簡易型農(nóng)藥三通道半定量檢測金標試紙條傳感器的制造方法
【專利摘要】本發(fā)明設(shè)計農(nóng)藥多殘留快速檢測器具，一種肉眼觀察式農(nóng)藥三通道半定量檢測試紙條傳感器。傳感器包括了進樣口、蓋板、底板以及試紙條區(qū)域四個部分。其中試紙條區(qū)域有四條獨立的傳統(tǒng)金標試紙條組成，每根獨立的金標試紙條的纖維素膜上均勻地分布著三個農(nóng)藥檢測通道，每個通道分別均勻噴上了農(nóng)藥吡蟲啉、甲基毒死蜱和水胺硫磷的包被原，各種包被原的濃度按照四根試紙條的順序依次遞減；四根金標試紙條的金標結(jié)合墊區(qū)域均勻噴射了三種農(nóng)藥的金標抗體的混合物。本發(fā)明試紙條具有檢測靈敏、快速、簡便、直觀，對儀器的依賴程度低，并且前處理簡便，不需要任何儀器設(shè)備，無需專業(yè)人員操作。適合現(xiàn)場快速檢測的需要。
【專利說明】簡易型農(nóng)藥三通道半定量檢測金標試紙條傳感器
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)藥多殘留快速檢測器具，一種肉眼觀察式農(nóng)藥三通道半定量檢測試紙條傳感器。
【背景技術(shù)】
[0002]近20年來，隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的急速發(fā)展，化學(xué)農(nóng)藥的產(chǎn)量和使用量不斷上升。大量使用，甚至不正當(dāng)使用化學(xué)農(nóng)藥，使得化學(xué)農(nóng)藥殘留問題日益突出。這不僅使環(huán)境安全，人們身體健康受化學(xué)農(nóng)藥威脅的概率增大，而且農(nóng)藥最高殘留限量也成為世界各國針對中國農(nóng)產(chǎn)品進出口的重要技術(shù)性貿(mào)易壁壘。因此，發(fā)展化學(xué)農(nóng)藥殘留快速、簡便、靈敏的檢測方法對環(huán)境、食品安全，人們身體健康以及促進社會主義社會經(jīng)濟發(fā)展有著舉足輕重的作用。
[0003]目前，化學(xué)農(nóng)藥的殘留檢測多采用薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等方法。這些方法結(jié)果可靠，靈敏度高，已有相關(guān)的技術(shù)標準可供參考。但由于需要昂貴的儀器、專門的操作人員，以及樣品前處理復(fù)雜、成本高、時間長，因此不能更好地滿足快速簡便的現(xiàn)場檢測要求。
[0004]化學(xué)農(nóng)藥的免疫檢測方法具有快速、廉價、簡便、特異的優(yōu)點，便攜而有利于進行現(xiàn)場監(jiān)測，克服了傳統(tǒng)檢測方法的缺點。免疫金標試紙條時近年來迅速發(fā)展的農(nóng)藥快速免疫檢測技術(shù)。但傳統(tǒng)的試紙條通常只有單根紙條因而對檢測物只能起到定性的作用，或者通過讀條儀方能起到定量作用；同時傳統(tǒng)的試紙條通常只能對單種檢測物進行檢測。為克服傳統(tǒng)試紙條上述不足，該發(fā)明利用三通道半定量金標試紙條傳感器，在傳感器試紙條區(qū)引入了四根獨立的試紙條，同時每根試紙條均勻的噴上了三種檢測物的包被原。起到了農(nóng)藥多殘留、依賴肉眼便可半定量檢測的作用。對我國農(nóng)產(chǎn)品的可持續(xù)健康發(fā)展、解決食品安全問題具有重要的現(xiàn)實意義和重要的社會、經(jīng)濟價值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供針對現(xiàn)有傳統(tǒng)免疫金標試紙條技術(shù)上的不足，提供一種可供肉眼觀察的簡易型農(nóng)藥三通道半定量檢測金標試紙條傳感器。
[0006]本發(fā)明的另一目的是提供該傳感器的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn):
[0008]一種簡易型農(nóng)藥三通道半定量檢測試紙條傳感器，由進樣口、蓋板、底板以及紙條區(qū)域四部分組成。其中試紙條區(qū)域由四根獨立的試紙條組裝而成，試紙條的構(gòu)造與傳統(tǒng)的金標試紙條一致，由襯板和在襯板上依次銜接的樣品墊、金標結(jié)合墊、纖維素膜和吸水墊組成。其中四根試紙條的金標結(jié)合墊上均為吸附三種農(nóng)藥(吡蟲啉、甲基毒死蜱和水胺硫磷)金標抗體混合物的玻璃纖維，其濃度依照四根試紙條順序依次遞減；纖維素膜上分布了三個分別針對上述三種農(nóng)藥的檢測區(qū)域(三通道)，并分別均勻吸附了三種農(nóng)藥的包被原，這三種農(nóng)藥的包被原在纖維素膜上的濃度依照四根試紙條的順序依次遞減，三條檢測通道在纖維素膜上的分布為直線式平行排列。[0009]所述的四根獨立的試紙條由蓋板和底板組裝而成以傳感器，其中四根試紙條上依次遞減的金標抗體以及包被原的濃度為半定量檢測的關(guān)鍵；而在每根試紙條上平行分布的三個針對不同農(nóng)藥(吡蟲啉、甲基毒死蜱和水胺硫磷)的檢測通道為該傳感器多殘留檢測的關(guān)鍵。
[0010]所述的試紙條上的襯板為不吸水的韌性材料，為硬質(zhì)塑膠條或不吸水硬紙條制成。
[0011]所述的樣品墊和金標結(jié)合墊為玻璃纖維素膜，由玻璃纖維素棉制成。
