專利名稱：定向于dll4的抗體及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對抗DLL4的靶向結(jié)合劑以及這種試劑的用途。更具體而言，本發(fā)明涉及定向于DLL4的全人源單克隆抗體。所述的靶向結(jié)合劑可用于治療與DLL4的活性和/或過量生產(chǎn)有關(guān)的疾病，并且可用作診斷工具。
背景技術(shù)：
Notch信號傳導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)是進化保守的途徑，其涉及細(xì)胞命運決定、干細(xì)胞維持以及在發(fā)育過程中許多組織的分化。因此，在哺乳動物中，已經(jīng)識別4種Notch受體配基 (Notchl-4)以及 5 種配基(Jagged-1/2 以及 Delta 樣配基(Dll) 1/3/4)。Notch 受體以異二聚體的形式存在，其由兩個非共價結(jié)合的細(xì)胞外和跨膜亞基構(gòu)成。配基與細(xì)胞外亞基結(jié)合引發(fā)了通過諸如TNFa轉(zhuǎn)化酶(TACE)和Y _分泌酶之類的酶進行的蛋白裂解，其中所述的Y-分泌酶導(dǎo)致Notch細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(Ni⑶)的產(chǎn)生，該結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)移至核中，并與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，由此最終導(dǎo)致下游靶向基因的活化(參見Bray，2006，Nat. Rev. Mol. Cell. Biol.， 7，678)?，F(xiàn)有證據(jù)表明，多種Notch途徑的成分是在血管系統(tǒng)中表達的，并且在正常Notch 信號傳導(dǎo)中發(fā)生異?？梢詫?dǎo)致血管表現(xiàn)型。例如，Jaggedl和Notch3的突變導(dǎo)致Alagille 綜合癥以及分別伴有皮層下梗死和白質(zhì)腦病的常染色體顯性遺傳性腦動脈病的兩種紊亂 (均表現(xiàn)處血管缺陷)。此外，小鼠中Notchl和DLL4的基因缺陷都會導(dǎo)致伴有血管異常的胚胎致死性。此外，在大多數(shù)的遺傳背景下，小鼠中DLL4的單個等位基因的缺陷會導(dǎo)致伴有嚴(yán)重血管缺陷的胚胎致死性(Duarte et al. ,2004,Genes Dev. , 18,2474 ；Gale et al.， 2004，Proc. Nat. Acad. Sci. ,101,15949)。這種表現(xiàn)性之前僅針對VEGF-A報道過，并且表明 DLL4在血管發(fā)育中可能起到重要的作用。此外，還報道了在得自人透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤以及乳腺和膀胱癌的腫瘤血管上 DLL4 有所表達(Mailhos et al. ,2001, Differentiation,69,135 ；Patel et al.,2005, Cancer Res. ,65,8690 ；Patel et al. ,2006, Clin. Cancer Res. ,12,4836 ；Li et al. ,2007, Cancer Res.，67，11244)。近期研究還表明，在人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤中，DLL4可以在一小部分的腫瘤細(xì)胞上表達(Li et al. ,2007, Cancer Res.，67，11244)。此外，在多種癌癥的臨床前模型中，已經(jīng)評價了封阻關(guān)于腫瘤生長的DLL4信號傳導(dǎo)的作用，其中在免疫缺陷型小鼠中，腫瘤細(xì)胞系以皮下方式生長(Ridgway et al.，2006，Nature, 444,1083 ； Noguera-Troise et al.，Nature，444，1032)。在這些研究中，已經(jīng)報道了腫瘤生長的減少。 這些抗腫瘤作用與腫瘤中功能較差的脈管密度的增加(伴有組織缺氧的增加)有關(guān)?？偠灾@些數(shù)據(jù)表明，除了 DLL4在血管發(fā)育中的作用之外，其還在腫瘤血管系統(tǒng)的發(fā)育中起作用。除了對血管生成具有一定的作用之外，Notch信號傳導(dǎo)還與得自多種類型的腫瘤的癌癥干細(xì)胞有關(guān)(Dontu et al.，2004，Breast Can. Res.，6，R605 ；Wilson & Radtke， 2006，F(xiàn)EBS Lett. ,580,2860) 0已經(jīng)由多種造血和實體腫瘤中分離的到癌癥干細(xì)胞(Al-Hajj et al.，2003，Proc. Nat. Acad. Sci.，100，3983 ；Lapidot et al.，1994，Nature, 17,645 ；Tan et al. , 2006, Laboratory Investigation，86，1203)，并且DLL4在一小群腫瘤細(xì)胞上的存在進一步表明DLL4還涉及癌癥干細(xì)胞生物學(xué)，并且DLL4的拮抗劑可以通過與這些類型的細(xì)胞相互作用而部分地調(diào)節(jié)抗腫瘤作用。發(fā)明概述本發(fā)明涉及特異性地與DLL4結(jié)合并抑制DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的實施方案涉及特異性地與DLL4結(jié)合并抑制DLL4與Notch受體(例如Notchl、2、3或 4)相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的實施方案涉及特異性地與DLL4結(jié)合并抑制DLL4與Notch受體(例如 Notchl或4)相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑特異性地與DLL4結(jié)合，并抑制與Notch受體(例如Notchl)相結(jié)合。在各一實施方案中，與缺少靶向結(jié)合劑的條件下所發(fā)生的結(jié)合情況相比，所述的靶向結(jié)合劑抑制了至少5%、至少10%、 至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、 至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%的DLL4與Notch受體(例如Notchl)的結(jié)合。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于5納摩爾(nM)的結(jié)合親和性(Kd)與DLL4結(jié)合。