本發(fā)明屬于原花青素測定，具體涉及一種歐李果實(shí)中原花青素的測定方法。

背景技術(shù)：

1、原花青素是植物中廣泛存在的一大類多酚類化合物的總稱，具有強(qiáng)抗氧化、消除自由基的作用，可有效消除超氧陰離子自由基和羥基自由基，也參與磷酸、花生四烯酸的代謝和蛋白質(zhì)磷酸化，保護(hù)脂質(zhì)不發(fā)生過氧化損傷；是強(qiáng)有力的金屬螯合劑，可螯合金屬離子，在體內(nèi)形成惰性化合物；保護(hù)和穩(wěn)定維生素c，有助于維生素c的吸收和利用。原花青素分布廣泛，存在于許多植物的皮、殼、籽、核、花、葉中，葡萄籽中原花青素含量最高，種類豐富。

2、現(xiàn)有技術(shù)以兒茶素的當(dāng)量表示原花青素的含量，兒茶素是原花青素的基本單體，而原花青素通常為由兒茶素和表兒茶素通過聚合形成的低聚體和高聚體混合物。使用兒茶素作為標(biāo)準(zhǔn)品，無法完全代表多聚體原花青素的實(shí)際結(jié)構(gòu)和特性。結(jié)果可能低估了樣品中高聚合度原花青素的含量。且現(xiàn)有原花青素含量的檢測多依賴單一的分光光度計(jì)逐樣分析檢測，樣品通量較低且操作煩瑣，效率低、耗時(shí)長，難以滿足高效分析的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種歐李果實(shí)中原花青素的測定方法，包括以下步驟：

2、(1)樣品液制備：選擇成熟、無霉變的果實(shí)歐李果實(shí)，清除果實(shí)表面的泥土、雜質(zhì)和污染物，去除核及果柄，得到歐李果實(shí)樣品；將濃鹽酸加入乙醇溶液中，充分混勻，即為提取液；向歐李樣品中加入提取液，充分研磨后超聲處理，離心分離后即得原花青素樣品液；

3、(2)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

4、(3)樣品測定：取提取的原花青素樣品液100μl，加入試管中，加入600μl濃度為0.04g/ml的香草醛甲醇溶液，充分搖勻后加入300μl濃鹽酸，再次充分搖勻后，將樣品測定管放入30℃水浴中反應(yīng)20分鐘，確保充分顯色。使用提取液代替樣品作為空白管；取反應(yīng)液200μl于96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測波長500nm處樣品管和空白管的吸光值；

5、(4)數(shù)據(jù)計(jì)算：根據(jù)公式計(jì)算樣品中原花青素含量。

6、進(jìn)一步的，步驟(1)中所述濃鹽酸的體積分?jǐn)?shù)為36％～38％。

7、進(jìn)一步的，步驟(1)中所述乙醇溶液為40％的乙醇水溶液。

8、進(jìn)一步的，步驟(1)中所述濃鹽酸與乙醇溶液的比例為1:400。

9、進(jìn)一步的，步驟(1)中所述歐李樣品與提取液的質(zhì)量體積比為0.6g：10ml。

10、進(jìn)一步的，步驟(1)中所述超聲處理為：在25℃的條件下超聲提取30min；超聲波的頻率設(shè)為40khz，功率為200w。

11、進(jìn)一步的，步驟(1)中所述離心為5000r/min離心10min。

12、進(jìn)一步的，步驟(3)中所述濃鹽酸濃度為36％～38％。

13、本發(fā)明具有以下有益效果：

14、本發(fā)明使用原花青素標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，與樣品的化學(xué)組成更接近，從而更準(zhǔn)確反映樣品中原花青素的實(shí)際含量，避免因結(jié)構(gòu)差異導(dǎo)致的測定偏差，且引入酶標(biāo)儀高通量檢測方法，結(jié)合香草醛顯色法，一次性檢測多個(gè)樣品，大幅提升樣品檢測速度與通量，為樣品含量測定提供快速準(zhǔn)確的分析工具。

技術(shù)特征：

1.一種歐李果實(shí)中原花青素的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述濃鹽酸的體積分?jǐn)?shù)為36％～38％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述乙醇溶液為40％的乙醇水溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述濃鹽酸與乙醇溶液的比例為1:400。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述歐李樣品與提取液的質(zhì)量體積比為0.6g：10ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述超聲處理為：在25℃的條件下超聲提取30min；超聲波的頻率設(shè)為40khz，功率為200w。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(1)中所述離心為5000r/min離心10min。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(3)中所述濃鹽酸濃度為36％～38％。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于原花青素測定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種歐李果實(shí)中原花青素的測定方法。本發(fā)明使用原花青素標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，與樣品的化學(xué)組成更接近，從而更準(zhǔn)確反映樣品中原花青素的實(shí)際含量，避免因結(jié)構(gòu)差異導(dǎo)致的測定偏差，且引入酶標(biāo)儀高通量檢測方法，結(jié)合香草醛顯色法，一次性檢測多個(gè)樣品，大幅提升樣品檢測速度與通量，為樣品含量測定提供快速準(zhǔn)確的分析工具。

技術(shù)研發(fā)人員：郭金麗,張莉,李曉艷,李靜汝,郭炳成
受保護(hù)的技術(shù)使用者：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15