y L30wt%的雙氧水（W上試劑邊攬拌邊加入），加完 后混勻攬拌5min，再迅速加入ImlO. 1M測氨化軸溶液，反應(yīng)Imin后，取下放置30min，即可 得到由巧樣酸根、聚己帰化咯焼麗作為保護(hù)劑的藍(lán)色的銀納米片溶液，作為檢測樣品液；并 配置1(T 4M的楓化鐘溶液。
[020引（2)待檢測水樣采集；用水樣采集瓶在河、湖中H個不同地點(diǎn)的一定深度（20? 50cm)處采集水樣，得到的混合液用硝酸或氨氧化軸（取決于檢測液樣品的酸堿度）調(diào)節(jié)其 水樣的抑呈弱酸性，W免雜質(zhì)影響檢測效果，并用濾紙過濾水樣，獲得的濾液為待檢測水 樣。
[0209] (3)準(zhǔn)備兩個同樣規(guī)格的試管A和試管B，分別向試管A和試管B中加入相同體積 (0.85血）的檢測液樣品。
[0210] (4)分別向試管A和試管B中加入等體積（0. ImL)的超純水和待檢測水樣，混勻 后，再加入（1)中制備的楓化鐘溶液（50 y L)。觀察試管A和試管B中水溶液顏色變化的情 況。
[0211] 檢測結(jié)果；15分鐘內(nèi)，如果試管B中水溶液相對于試管A中水溶液的顏色發(fā)生變 化（變深紅或變藍(lán)），則判定待檢巧IJ水樣中含有半脫氨酸，且濃度大于或等于2. 5 X 10可1〇1/ L ;若試管B中水溶液相對于試管A中水溶液的顏色沒有發(fā)生變化，則判定待檢測水樣中半 脫氨酸濃度低于2. 5X l(T8mol/L。
[0212] 對檢測混合液進(jìn)行紫外可見分光光度計(jì)測量，在250?900nm區(qū)間內(nèi)測得的紫外 可見吸收波長的變化，并將500nm及720nm處的吸光度差值代入圖4進(jìn)行比對計(jì)算，得到待 檢測液中半脫氨酸的濃度。
[0213] 測定結(jié)果：

【權(quán)利要求】
1. 一種用于檢測半胱氨酸的試劑，其特征在于，所述的試劑包含銀納米片溶液；其中， 所述的銀納米片溶液中含有保護(hù)劑。
2. 如權(quán)利要求1所述的試劑，其特征在于，所述的保護(hù)劑選自下組：檸檬酸、檸檬酸鹽、 聚乙烯吡咯烷酮、可溶性的（對-磺酰苯基）苯基膦化鹽，或其組合。
3. -種用于檢測半胱氨酸的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括如權(quán)利要求1所 述的試劑；或 所述的試劑盒包括組分： (i) 銀納米粒子前驅(qū)體； (ii) 還原性試劑；和 (iii) 保護(hù)劑。
4. 如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還包括：含有碘離子的溶 液。
5. -種檢測待測樣品中的半胱氨酸的方法，其特征在于，包括：用如權(quán)利要求1所述的 試劑，或如權(quán)利要求3所述的試劑盒對樣品進(jìn)行檢測。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，包括步驟： 提供一如權(quán)利要求1所述的試劑； 提供一樣品水溶液； 將所述的試劑加入樣品中使其反應(yīng)，再加入含碘離子的溶液，形成檢測混合液； 通過所述檢測混合液光譜學(xué)特征，判斷所述樣品中是否存在半胱氨酸，和/或判斷樣 品中半胱氨酸的含量。
7. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：提供一對照混合液，通過 比較所述檢測混合液和所述對照混合液的光譜學(xué)特征差異，判斷所述樣品中是否存在半胱 氨酸，和/或判斷樣品中半胱氨酸的含量。
8. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的如權(quán)利要求1所述的試劑通過包括以 下步驟的方法制備： 提供一溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶液； 往上述水溶液中加入還原性試劑，得到銀納米片。
9. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶液 通過以下步驟制備： 將銀納米粒子前驅(qū)體和保護(hù)劑加入去離子水中，形成溶解有銀納米粒子前驅(qū)體的水溶 液。
10. 如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，包括步驟： 用所述檢測混合液與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較，判斷待測樣品中是否存在半胱氨 酸和/或判斷待測樣品中半胱氨酸的濃度； 或所述方法包括： 檢測所述檢測混合液的光譜學(xué)特征，并將所得結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到待測樣品中半 胱氨酸的濃度。
【文檔編號】G01N21/77GK104422688SQ201310367104
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年8月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月21日
【發(fā)明者】吳愛國, 李永龍, 沈折玉, 高月霞, 汪竹青 申請人:中國科學(xué)院寧波材料技術(shù)與工程研究所