在其他實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于4nM、3nM、2nM或InM的 Kd進行結(jié)合。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于950兆摩爾(pM)的Kd 與DLL4結(jié)合。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于900pM的Kd與DLL4 結(jié)合。在其他實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于800pM、700pM或600pM的Kd進行結(jié)合。 在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于500pM的Kd與DLL4結(jié)合。在其他實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于400pM的Kd進行結(jié)合。在其他實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于300pM的Kd進行結(jié)合。在一些其他的實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于200pM的Kd進行結(jié)合。在一些其他的實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于150pM的 Kd進行結(jié)合。在一些其他的實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于IOOpM的Kd進行結(jié)合。 在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑以低于50pM的Kd進行結(jié)合。在一個特定的實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以以低于IOpM的親和性Kd與人源DLL4相結(jié)合。在另一個特定的實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以以低于IpM的親和性Kd與人源DLL4相結(jié)合。 可以采用本文所述的方法或本領(lǐng)域的任一技術(shù)人員已知的方法來估測Kd (例如BIAcore測試，ELISA，F(xiàn)ACS)(Biacore International AB, Uppsala，Sweden)。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體的結(jié)合性質(zhì)還可以通過參照解離速率或結(jié)合速率 (分別為k。ff* k。n)來測定。在本發(fā)明的一個實施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以具有至少IO4M-1 S—1、至少 5X104M-1 s-1、至少 IO5IVr1S-1、至少 ZXlO5IVr1S-1、至少 5X105IVr1 s-1、至少 106IVr1 s-1、至少 5X106IVr1 s-1、 至少IOW1、至少5X107M-1 S-1、或者至少KfM-V1的k。n速率(抗體(Ab) +抗原(Ag) kon — Ab-Ag)。在本發(fā)明的另一個實施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以具有低于切川 人低于 KT1 S-1、低于 δχΙΟΥ1、低于 ΙΟ、-1、低于 δχ ο、-1、低于 ΙΟ、-1、低于 δχΙΟΥ1、低于 4X10"4S"\ 低于 3X10"4S"\ 低于 2X10"4S"\ 低于 ΙΟ、—1、低于 δχΙΟ—Υ1、低于 ΙΟ、—1、低于 δχΙΟ—、—1、低于 ΙΟ、—1、低于 δχΙΟΥ1、低于 lO—V、低于 δχΙΟΥ1、低于 ΙΟ、—1、低于 δχΙΟ—Υ1、低于 ΙΟ、—1、或者低于 ΙΟ—1、—1 的 k。ff 速率((Ab-Ag)toff—抗體(Ab) +抗原(Ag))。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑與人源DLL4相結(jié)合。在一些實例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對得自其他物種的其他DLL4蛋白質(zhì)具有交叉反應(yīng)性。在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對獼猴DLL4具有交叉反應(yīng)性，但是對得自其他物種的DLL4蛋白質(zhì)僅具有微弱的交叉反應(yīng)性，例如所述的靶向結(jié)合劑以高于360nM的Kd(通過BIAcore技術(shù)估測)與小鼠DLL4相
纟口口。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對得自其他物種的DLL4蛋白質(zhì)具有幾乎相等的親和性。在一個特定的實例中，本發(fā)明的人源DLL4靶向結(jié)合劑對獼猴DLL4具有幾乎相等的親和性。對于相等水平的親和性，我們是指當(dāng)對于人源DLL4的親和性為1時， 所述抗體與獼猴DLL4的親和性為0. 2-5或0. 2_2。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對人源DLL4具有特異性，但是不能結(jié)合其他Notch配基。在一個實例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對人源DLL4具有特異性，但是不能顯著地結(jié)合DLL1，例如，如通過測試本文所述的靶向結(jié)合劑(15-300yg/ml)結(jié)合人源DLLl 瞬間轉(zhuǎn)染的細(xì)胞或者Dlll穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的ΗΕΚ293細(xì)胞的能力中所測定的那樣，DLLl/模擬物的比例為小于2. 5。在另一個實例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑對人源DLL4具有特異性，但是不能顯著地結(jié)合Jaggedl，例如，如通過測試本文所述的靶向結(jié)合劑(5yg/ml)結(jié)合人源 Jaggedl瞬間轉(zhuǎn)染的細(xì)胞或者人源Jaggedl穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的ΗΕΚ293細(xì)胞的能力中所測定的那樣，DLLl/模擬物的比例為小于1。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑抑制了 DLL4_Notchl受體-配基的結(jié)合。