本發(fā)明涉及微生物，特別涉及一種玫瑰香型煙草提取物的制備方法。

背景技術(shù)：

1、煙草提取物是卷煙加工中極為重要的煙用香料，可賦予卷煙更為自然、飽滿的香氣。煙草提取物一般是有機(jī)物或水從煙草中提取、純化、濃縮制備而成，精制的煙草提取物雜質(zhì)少、質(zhì)量高，但一般工藝復(fù)雜、成本較高；而粗制的煙草提取物通常雜質(zhì)多，質(zhì)量差。煙草提取物在提取過程中會(huì)存在很多大分子物質(zhì)如蛋白、淀粉、果膠等，且香味物質(zhì)含量基本決定于煙草原料，若不通過復(fù)雜的分離純化方法，所制備成的煙草提取物質(zhì)量不夠理想。采用微生物發(fā)酵制備煙草提取物，能夠有效降解大分子物質(zhì)，轉(zhuǎn)化生成特殊香味成分，制備的煙草提取物雜質(zhì)少、香氣充足。

2、從玫瑰花中分離到的香味成分較為復(fù)雜，主要有芳樟醇、2-苯乙醇、香茅醇、香葉醇、β-紫羅蘭酮、玫瑰醇等，其中的個(gè)別物質(zhì)如2-苯乙醇、芳樟醇、β-紫羅蘭酮等具有明顯的玫瑰花香特征，僅需很小的量即可被感知，應(yīng)用于煙草中可有效提升卷煙的玫瑰香風(fēng)格。利用微生物發(fā)酵一方面可以降解煙草中原有香味成分與糖類組成的糖苷，從而釋放出香味成分，另一方面可以通過自身代謝轉(zhuǎn)化，是提升煙草提取物的有效途徑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種玫瑰香型煙草提取物的制備方法，利用水提法獲得煙草浸提液，通過復(fù)合產(chǎn)香菌發(fā)酵后制備成具有明顯玫瑰香特征的煙草提取物，具有工藝簡單、成本低廉，添加效果較好等優(yōu)點(diǎn)。

2、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

3、一種玫瑰香型煙草提取物的制備方法，包括以下步驟：

4、(1)復(fù)合產(chǎn)香菌種子制備：將保藏編號為cgmcc?no.21313的微球菌zy-02、保藏編號為cgmcc?no.21544葡糖酸醋桿菌zt-01和保藏編號為cgmccno.29654的變棲克雷伯氏菌hnyj-3分別接種到lb液體培養(yǎng)基中，于25-40℃，100-200r/min搖床中培養(yǎng)6-36h，離心，上清液加無菌水復(fù)溶，調(diào)節(jié)od600為2.0，得三種種子液，將三種種子液按比例混合均勻，得到復(fù)合種子液；

5、(2)煙草浸提液制備：將煙末過篩后與去離子水混合，30℃～100℃提取0.5h～5h，過濾取濾液，滅菌，得到煙草浸提液；

6、(3)發(fā)酵煙草浸提液：將步驟(1)的復(fù)合種子液與步驟(2)的煙草浸提液按體積比1:1000～1:50混合，于溫度25-40℃、50～300r/min攪拌發(fā)酵1～5d；

7、(4)發(fā)酵煙草提取物的制備：發(fā)酵后的煙草浸提液離心得上清液，上清液分離純化，濃縮后得到濃縮物，加入1,2-丙二醇，得到玫瑰香型煙草提取物。

8、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(1)中，三種產(chǎn)香菌接種到lb液體培養(yǎng)基后的培養(yǎng)條件為：30℃，150r/min的搖床中培養(yǎng)12h；離心條件為：4℃，4000r/min離心20min。

9、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(1)中，zy-02、zt-01和hnyj-3種子液按照體積比(1～5):(1～5):(1～5)的比例混合均勻，得到復(fù)合種子液，優(yōu)選體積比為1:3:2。

10、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(2)具體為：烤煙中部片煙煙葉研磨獲得煙末，過50目篩，過篩后煙末與去離子水按照1:20～1:2的比例混合，30℃～100℃提取0.5h～5h，經(jīng)200目篩過濾后取濾液，121℃滅菌15min后得到煙草浸提液。

