本公開涉及樣品溶液分離方法、樣品溶液分離器件(微器件)以及樣品溶液分離裝置。

背景技術(shù)：

1、以往，在基因檢查中利用pcr、實(shí)時(shí)pcr。在這些技術(shù)中，在測(cè)定對(duì)象(核酸)為微量時(shí)，存在測(cè)定精度低的課題。為了解決該課題，近年來數(shù)字pcr技術(shù)受到關(guān)注。在數(shù)字pcr技術(shù)中，包含檢測(cè)對(duì)象的核酸的試樣被分離為多個(gè)微小區(qū)域，對(duì)各個(gè)微小區(qū)域進(jìn)行pcr。然后，用熒光強(qiáng)度判別包括檢測(cè)對(duì)象的核酸的區(qū)段和不包括檢測(cè)對(duì)象的核酸的區(qū)段，從而進(jìn)行各微小區(qū)域中存在的核酸種類的判別。例如，專利文獻(xiàn)1中，作為使用數(shù)字pcr的dna檢測(cè)方法，公開了在包含dna和與dna雜交的熒光標(biāo)記探針的液滴中，測(cè)定dna和熒光標(biāo)記探針的熔解溫度的dna檢測(cè)方法。

2、在pcr用微器件中，經(jīng)常利用紫外線固化樹脂作為構(gòu)成要素之一。例如，專利文獻(xiàn)2公開了在能夠容易地分注少量試樣的微流體芯片中，利用紫外線固化樹脂作為微器件的蓋與基板間的粘接劑的一例。另外，專利文獻(xiàn)3公開了在用于促進(jìn)包含pcr反應(yīng)或lcr反應(yīng)的核酸擴(kuò)增反應(yīng)的反應(yīng)液用容器中，通過將紫外線固化樹脂導(dǎo)入容器內(nèi)的流路來密封容器。

3、在數(shù)字pcr中的微流體器件中，作為將樣品分離成微小區(qū)域的用途，經(jīng)常利用油。專利文獻(xiàn)4公開了在用于分離包含核酸的微小量的樣品的微陣列器件中，在向孔眼導(dǎo)入樣品后，利用礦物油、硅油等疏水性物質(zhì)將孔眼覆蓋，由此進(jìn)行溶液分離。由于孔眼內(nèi)的樣品為親水性，油等為疏水性，因此能夠利用水與油的關(guān)系在不混合的情況下進(jìn)行向各孔眼的樣品溶液分離。

4、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)

6、專利文獻(xiàn)1：日本特表2018-108063號(hào)公報(bào)

7、專利文獻(xiàn)2：日本特開2011-163946號(hào)公報(bào)

8、專利文獻(xiàn)3：國(guó)際公開2008/146754號(hào)

9、專利文獻(xiàn)4：美國(guó)專利第9518299號(hào)說明書

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明所要解決的課題

2、在使用生物體試樣分析用微器件進(jìn)行pcr或數(shù)字pcr時(shí)，重要的是被封閉在孔眼內(nèi)的生物體試樣溶液不受熱循環(huán)時(shí)的加熱的影響，不會(huì)泄漏。目前，作為用于將生物體試樣溶液密封在孔眼中的材料，經(jīng)常使用作為疏水性物質(zhì)的油。

3、然而，如果孔眼中的生物體試樣溶液在熱循環(huán)時(shí)被加熱至95℃左右，則在孔眼中會(huì)產(chǎn)生氣泡，并且孔眼中的溶液有時(shí)會(huì)推開覆蓋著的油而泄漏到孔眼外。這會(huì)導(dǎo)致對(duì)周圍的孔眼的污染，因此必須避免這樣的情況。因此，可以期待液體性光固化樹脂作為代替油的密封材料。

4、然而，即使一概稱為液體性光固化樹脂，能夠用作生物體試樣分析用微器件的液體性光固化樹脂也存在各種限制。例如，光固化樹脂的粘度、pcr抑制的性質(zhì)的見解非常重要。前者在容易導(dǎo)入微流體器件方面是重要的，后者在生物體試樣不受液體性光固化樹脂的影響而進(jìn)行pcr方面是重要的。