在一個實例中，可以證明所述靶向結(jié)合劑所具有的活性為IC5tl濃度(取得50%抑制程度的濃度)低于10 μ M。在另一個實例中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以具有低于50、40、30、20、 10、5、4、2、1、0· 8,0. 7,0. 6,0. 5 或 0. 4ηΜ 的 IC50 濃度。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑具有體外活性和體內(nèi)活性。在一個特定例子中，在2D培養(yǎng)物中，靶向結(jié)合劑反向HUVEC細(xì)胞增殖的DLL4-刺激的抑制率。在一個例子中，與對照相比，本發(fā)明的抗體可反向HUVEC細(xì)胞增殖的DLL4-刺激的抑制率70 %或超過例如75%、80%、85%、90%或95% (使用實施例9的測定，其中不加入DLL4)。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑(例如本發(fā)明的抗體)可以抑制2D培養(yǎng)物中HUVEC管的形成。例如，與對照(所述的對照為使用20 μ g/ml的相同抗體所測定的最大抑制作用)相比，本發(fā)明的抗體在0. 08 μ g/ml的濃度下可以表現(xiàn)出大于50%的抑制率， 例如 50%、60%、70%、80%、90%或 95%的抑制率。在另一個實施方案中，與t = 0對照相比，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑在4小時時可以表現(xiàn)為小于50%的內(nèi)化作用，例如45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%或5%的內(nèi)化作用。在另一個實施方案中，與t = 0對照相比，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑在4小時時可以表現(xiàn)為5-50%、10-40%或者20-40%的內(nèi)化作用(參見實施例15)。在一個實施方案中，特異性地結(jié)合DLL4的本發(fā)明的靶向結(jié)合劑可以表現(xiàn)出一種或多種以下性質(zhì)，包括以低于200pM的Kd與人源DLL4相結(jié)合；與獼猴DLL4交叉反應(yīng)； 與小鼠DLL4有微弱的交叉反應(yīng)；以幾乎相等的親和性與獼猴DLL4相結(jié)合；不會顯著地結(jié)合DLLl或Jaggedl ；在2D培養(yǎng)物中，與對照相比，表現(xiàn)出超過85%的HUVEC細(xì)胞增殖的反向DLL4-刺激的抑制率；在2D培養(yǎng)物中，在0. 08 μ g/ml的濃度下，與對照相比，表現(xiàn)出對 HUVEC細(xì)胞管形成的抑制率高于50% ；以及在4小時時，相對于t = 0的對照，表現(xiàn)出內(nèi)化率小于50%。在另一個實施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合蛋白質(zhì)具有優(yōu)異有效的、代謝和/ 或藥效動力學(xué)性質(zhì)。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑與全人源單克隆抗體4B4， 2H10，21F7，12A1,17F3,9G8, 20G8, 21H3,1E4，3A7，4B3，1D4 或 21H3RK 中的任意一者競爭結(jié)合 Notch 1。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑抑制了哺乳動物中腫瘤細(xì)胞的生長和/或轉(zhuǎn)移。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以治療與血管生成有關(guān)的狀況。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為抗體。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為IgGl、IgG2、IgG3 或IgG4同種型的全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為 IgG2同種型的全人源單克隆抗體。與其他同種型相比，所述的IgG2同種型具有降低的引發(fā)效應(yīng)器功能的潛力，這可以使得毒性降低。在本發(fā)明的另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為IgGl同種型的全人源單克隆抗體。與其他同種型相比，所述的IgGl同種型具有升高的引發(fā)ADCC的潛力，這可以使得效力得到改善。與其他同種型(例如IgG4)相比，IgGl同種型具有改善的穩(wěn)定性，這可以使得生物利用率得到改善，或者使制造的方便程度得到改善或者得到更長的半衰期。在一個實施方案中，IgGl同種型的全人源單克隆抗體為z、za 或f同種異型。另一個實施方案為特異性地與DLL4結(jié)合并包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體， 其中所述的序列包含表2所示的互補性決定區(qū)(CDR)的序列。本發(fā)明的實施方案包含具有以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含如表2所示的CDR1、CDR2或CDR3序列中的任何一者。另一個實施方案為特異性地與DLL4結(jié)合并包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表2所示的CDR序列中的兩個。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的CDR 序列中的一者。本發(fā)明的實施方案包含具有以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列包含表2所示的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列中的任何一者。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的CDR序列中的兩個。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有這樣的序列，該序列包含表2所示的CDR1、CDR2 和CDR3序列。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以具有這樣的序列，該序列包含表2所示的可變重鏈序列或可變輕鏈序列的⑶Rl、⑶R2和⑶R3序列。在一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為抗體。