本發(fā)明涉及活化部分凝血活酶時(shí)間(aptt)測(cè)定中的缺乏凝血因子viii、ix或xi的血液檢體的凝血時(shí)間調(diào)節(jié)劑、用于aptt測(cè)定的試劑、以及使用它們的aptt測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

1、凝血檢查是用于通過(guò)在患者的血液檢體中添加規(guī)定的試劑并測(cè)定凝血時(shí)間等來(lái)診斷患者的凝血能力的檢查。作為凝血時(shí)間的典型例，有凝血酶原時(shí)間(pt)、活化部分凝血活酶時(shí)間(aptt)、凝血酶時(shí)間等。凝血能力的異常引起凝固時(shí)間的延長(zhǎng)。作為產(chǎn)生凝固時(shí)間的延長(zhǎng)的原因，可舉出凝固抑制劑(肝素等)、參與凝固的成分的減少、先天性凝血因子的缺乏(血友病等)、抑制凝固反應(yīng)的自身抗體(狼瘡抗凝物：la，抗凝血因子抗體等)等。

2、在凝血檢查中，在血液檢體中添加試劑，測(cè)量其后的凝血反應(yīng)，由該凝固反應(yīng)測(cè)定凝血時(shí)間。在確認(rèn)到凝固時(shí)間延長(zhǎng)的情況下，判定為凝血能力異常。凝血檢查用試劑包含用于在一定的條件下使凝血進(jìn)行的成分。例如，aptt測(cè)定用試劑包含鞣花酸等凝血因子活化劑、磷脂、緩沖劑等。另一方面，市售的aptt測(cè)定用試劑有各種種類，在這些試劑間對(duì)各種凝固異常的靈敏度不同。

3、在專利文獻(xiàn)1中公開了含有氯化錳作為活性強(qiáng)化劑以及含有甘氨酸作為懸浮增強(qiáng)手段的aptt測(cè)定用試劑。在專利文獻(xiàn)2中記載了氯化鋁、氯化鐵、或者氯化錳與鞣花酸的混合物使試樣的凝固活化，但是氯化鐵生成鞣花酸的沉淀物。在專利文獻(xiàn)3中記載了在aptt測(cè)定中使用甘氨酰甘氨酸或二甘氨酰甘氨酸作為凝血因子穩(wěn)定劑，但是如果以高濃度添加它們，則凝固時(shí)間延長(zhǎng)。在專利文獻(xiàn)4中記載了可以使用hepes、pipes、popso、aces、tapso、epps、tricine、ches等good’s緩沖液作為凝血能力測(cè)定用檢體稀釋液。在專利文獻(xiàn)5中記載了包含規(guī)定濃度的磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰乙醇胺的aptt測(cè)定用試劑對(duì)la的靈敏度提高，且對(duì)肝素具有適當(dāng)?shù)撵`敏度。在專利文獻(xiàn)6中記載了利用含有具有磷酰絲氨酸殘基的(甲基)丙烯酸單體單元的聚合物，aptt測(cè)定用試劑的品質(zhì)穩(wěn)定。

4、現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)

5、專利文獻(xiàn)

6、專利文獻(xiàn)1：日本特開昭59-91899號(hào)公報(bào)

7、專利文獻(xiàn)2：日本特開2002-156379號(hào)公報(bào)

8、專利文獻(xiàn)3：日本特公平6-50999號(hào)公報(bào)

9、專利文獻(xiàn)4：日本特開2013-145238號(hào)公報(bào)

10、專利文獻(xiàn)5：日本特開2020-56578號(hào)公報(bào)

11、專利文獻(xiàn)6：日本特開2021-181929號(hào)公報(bào)

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、在凝血檢查中，希望能夠高精度地檢測(cè)具有凝固異常(凝血因子缺乏、la陽(yáng)性、凝固抑制劑陽(yáng)性等)的檢體。例如，希望調(diào)節(jié)這些血液檢體的凝血時(shí)間以便能夠基于凝血時(shí)間準(zhǔn)確地檢測(cè)具有凝固異常的血液檢體。

