一種環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡的制作方法
【專利摘要】本實用新型公開了一種環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設(shè)有加樣孔，該加樣孔的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設(shè)有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應(yīng)，樣品墊左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。本實用新型操作簡單，可同時對環(huán)丙沙星及其抗體殘留進(jìn)行批量定性檢測。
【專利說明】一種環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型屬于免疫化學(xué)檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種定性檢測環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡。

【背景技術(shù)】
[0002]環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin，CPFX)屬氟喹諾酮類廣譜抗菌藥物，它是繼諾氟沙星之后獲美國FDA批準(zhǔn)上市的第二個喹諾酮類藥物。該藥物對革蘭氏陰性桿菌有很強(qiáng)的殺傷力，能抑制細(xì)菌DNA螺旋酶，抗菌譜廣、高效、低毒、組織滲透力強(qiáng)，且藥物吸收迅速、生物利用度高，與其它抗生素?zé)o交叉耐藥性，已成為獸醫(yī)臨床和水產(chǎn)養(yǎng)殖中最重要的抗感染藥物之一，在畜牧行業(yè)中被大量用于治療、預(yù)防和促生長。但在實踐過程中由于盲目及不合理應(yīng)用，導(dǎo)致了耐藥菌株的出現(xiàn)，并且環(huán)丙沙星在食源性動物組織中的殘留經(jīng)食物鏈進(jìn)入人體后，對人體具有潛在的致癌性，會對人體的健康造成威脅。因此，許多國家和國際組織已對其休藥期和在畜禽產(chǎn)品中的最高殘留限量做出了限制。
[0003]環(huán)丙沙星殘留檢測的傳統(tǒng)方法有微生物學(xué)法，高效液相色譜法(HPLC)，液質(zhì)聯(lián)用法(LC-MS)和液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)等方法。然而應(yīng)用理化儀器方法時，其靈敏度受樣品前處理、濃縮程度和溶劑的影響較大，測定方法繁瑣、復(fù)雜，檢測通量小，需要專業(yè)的技術(shù)人員和昂貴的儀器設(shè)備，不能實現(xiàn)大批量樣品的快速檢測分析。膠體金標(biāo)記免疫分析法是近年來迅速發(fā)展的一種新型分析技術(shù)，其特點是簡便快速、成本低、無污染、無需培訓(xùn)，且所有試劑包含在一根試紙條上，非常適合于現(xiàn)場檢測，具有廣闊的市場前景和應(yīng)用價值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實用新型解決的技術(shù)問題是提供了一種操作簡便、快速準(zhǔn)確、靈敏度高、成本低廉且穩(wěn)定性好，可進(jìn)行批量檢測的環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡。
[0005]本實用新型的技術(shù)方案是:一種環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設(shè)有加樣孔，該加樣孔的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設(shè)有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應(yīng)，樣品墊左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，樣品墊右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊。
[0006]本實用新型所述的塑料卡殼上加樣孔的形狀為漏斗狀橢圓形開口，塑料卡殼的兩端開有透氣孔，且透氣孔為多個，呈扇形排列，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
[0007]本實用新型所述的樣品墊左側(cè)的硝酸纖維素膜上噴涂有環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5mm，其中環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應(yīng)。本實用新型所述的樣品墊左側(cè)的金標(biāo)抗體結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的抗環(huán)丙沙星單克隆抗體。
[0008]本實用新型所述的樣品墊右側(cè)的硝酸纖維素膜上噴涂有抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5mm，其中抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應(yīng)。本實用新型所述的樣品墊右側(cè)的金標(biāo)抗原結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的環(huán)丙沙星載體蛋白。
[0009]本實用新型具有如下有益效果:
[0010](I)操作簡單、方便快捷。使用快速檢測試紙卡時無需其它任何儀器或試劑，只需將處理后的樣品溶液用滴管滴入試紙卡加樣孔內(nèi)4-6滴，3-5 min即可觀察結(jié)果。
[0011](2)能同時檢測環(huán)丙沙星及其抗體殘留，結(jié)果形象、直觀。當(dāng)?shù)谝挥^察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示環(huán)丙沙星含量呈陽性，當(dāng)C線和T線同時出現(xiàn)兩條紅色“ II ”印跡時，表示環(huán)丙沙星含量呈陰性；當(dāng)?shù)诙^察窗硝酸纖維素膜上C線顯示一條紅色“ I ”印跡時，表示抗體含量呈陽性，當(dāng)C線和T線同時出現(xiàn)兩條紅色“ II”印跡時，表示抗體含量呈陰性。結(jié)果形象直觀，簡單準(zhǔn)確，不容易出現(xiàn)誤判。
[0012](3)塑料卡殼上的透氣孔使溶液“爬坡”順暢，顯色時間短。透氣孔使塑料卡殼內(nèi)非常狹窄的空間與外界保持空氣流通，保證反應(yīng)膜正常發(fā)揮毛吸作用，使檢測物能夠快速地定向移動至透氣孔，避免了阻滯或者不完全泳動等現(xiàn)象，提高了顯色效率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1是本實用新型的結(jié)構(gòu)示意圖，圖2是本實用新型中試紙條的側(cè)視圖。
[0014]圖面說明:1、塑料卡殼，2、第一觀察窗，3、第二觀察窗，4、加樣孔，5、透氣孔，6、手持端，7、支撐層，8、樣品墊，9、金標(biāo)抗體結(jié)合墊，10、金標(biāo)抗原結(jié)合墊，11、硝酸纖維素膜，12、質(zhì)控線C線，13、環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線，14、抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線，15、吸收墊。

【具體實施方式】
[0015]結(jié)合附圖詳細(xì)描述實施例。一種環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，包括塑料卡殼I和封裝于塑料卡殼I內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼I的中部設(shè)有加樣孔4，該加樣孔4的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗2、第二觀察窗3和透氣孔5，并且在加樣孔4的位置設(shè)有手持端6，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層7，附著在支撐層7中央的為樣品墊8，該樣品墊8與塑料卡殼I上加樣孔4的位置相對應(yīng)；樣品墊8左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊9、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12，兩者間距5mm，且環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線13和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12與塑料卡殼I上第一觀察窗2的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗體結(jié)合墊9上灌注有膠體金標(biāo)記的抗環(huán)丙沙星單克隆抗體；樣品墊8右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊10、硝酸纖維素膜11和吸收墊15，其中硝酸纖維素膜11上噴涂有抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12，兩者間距5mm，且抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線14和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線12與塑料卡殼I上第二觀察窗3的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗原結(jié)合墊10上灌注有膠體金標(biāo)記的環(huán)丙沙星載體蛋白。
[0016]本實用新型所述的塑料卡殼I上加樣孔4的形狀為漏斗狀橢圓形開口，所述的塑料卡殼I的兩端開有呈扇形排列的透氣孔5，并且透氣5孔、第一觀察窗2、第二觀察窗3和加樣孔4處于塑料卡殼I的同一水平面上。
[0017]本實用新型所述的支撐層7是由聚氯乙烯樹脂與穩(wěn)定劑及輔料配合制成的PVC板。本實用新型所述的吸收墊15是由吸水能力極強(qiáng)的植物長纖維為原材料制成的純白濾紙。本實用新型所述的樣品墊8、金標(biāo)抗體結(jié)合墊9和金標(biāo)抗原結(jié)合墊10是由玻璃纖維棉制作而成的。本實用新型所述的樣品墊8與金標(biāo)抗體結(jié)合墊9和金標(biāo)抗原結(jié)合墊10的疊壓寬度分別為l_2mm，吸收墊15與硝酸纖維素膜11的疊壓寬度為l_2mm。
[0018]本實用新型所述的試紙卡的制備方法:
[0019]I)硝酸纖維素膜的制備:將硝酸纖維素膜置于X-only單向噴點儀平臺上，環(huán)丙沙星-OVA包被原或抗環(huán)丙沙星單克隆抗體放于A池，RaMIgG放于B池，展平壓緊，開機(jī)后將抗原和二抗分別點射于硝酸纖維素膜上，形成檢測線T線和質(zhì)控線C線。室溫自然干燥后，將其浸入封閉液(質(zhì)量濃度為1%的BSA的PBS緩沖液，pH 7.4)中30min，37°C烘干后，加入干燥劑，4 °C密封保存。