在某些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在某些其他的實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體的結(jié)合片段。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑包含表2中所示的VH CDR1，其中所述的VH CDRl具有與表2中所示的VH CDRl相同的氨基酸序列，或者包含與表2中所示的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；表2中所示的VH⑶R2，其中所述的VH⑶R2 具有與表2中所示的VH CDR2相同的氨基酸序列，或者包含與表2中所示的VH CDR2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；表2中所示的VH CDR3，其中所述的VH CDR3具有與表 2中所示的VH CDR3相同的氨基酸序列，或者包含與表2中所示的VH CDR3相比具有1、2或 3個氨基酸殘基的取代；表2中所示的VL CDR1，其中所述的VL CDRl具有與表2中所示的 VL⑶Rl相同的氨基酸序列，或者包含與表2中所示的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；表2中所示的VL⑶R2，其中所述的VL⑶R2具有與表2中所示的VL⑶R2相同的氨基酸序列，或者包含與表2中所示的VL CDR2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及表2中所示的VL⑶R3，其中所述的VL⑶R3具有與表2中所示的VL⑶R3相同的氨基酸序列，或者包含與表2中所示的VL CDR3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑包含表2中所示的VH⑶R1、⑶R2和⑶R3， 以及表2中所示的VLCDRl、CDR2和CDR3。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑免疫特異性地結(jié)合DLL4，并包含表2中所示的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和表2中所示的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述的重鏈可變結(jié)構(gòu)域具有與表2中所示的氨基酸至少90%的一致性，而所述的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域具有與表2中所示的氨基酸序列至少90%的一致性，其中所述的抗體具有結(jié)合DLL4的活性。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以包含這樣的序列，該序列包含由命名為Mab2H10VH0P、Mab9G8VH、Mab21H3VH和Mab4B4VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的可變重鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American type culture collection(ATCC))中，編號分別為 2008 年 9 月 17 日的PTA-9502、PTA-9517、PTA-9501或PTA-9508。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑可以包含這樣的序列，該序列包含由命名為Mab9G8VL0PTl、Mab21H3VL0P和Mab4B4VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的可變輕鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號分別為2008年9月17日的PTA-9516、 PTA-9500或PTA-9520 ；以及由命名為Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的可變輕鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號分別為2009年7月7日的PTA-10181。在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的⑶R3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9502。
在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中， 編號為2008年9月17日的PTA-9502 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為 Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2009年7月7日的PTA-10181。 在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R 中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9502。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR 中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2009年7月7日的PTA-10181。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9502 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體 CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2009年7月7日的PTA-10181。在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9517。在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中， 編號為2008年9月17日的PTA-9517 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為 Mab9G8VL0PTl的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9516。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號為2008年9月17日的PTA-9517。