5、鑒于這種情況，本公開提出了一種在生物體試樣分析用微器件中使用了液體性光固化樹脂的魯棒性高(魯棒性高意味著孔眼(微區(qū))中的樣品溶液不會(huì)泄漏)的樣品溶液分離技術(shù)。

6、用于解決課題的方法

7、為了解決上述課題，本公開提出一種樣品溶液分離方法，其為生物體試樣分析用微器件中的樣品溶液分離方法，包括：向生物體試樣分析用微器件所具有的多個(gè)微區(qū)導(dǎo)入樣品溶液的工序、將液體性光固化樹脂導(dǎo)入生物體試樣分析用微器件的流路并利用液體性光固化樹脂覆蓋多個(gè)微區(qū)的開口從而使導(dǎo)入了樣品溶液的多個(gè)微區(qū)分離的工序、以及向?qū)肓艘后w性光固化樹脂的生物體試樣分析用微器件照射光而使液體性光固化樹脂固化的工序。

8、與本公開關(guān)聯(lián)的進(jìn)一步的特征根據(jù)本說明書的記述、附圖而變得清楚。另外，本公開的方式通過要素和多種要素的組合以及以后的詳細(xì)記述和所附的權(quán)利要求的方式來達(dá)到并實(shí)現(xiàn)。

9、本說明書的記述只不過是典型的例示，在任何意義上都不限定本公開的權(quán)利要求或應(yīng)用例。

10、發(fā)明效果

11、根據(jù)本公開的技術(shù)，在生物體試樣分析用微器件中，能夠?qū)崿F(xiàn)使用了液體性光固化樹脂的魯棒性高(魯棒性高意味著孔眼(微區(qū))中的樣品溶液不會(huì)泄漏)的樣品溶液分離。

技術(shù)特征：

1.一種樣品溶液分離方法，其為生物體試樣分析用微器件中的樣品溶液分離方法，包括：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，所述生物體試樣分析用微器件用于數(shù)字pcr或?qū)崟r(shí)pcr。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，所述多個(gè)微區(qū)是形成于所述生物體試樣分析用微器件的基材的貫通孔。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂的比重為所述樣品溶液的比重+0.2g/cm3以下。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂的粘度為500mpa·s以下。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂由單體材料構(gòu)成。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂難溶于水。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂在水中的溶解度為100g/l以下。

11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂由在分子骨架中具有環(huán)烷烴、碳原子數(shù)6以上的正烷烴或異烷烴的疏水性材料構(gòu)成。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂的折射率為1以上且2.5以下。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，所述液體性光固化樹脂對(duì)波長(zhǎng)400至700nm波段的光具有低自體熒光特性。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的樣品溶液分離方法，其中，使所述液體性光固化樹脂固化的光是波長(zhǎng)250至600nm的波段的光。

15.一種樣品溶液分離器件，其為用于生物體試樣分析的樣品溶液分離器件，包括：

16.一種樣品溶液分離裝置，其為將導(dǎo)入至生物體試樣分析用微器件的多個(gè)微區(qū)的樣品溶液分離的樣品溶液分離裝置，具備：

技術(shù)總結(jié)
本公開為了在生物體試樣分析用微器件中實(shí)現(xiàn)使用了液體性光固化樹脂的魯棒性高的樣品溶液分離技術(shù)，提出了一種樣品溶液分離方法，其為生物體試樣分析用微器件中的樣品溶液分離方法，包括：向生物體試樣分析用微器件所具有的多個(gè)微區(qū)導(dǎo)入樣品溶液的工序、將液體性光固化樹脂導(dǎo)入生物體試樣分析用微器件的流路并利用液體性光固化樹脂覆蓋多個(gè)微區(qū)的開口從而使導(dǎo)入了樣品溶液的多個(gè)微區(qū)分離的工序、以及向?qū)肓艘后w性光固化樹脂的生物體試樣分析用微器件照射光而使液體性光固化樹脂固化的工序(參照?qǐng)D2)。

技術(shù)研發(fā)人員：香村惟夫,中川樹生
受保護(hù)的技術(shù)使用者：株式會(huì)社日立高新技術(shù)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15