11、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(2)中，過篩后煙末與去離子水按照1:10的比例混合，70℃提取2h。

12、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(3)中，復(fù)合種子液與煙草浸提液體積比為1:200，溫度30℃、150r/min攪拌發(fā)酵2d。

13、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(4)具體為：

14、(41)發(fā)酵后的煙草浸提液在轉(zhuǎn)速4000r/min、溫度4℃條件下離心30min，得到上清液；

15、(42)上清液用hd-20大孔樹脂分離純化，采用0～100％之間逐漸增加的不同純度乙醇線性洗脫；

16、(43)收集后半段洗脫組分，溫度50℃、真空度為120mbar條件下濃縮至密度為1.10±0.005g/ml，得到濃縮物；

17、(44)按照質(zhì)量比加入濃縮物質(zhì)量1％～50％的1,2-丙二醇，得到最終成品的玫瑰香型煙草提取物。

18、優(yōu)選地，上述技術(shù)方案中，步驟(44)中，按照質(zhì)量比加入濃縮物質(zhì)量10％的1,2-丙二醇。

19、一種玫瑰香型煙草提取物在煙草加香中的應(yīng)用。

20、本發(fā)明上述技術(shù)方案，具有如下有益效果：

21、本申請采用復(fù)合產(chǎn)香菌(微球菌zy-02、葡糖酸醋桿菌zt-01和變棲克雷伯氏菌hnyj-3)發(fā)酵煙草浸提液，工藝簡單、成本低廉。通過優(yōu)化菌種比例和發(fā)酵條件，顯著提升了煙草提取物中玫瑰香型主要香味成分的含量，如2-苯乙醇、芳樟醇等，使香氣濃郁且特征明顯。經(jīng)感官評價(jià)，添加該提取物的卷煙香氣提升顯著，雜氣、刺激性降低，余味改善，品質(zhì)更高，能有效提升卷煙的玫瑰香風(fēng)格，具有良好的市場應(yīng)用前景。

技術(shù)特征：

1.一種玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，三種產(chǎn)香菌接種到lb液體培養(yǎng)基后的培養(yǎng)條件為：30℃，150r/min的搖床中培養(yǎng)12h；離心條件為：4℃，4000r/min離心20min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，zy-02種子液、zt-01種子液和hnyj-3種子液按體積比(1～5):(1～5):(1～5)的比例混合均勻，得到復(fù)合種子液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(2)具體為：烤煙中部片煙煙葉研磨獲得煙末，過50目篩，過篩后煙末與去離子水按照1:20～1:2的比例混合，30℃～100℃提取0.5h～5h，經(jīng)200目篩過濾后取濾液，121℃滅菌15min后得到煙草浸提液。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，過篩后煙末與去離子水按照1:10的比例混合，70℃提取2h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，復(fù)合種子液與煙草浸提液體積比為1:200，溫度30℃、150r/min攪拌發(fā)酵2d。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(4)具體為：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的玫瑰香型煙草提取物的制備方法，其特征在于，步驟(44)中，按照質(zhì)量比加入濃縮物質(zhì)量10％的1,2-丙二醇。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述制備方法制得的玫瑰香型煙草提取物在煙草加香中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種玫瑰香型煙草提取物的制備方法，包括以下步驟：將微球菌、葡糖酸醋桿菌和變棲克雷伯氏菌分別接種到LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，離心上清液加無菌水復(fù)溶，得三種種子液，將其混合，得復(fù)合種子液；將煙末過篩后與去離子水混合提取，得到煙草浸提液；將復(fù)合種子液與煙草浸提液混合，攪拌發(fā)酵；發(fā)酵后的煙草浸提液離心得上清液，上清液分離純化，濃縮后得到濃縮物，加入1,2?丙二醇，得到玫瑰香型煙草提取物。本申請工藝簡單、成本低廉。顯著提升了煙草提取物中玫瑰香型主要香味成分的含量，使香氣濃郁且特征明顯。經(jīng)感官評價(jià)，添加該提取物的卷煙香氣提升顯著，有效提升卷煙的玫瑰香風(fēng)格，具有良好的市場應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：馮穎杰,楊永鋒,楊金初,張婷婷,徐永明,劉文召,楊宗燦,賈國濤,魏明杰,趙永振
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15