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab9G8VL0PTl的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR 中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9516。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9517 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab9G8VL0PTl的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體 CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9516。在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9501。 在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為 2008年9月17日的PTA-9501 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab21H3VL0P 的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9500。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號為2008年9月17日的PTA-9501。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab21H3VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR 中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9500。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9501 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab21H3VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號為2008年9月17日的PTA-9500。在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4B4VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的 PTA-9508。在一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4B4VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為 2008年9月17日的PTA-9508 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4B4VL 的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的CDR3，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9520。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列，該可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4B4VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號為2008年9月17日的PTA-9508。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變輕鏈氨基酸序列，該可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4B4VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9520。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含可變重鏈氨基酸序列和可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的可變重鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4B4VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體⑶R中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9508 ；其中所述的可變輕鏈氨基酸序列包含由命名為Mab4B4VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體CDR中的至少一者、至少二者或至少三者，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC) 中，編號為2008年9月17日的PTA-9520。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9502。 在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9517。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9501。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4B4VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9508。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2009年7月7日的PTA-10181。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab9G8VL0PTl 的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9516。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab21H3VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9500。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4B4VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9520 在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9502)，以及由命名為Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2009年7月7日的PTA-10181)。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab9G8VL0PTl 的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9516)，以及由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9517)。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變重鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9501)，以及由命名為Mab21H3VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9500)。在另一個實施方案中，本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體包含由命名為Mab4B4VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9520)，以及由命名為Mab4B4VL的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的抗體的可變輕鏈(其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為2008年9月17日的PTA-9520)。應(yīng)該注意，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以容易地完成⑶R的測定。例如參見Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, NIH Publication 91-3242，Bethesda MD(1991)，vols. 1-3。Kabat 提供了得自多個物種的同種型抗體的免疫球蛋白鏈的多個序列比對。根據(jù)單一的編號系統(tǒng)(Kabat編號系統(tǒng))對比對的序列進行編號。Kabat序列從1991的出版物開始更新，并且可以用作電子序列數(shù)據(jù)庫(最近的可下載的版本1997)?？梢愿鶕?jù)Kabat通過與Kabat參照序列進行比對來對任何免疫球蛋白序列進行編碼。因此，Kabat編碼系統(tǒng)提供了用于編碼免疫球蛋白鏈的統(tǒng)一的系統(tǒng)。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有表2所示重鏈序列中的任何一者的序列。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含具有抗體20G8，21H3， 14B1,18B7,17B6,17F3,12A1,17G12,19G9, 21F7, 20D6,1D4，4B4，2H10 或 21H3RK 的重鏈序列；或者如表5、7、9、11或13中所示的這些抗體的重鏈序列的任何優(yōu)化版本中的任何一者的序列。輕鏈混雜(promiscuity)在本領(lǐng)域中是良好建立的，因此靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列包含抗體 4B4，2H10，21F7，12A1,17F3,9G8, 20G8, 21H3,1E4，3A7，4B3， 1D4或21H3RK的輕鏈序列；或者如表6、8、10、12或13中所示的這些抗體的輕鏈序列的任何優(yōu)化版本；或者如本文所公開的任何其他抗體中的任何一者。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列包含如表2中所示的重鏈序列；或者如表5、7、 9、11或13中所示的這些抗體的重鏈序列的任何優(yōu)化版本中的任何一者，并且還可以進一步包含表6、8、10、12或13中所示的輕鏈序列；或者本文中所公開的另一種抗體的輕鏈序列中的任何一者。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為選自以下的單克隆抗體4B4，2H10， 21F7,12A1,17F3，9G8，20G8，21H3，1E4，3A7，4B3，1D4 或 21H3RK。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑包含全人源單克隆抗體 4B4, 2H10, 21F7，12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3，1E4，3A7， 4B3，1D4或21H3RK中的一者或多者。在某些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體 4B4。在某些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體21H3。在某些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體2H10。在某些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體9G8。 在某些其他實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體21H3RK。
在一個實施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自表2 中所示序列中的任何一者的重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3。在一個實施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自表2 中所示序列中的任何一者的輕鏈CDRl、CDR2和CDR3。在一個實施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自抗體4B4，2H10，21F7，12A1，17F3，9G8，20G8，21H3， 1E4, 3A7，4B3，1D4或21H3RK的CDR中的任何一者的重鏈CDR1、CDR2和CDR3。在一個實施方案中，靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有選自抗體4B4，2H10，21F7，12A1， 17F3，9G8，20G8，21H3，1E4，3A7，4B3，1D4 或 21H3RK 的 CDR 中的任何一者的輕鏈 CDRl、CDR2 和 CDR3。