[0012]所述的吸水墊為吸水能力較強的吸水濾紙或濾油紙。
[0013]所述的纖維素膜為硝酸纖維素膜。
[0014]所述的金標抗體混合物為膠體金標記的吡蟲啉、甲基毒死蜱和水胺硫磷單克隆抗體的混合物，所述的包被原分別為偶聯(lián)了吡蟲啉、甲基毒死蜱和水胺硫磷半抗原的雞卵清蛋白0VA。
[0015]有益效果
[0016]本發(fā)明通過對四根試紙條的組裝、每根試紙條上三條檢測通道的優(yōu)化，避免了傳統(tǒng)試紙條的單成分、定性檢測或利用讀條儀方能定量檢測的不足，可用于多組成、依賴肉眼便可半定量的快速現(xiàn)場檢測。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1簡易型農(nóng)藥三通道半定量檢測金標試紙條傳感器的整體效果圖
[0018]圖2傳感器中單根試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖
[0019]圖3三種農(nóng)藥快速檢測試紙條結(jié)果判定示意圖
[0020]圖中，a為陰性樣品檢測結(jié)果，b-e為陽性樣品檢測結(jié)果，并且從b-e陽性樣品中農(nóng)藥濃度依次遞增。
【具體實施方式】
[0021]應(yīng)用實施例
[0022]1.大米樣品液的制備
[0023]取20份大米樣品，每份10g。將配好的三種農(nóng)藥的甲醇溶液隨機加入稱取的20份大米樣品中(農(nóng)藥種類隨機，農(nóng)藥濃度隨機)，樣品靜置20分鐘。靜置后，將大米樣品分別搗碎，并轉(zhuǎn)移至過濾紙中，過濾紙置于普通漏斗中。將含有10%甲醇的PBST緩沖液對研缽充分洗凈后轉(zhuǎn)移至濾紙上，并不斷加入含有10%甲醇的PBST緩沖液對大米樣品進行淋洗，直至淋洗液收集至10毫升時停止加入淋洗液。
[0024]注:上述所收集的淋洗液為待檢測溶液，該溶液同時進行所發(fā)明的傳感器檢測和HPLC檢測，并將兩種檢測結(jié)果進行對比驗證。
[0025]2.檢測及結(jié)果驗證
[0026]將上述收集到的20份淋洗液分別進行傳感器檢測和HPLC檢測。在試紙條檢測中，將120ul淋洗液通過進樣口加入，7分鐘后，可通過紙條上檢測通道紅色線條的是否消失來判斷樣品中所含農(nóng)藥的種類以及所含農(nóng)藥的濃度區(qū)間。如，當(dāng)樣品中僅含有I種農(nóng)藥時，傳感器中的四根試紙條上僅有I個檢測通道(通道I針對吡蟲啉、通道2針對甲基毒死蜱、通道3針對水胺硫磷)的紅色線條消失；當(dāng)樣品中含有2中農(nóng)藥是，傳感器中四根試紙條上僅有相應(yīng)的2個檢測通道消失；當(dāng)含有3種農(nóng)藥是，3個檢測通道都會消失。其中對吡蟲啉而言，淋洗液中含量小于50ng / ml時，通道I不消失；含量為50_200ng / ml時，紙條I的通道I消失；含量為200-500ng / ml時，紙條I和紙條2的通道I均消失；含量為500-1000ng / ml時，紙條1、紙條2和紙條3的通道I均消失；含量大于IOOOng / ml時，所有紙條的通道I均消失。對甲基毒死蜱而言，當(dāng)淋洗液中含量小于300ng / ml時，通道2不消失；含量為300-600ng / ml時，紙條I的通道2消失；含量為600-2000ng / ml時，紙條I和紙條2的通道2消失；含量為2000-5000ng / ml時，紙條1、紙條2和紙條3的通道2消失；含量大于5000ng / ml時，所有紙條的通道2消失。對于水胺硫磷而言，淋洗液中含量小于250ng / ml時，通道3不消失；含量為250_600ng / ml時，紙條I的通道3消失；含量為600-2000ng / ml時，紙條I和紙條2的通道3消失；含量為2000-5000ng / ml時，紙條1、紙條2和紙條3的通道3消失；含量大于5000ng / ml時所有紙條的通道3消失。
[0027]試紙條實驗結(jié)束后，相應(yīng)的20份大米淋洗液進行HPLC檢測，對試紙條的結(jié)果進行驗證。結(jié)果表明，該傳感器在大米樣品液的檢測中，數(shù)據(jù)與HPLC數(shù)據(jù)一致。
【權(quán)利要求】
1.一種可供肉眼觀察的簡易型農(nóng)藥三通道半定量檢測金標試紙條傳感器，包括進樣口、蓋板、底板以及試紙條區(qū)域四個部分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的試紙條區(qū)域，其特征是:該區(qū)域由四根獨立的免疫金標試紙條組合而成。
3.權(quán)利要求2所述的四根獨立的免疫金標試紙條，其特征是:每根試紙條的膠體金結(jié)合墊上均勻噴上了三種特異性金標抗體的混合物；硝酸纖維素膜上均勻分布著三個農(nóng)藥檢測通道，每個通道上均勻噴上了各種農(nóng)藥的包被原。各種金標抗體以及包被原的濃度依照四根試紙條的順序依次逐漸降低。
【文檔編號】G01N33/531GK103439487SQ201310424670
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月18日
【發(fā)明者】劉鳳權(quán), 王利民, 蔡佳, 方慶奎 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)