2、本發(fā)明提供aptt測(cè)定中的缺乏凝血因子viii(fviii)、凝血因子ix(fix)或凝血因子xi(fxi)的檢體的凝血時(shí)間調(diào)節(jié)劑，aptt測(cè)定用試劑以及使用它們的aptt測(cè)定方法和aptt測(cè)定中的缺乏fviii、fix或fxi的檢體的凝血時(shí)間的調(diào)節(jié)方法。

3、作為本發(fā)明的實(shí)施方式，提供以下方式。

4、〔1〕一種活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定中的缺乏凝血因子viii、ix或xi的血液檢體的凝血時(shí)間調(diào)節(jié)劑，以具有2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿作為構(gòu)成單元的聚合物為有效成分。

5、〔2〕根據(jù)〔1〕所述的調(diào)節(jié)劑，其中，上述聚合物為2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿與具有疏水性基團(tuán)、陰離子性基團(tuán)或陽(yáng)離子性基團(tuán)的其它單體的共聚物。

6、〔3〕根據(jù)〔2〕所述的調(diào)節(jié)劑，其中，上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為37～60×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為0.5～3m2/s；或者上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為70～75×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為2～5m2/s。

7、〔4〕根據(jù)〔1〕～〔3〕中任一項(xiàng)所述的調(diào)節(jié)劑，其中，進(jìn)一步將選自氨基酸、金屬鹽化合物以及多糖類或包合物中的至少1種作為有效成分。

8、〔5〕根據(jù)〔4〕所述的調(diào)節(jié)劑，其中，上述氨基酸為選自α-丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸以及麥黃酮中的至少1種。

9、〔6〕根據(jù)〔4〕或〔5〕所述的調(diào)節(jié)劑，其中，上述金屬鹽化合物為選自氯化錳(ii)、氯化釔、氯化鋁、氯化銦(iii)、硫酸鋁鉀以及它們的水合物中的至少1種。

10、〔7〕根據(jù)〔4〕～〔6〕中任一項(xiàng)所述的調(diào)節(jié)劑，其中，上述多糖類或包合物為選自硫酸葡聚糖、環(huán)糊精硫酸以及它們的鹽中的至少1種。

11、〔8〕一種活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定用試劑，含有具有2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿作為構(gòu)成單元的聚合物和氨基酸。

12、〔9〕根據(jù)〔8〕所述的試劑，其中，上述聚合物為2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿與具有疏水性基團(tuán)、陰離子性基團(tuán)或陽(yáng)離子性基團(tuán)的其它單體的共聚物。

13、〔10〕根據(jù)〔9〕所述的試劑，其中，上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為37～60×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為0.5～3m2/s；或者上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為70～75×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為2～5m2/s。

14、〔11〕根據(jù)〔8〕～〔10〕中任一項(xiàng)所述的試劑，其中，進(jìn)一步含有選自氨基酸、金屬鹽化合物以及多糖類或包合物中的至少1種。

15、〔12〕一種活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定方法，包括測(cè)定含有血液檢體和〔1〕～〔7〕中任一項(xiàng)所述的凝血時(shí)間調(diào)節(jié)劑或〔8〕～〔11〕中任一項(xiàng)所述的活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定用試劑的樣品溶液的凝血時(shí)間。

16、〔13〕一種活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定中的缺乏凝血因子viii、ix或xi的血液檢體的凝血時(shí)間的調(diào)節(jié)方法，包括測(cè)定含有血液檢體和〔1〕～〔7〕中任一項(xiàng)所述的凝血時(shí)間調(diào)節(jié)劑或〔8〕～〔11〕中任一項(xiàng)所述的活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定用試劑的樣品溶液的凝血時(shí)間。

17、〔14〕一種具有2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿作為構(gòu)成單元的聚合物的應(yīng)用，用于調(diào)節(jié)活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定中的缺乏凝血因子viii、ix或xi的血液檢體的凝血時(shí)間。

18、〔15〕根據(jù)〔14〕所述的應(yīng)用，其中，上述聚合物為2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿與具有疏水性基團(tuán)、陰離子性基團(tuán)或陽(yáng)離子性基團(tuán)的其它單體的共聚物。

19、〔16〕根據(jù)〔15〕所述的應(yīng)用，其中，上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為37～60×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為0.5～3m2/s；或者上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為70～75×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為2～5m2/s。