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4B4或21H3，2H10，9G8或21H3RK中的任何一者的可變重鏈序列的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4B4或21H3，2H10， 9G8或21H3RK中的任何一者的可變輕鏈的⑶R1、⑶R2或⑶R3中的任何一者。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體可以包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體4B4或21H3，2H10，9G8或21H3RK的CDRl、CDR2或CDR3 ；以及表2中所示的全人源單克隆抗體4B4或21H3，2H10，9G8或21H3RK的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表2 中所示的全人源單克隆抗體4B4的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，以及表2中所示的全人源單克隆抗體4B4的CDR1、CDR2和CDR3序列。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體21H3的⑶R1、⑶R2和⑶R3 序列，以及表2中所示的全人源單克隆抗體21H3的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有表2中所示的全人源單克隆抗體2H10的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，以及表2中所示的全人源單克隆抗體2H10的 ⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。本發(fā)明的另一個實施方案為包含以下序列的靶向結(jié)合劑或抗體，其中所述的序列具有跨越表2或表13中所示序列的任何一者的構(gòu)架區(qū)和CDR(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶的臨近序列。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含這樣的序列，該序列具有跨越表2或表13中所示的單克隆抗體4B4或21H3，2H10，9G8或者21H3RK 序列的任何一者的構(gòu)架區(qū)和⑶R(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)的臨近序列。 在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :2序列的重鏈多肽。在一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :4序列的輕鏈多肽。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。一個實施方案提供靶向結(jié)合劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分，其中所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :6序列的重鏈多肽。在一個實施方案中， 所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :8序列的輕鏈多肽。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :22序列的重鏈多肽。在另一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. 序列的輕鏈多肽。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :30序列的重鏈多肽。在另一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :32序列的輕鏈多肽。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在另一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分包含具有SEQ ID NO. :30序列的重鏈多肽。在另一個實施方案中，所述的試劑或抗體、或者其抗原結(jié)合部分還包含具有SEQ ID NO. :50序列的輕鏈多肽。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個實施方案中，在所公開的CDR、或者重鏈或輕鏈序列中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含多達20、16、10、9或更少(例如1、2、3、4或5個)的氨基酸添加、取代、刪除和/ 或插入。這種修飾可以潛在地在CDR范圍內(nèi)的任何殘基處形成。在一些實施方案中，所述的抗體為全人源單克隆抗體。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體包含本文所公開的CDR的變體或衍生物、跨越構(gòu)架區(qū)和⑶R的臨近序列(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)、本文所公開的輕鏈或重鏈序列、或者本文所公開的抗體。變體包含這樣的靶向結(jié)合劑或抗體，該靶向結(jié)合劑或抗體具有在表2或表13中所示的⑶R1、⑶R2或⑶R3的任何一者中具有多達20、 16、10、9或更少(例如1、2、3、4、5或6個)的氨基酸添加、取代、刪除和/或插入的序列；跨越表2或表13中所示的構(gòu)架區(qū)和⑶R(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)的臨近序列；本文所公開的輕鏈或重鏈序列；或者本文所公開的單克隆抗體。變體包含這樣的靶向結(jié)合劑或抗體，該靶向結(jié)合劑或抗體具有表2或表13中所示的CDR1、CDR2或CDR3中的任何一者具有至少大約60、70、80、85、90、95、98或大約99 %氨基酸序列一致性的序列；跨越表2或表13中所示的構(gòu)架區(qū)和⑶R(具體而言為FRl至FR4、或者⑶Rl至⑶R3)的臨近序列；本文所公開的輕鏈或重鏈序列；或者本文所公開的單克隆抗體。兩個氨基酸序列的百分率一致性可以通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的任何方法來測定，包括但不限于成對的蛋白質(zhì)比對。