[0020]2)結(jié)合墊的制備:將玻璃纖維棉裁成4mm寬的細(xì)條，放入含質(zhì)量濃度為5%的BSA，質(zhì)量濃度為2%的蔗糖，質(zhì)量濃度為0.8%的NaCl和質(zhì)量濃度為0.05%的似乂的PBS處理液中20min，37°C恒溫烘干，然后將金標(biāo)抗體或金標(biāo)抗原灌注已處理好的玻璃纖維棉上，真空凍干4h，即為結(jié)合墊。
[0021]3)樣品墊的制備:玻璃纖維棉要用含質(zhì)量濃度為2%的BSA，質(zhì)量濃度為1%的蔗糖，質(zhì)量濃度為0.5%的硼酸鈉和質(zhì)量濃度為0.1%的似乂的PBS處理后，干燥備用，即為樣品墊。
[0022]4)吸收墊的制備:將吸水能力極強(qiáng)的植物長纖維為原材料制作的純白濾紙用切割機(jī)切成4 mm寬的細(xì)條，并用膠膜進(jìn)行一側(cè)封閉，干燥備用。
[0023]5)試紙條的制備:在支撐板(PVC板)上，將硝酸纖維素膜、結(jié)合墊、樣品墊和吸收墊等按一定工藝組裝在一起，用CM4000切割機(jī)制成4_寬的試紙條，放入帶干燥劑的密閉容器中儲存。
[0024]6)試紙卡的組裝:按一定工藝將試紙條封裝于帶有加樣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔的特制的塑料卡殼中，即為本實用新型的試紙卡。
[0025]本實用新型所述的試紙卡的使用方法:
[0026]I)樣品前處理:
[0027]將動物組織樣品切碎、研磨后稱取5g樣品于20ml離心管中，再加入乙腈5ml，于旋禍儀禍動10min，6000r/min離心5min ;取Iml上清液，加入4ml的樣品稀釋液振蕩搖勾Imin ;取500 μ I用于樣品分析。
[0028]2)樣品滴加:
[0029]將試紙卡平放后，用滴管將樣品溶液滴入試紙卡加樣孔內(nèi)4-6滴，3-5min后即可觀察結(jié)果。
[0030]3)檢測結(jié)果分析:
[0031]陰性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質(zhì)控線C線和檢測線T線同時出現(xiàn)兩條紅色“ II ”印跡時，判為陰性。
[0032]陽性:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質(zhì)控線C線顯示一條紅色“ I ”印跡，而檢測線T線不顯色，判為陽性。
[0033]無效:若第一觀察窗或第二觀察窗硝酸纖維素膜上質(zhì)控線C線不顯示紅色條帶，則無論檢測線T線是否出現(xiàn)紅色印跡，該試紙卡均判為無效。
[0034]以上實施例僅為說明本實用新型的技術(shù)思想，不能以此限定本實用新型的保護(hù)范圍，凡是按照本實用新型提出的技術(shù)思想，在技術(shù)方案基礎(chǔ)上所做的任何改動，均落入本實用新型保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，其特征在于包括塑料卡殼和封裝于塑料卡殼內(nèi)的試紙條，所述的塑料卡殼的中部設(shè)有加樣孔，該加樣孔的兩側(cè)分別設(shè)有相對稱的第一觀察窗、第二觀察窗和透氣孔，并且在加樣孔的位置設(shè)有手持端，所述的試紙條的底層為PVC板構(gòu)成的支撐層，附著在支撐層中央的為樣品墊，該樣品墊與塑料卡殼上加樣孔的位置相對應(yīng)，樣品墊左側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗體結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5_，環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且環(huán)丙沙星-OVA包被原印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第一觀察窗的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗體結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的抗環(huán)丙沙星單克隆抗體，樣品墊右側(cè)依次設(shè)有緊密相連的金標(biāo)抗原結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線及羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線，兩者間距5_，抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線位于靠近樣品墊的一側(cè)，且抗環(huán)丙沙星單克隆抗體印制的檢測線T線和羊抗鼠IgG溶液印制的質(zhì)控線C線與塑料卡殼上第二觀察窗的位置相對應(yīng)，金標(biāo)抗原結(jié)合墊上灌注有膠體金標(biāo)記的環(huán)丙沙星載體蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的環(huán)丙沙星及其抗體殘留的免疫學(xué)檢測試紙卡，其特征在于:所述的塑料卡殼的兩端開有呈扇形排列的透氣孔，并且透氣孔、第一觀察窗、第二觀察窗和加樣孔處于塑料卡殼的同一水平面上。
【文檔編號】G01N33/577GK204241484SQ201420707029
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年11月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月24日
【發(fā)明者】吳世秀, 柳東陽, 王秋霞, 姜金慶, 孫亞偉 申請人:河南科技學(xué)院