20、〔17〕根據(jù)〔14〕～〔16〕中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，與上述聚合物一起使用選自氨基酸、金屬鹽化合物以及多糖類或包合物中的至少1種。

21、〔18〕根據(jù)〔17〕所述的應(yīng)用，其中，上述氨基酸為選自α-丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸以及麥黃酮中的至少1種。

22、〔19〕根據(jù)〔17〕或〔18〕所述的應(yīng)用，其中，上述金屬鹽化合物為選自氯化錳(ii)、氯化釔、氯化鋁、氯化銦(iii)、硫酸鋁鉀以及它們的水合物中的至少1種。

23、〔20〕根據(jù)〔17〕～〔19〕中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，上述多糖類或包合物為選自硫酸葡聚糖、環(huán)糊精硫酸以及它們的鹽中的至少1種。

24、〔21〕一種具有2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿作為構(gòu)成單元的聚合物，用于調(diào)節(jié)活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定中的缺乏凝血因子viii、ix或xi的血液檢體的凝血時(shí)間。

25、〔22〕根據(jù)〔21〕所述的聚合物，其為2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿與具有疏水性基團(tuán)、陰離子性基團(tuán)或陽(yáng)離子性基團(tuán)的其它單體的共聚物。

26、〔23〕根據(jù)〔22〕所述的聚合物，其中，上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為37～60×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為0.5～3m2/s；或者上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為70～75×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為2～5m2/s。

27、〔24〕根據(jù)〔21〕～〔23〕中任一項(xiàng)所述的聚合物，其中，與選自氨基酸、金屬鹽化合物以及多糖類或包合物中的至少1種組合使用。

28、〔25〕根據(jù)〔24〕所述的聚合物，其中，上述氨基酸為選自α-丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸以及麥黃酮中的至少1種。

29、〔26〕根據(jù)〔24〕或〔25〕所述的聚合物，其中，上述金屬鹽化合物為選自氯化錳(ii)、氯化釔、氯化鋁、氯化銦(iii)、硫酸鋁鉀以及它們的水合物中的至少1種。

30、〔27〕根據(jù)〔24〕～〔26〕中任一項(xiàng)所述的聚合物，其中，上述多糖類或包合物為選自硫酸葡聚糖、環(huán)糊精硫酸以及它們的鹽中的至少1種。

31、〔28〕一種具有2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿作為構(gòu)成單元的聚合物的應(yīng)用，用于制造活化部分凝血活酶時(shí)間測(cè)定中的缺乏凝血因子viii、ix或xi的血液檢體的凝血時(shí)間調(diào)節(jié)劑。

32、〔29〕根據(jù)〔28〕所述的應(yīng)用，其中，上述聚合物為2-甲基丙烯酰氧基乙基磷酸膽堿與具有疏水性基團(tuán)、陰離子性基團(tuán)或陽(yáng)離子性基團(tuán)的其它單體的共聚物。

33、〔30〕根據(jù)〔29〕所述的應(yīng)用，其中，上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為37～60×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為0.5～3m2/s；或者上述共聚物的0.1重量％水溶液在25℃的表面張力為70～75×10-3n/m，且5重量％水溶液在25℃的運(yùn)動(dòng)粘度為2～5m2/s。

34、〔31〕根據(jù)〔28〕～〔30〕中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，與上述聚合物一起使用選自氨基酸、金屬鹽化合物以及多糖類或包合物中的至少1種。

35、〔32〕根據(jù)〔31〕所述的應(yīng)用，其中，上述氨基酸為選自α-丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸以及麥黃酮中的至少1種。

36、〔33〕根據(jù)〔31〕或〔32〕所述的應(yīng)用，其中，上述金屬鹽化合物為選自氯化錳(ii)、氯化釔、氯化鋁、氯化銦(iii)、硫酸鋁鉀以及它們的水合物中的至少1種。

37、〔34〕根據(jù)〔31〕～〔33〕中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，上述多糖類或包合物為選自硫酸葡聚糖、環(huán)糊精硫酸以及它們的鹽中的至少1種。

38、根據(jù)本發(fā)明，能夠調(diào)節(jié)aptt測(cè)定中的缺乏fviii、fix或fxi的檢體的凝血時(shí)間，由此能夠基于凝血時(shí)間準(zhǔn)確地檢測(cè)這些血液檢體。