在一個實施方案中，變體包含在CDR序列中或者在本文所公開的輕鏈或重鏈多肽中的變化，所述的變化是天然形成的，或者采用重組DNA技術(shù)或誘變技術(shù)對天然序列進行體外基因工程處理而誘導(dǎo)得到的。天然形成的變體包括在針對外源抗原產(chǎn)生抗體的過程中相對于種系核苷酸序列而在體內(nèi)產(chǎn)生的那些。在一個實施方案中，所述的衍生物可以為異種抗體，其為其中兩個或多個抗體被連接到一起而形成的抗體。衍生物包括經(jīng)過化學(xué)修飾的抗體。實例包括一種或多種聚合物形成的共價連接物，例如水溶性的聚合物，N-連接或0-連接的碳水化合物，糖，磷酸酯和/或其他此類分子。所述的衍生物按照不同于天然形成的或起始抗體的方式進行修飾(按照所附分子的種類或位置)。衍生物還包含刪除天然存在于所述抗體上的一個或多個化學(xué)基團。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為雙特異性抗體。雙特異性抗體為對至少兩個不同的抗原決定部位具有結(jié)合特異性的抗體。用于制備雙特異性抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。(例如參見，Millstein et al, Nature, 305 :537-539(1983) ；Traunecker et al, EMBO J, 10 :3655-3659(1991) ；Suresh et al, Methods in Enzymology,121 :210(1986)； Kostelny et al, J. Immunol,148 (5) :1547-1553(1992) ；Hollinger et al, Proc.Natl Acad. Sci. USA, 90 :6444-6448 (1993) ；Gruber et al, J. Immunol, 152 :5368(1994)；美國專利 No. 4，474，893 ；4，714，681 ；4，925，648 ；5，573，920 ；5，601，81 ；95，731，168 ；4，676，980 ； 和 4，676，980，WO 94/04690 ；WO 91/00360；WO 92/200373 ；WO 93/17715；WO 92/08802 ；與 EP 03089.)在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體具有通過將其非種系的殘基突變成種系殘基和/或除去結(jié)構(gòu)傾向性而優(yōu)化的序列。在一個實施方案中，本發(fā)明包含 SEQ ID N0. :6。在某些實施方案中，SEQ ID NO. :6包含表7的各行中所示的種系和非種系殘基的組合中的任何一者。在一些實施方案中，SEQ ID NO. :6包含表7中所示的種系殘基的任何一者、任何二者、任何三者、任何四者、任何五者、任何六者或者所有六者。在某些實施方案中，SEQ ID NO. :6包含表7的各行所示的種系和非種系殘基的獨特組合中的任何一者ο在其他實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體衍生自具有VH3-33、6_13和JH4結(jié)構(gòu)域的種系序列，其中一個或多個殘基已經(jīng)突變，從而在相應(yīng)的位置處產(chǎn)生相應(yīng)的種系殘基。在某些實施方案中，SEQ ID NO. 可以進一步包含多種修飾(其包括除去結(jié)構(gòu)傾向性)。例如，除了形成種系之外，C33可以突變成S。因此，SEQ ID NO. 可以包含表10中的各行所示的種系殘基和非種系殘基的獨特組合的任何一種，并且還可以進一步包含C33 至S的突變。本發(fā)明的另一個實施方案為競爭性地結(jié)合DLL4的靶向結(jié)合劑或抗體。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及與天然DLL4競爭性地結(jié)合Notcl或Notch4受體的靶向結(jié)合劑或抗體。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑或抗體與全人源單克隆抗體4B4或21H3， 2H10，9G8或者21H3RK的任何一者競爭性地結(jié)合Notchl?！案偁帯笔侵杆龅陌邢蚪Y(jié)合劑或抗體與全人源單克隆抗體 4B4, 2H10, 21F7，12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3，1E4，3A7，4B3，1D4 或者21H3RK的任何一者競爭性地結(jié)合Notchl，S卩，競爭是非單向性的。本發(fā)明的實施方案包含與全人源單克隆抗體4B4，2H10，21F7，12A1，17F3，9G8， 20G8，21H3，1E4，3A7，4B3，1D4或21H3RK中的任何一者交叉競爭以結(jié)合DLL4的靶向結(jié)合劑或抗體?！敖徊娓偁帯笔侵概c全人源單克隆抗體4B4，2H10, 21F7，12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3， 比4，3六7，483，104或21!13孤中的任何一者競爭性地結(jié)合Notchl的靶向結(jié)合劑或抗體，反之，即，競爭是指雙向性的。本發(fā)明的另一個實施方案為與本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體結(jié)合DLL4上相同的抗原決定部位的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的實施方案還包括與全人源單克隆抗體4B4， 2H10，21F7，12A1，17F3，9G8，20G8，21H3，1E4，3A7，4B3，1D4 或 21H3RK 中的任何一者結(jié)合 DLL4上相同的抗原決定部位的靶向結(jié)合劑或抗體。由交叉競爭分析清楚得知，本發(fā)明的抗體具有不同的或者部分重疊的抗原決定部位。例如，4B4與21H3RK和21H3交叉競爭。此外，在還原和變性條件下，4B4和21H3不結(jié)合DLL4，而9G8和2H10則顯示結(jié)合補體的抗原決定部位。
在某些實施方案中，所述的抗原決定部位由DLL4的至少一個細(xì)胞外部分構(gòu)成。所述的至少一個特定的抗原決定部位(例如21H3、21H3RK或4B4)可以包含由至少3個氨基酸殘基構(gòu)成的至少一個氨基酸序列與在DLL4中的氨基酸147-2 (即，ICSDNYYGDNCSRLCKK RNDHFGHYVCQPDGNLSCLPGWTGEYCQQPICLSGCHEQNGYCSKPAECLCRPGWQGRLC(SEQ ID NO :90))之間形成的臨近氨基酸的完整特定部分的任何組合。在一個實施方案中，所述的抗原決定部位為SEQ ID NO :90中的至少4個氨基酸殘基、至少5個氨基酸殘基、至少6個氨基酸殘基、 至少7個氨基酸殘基、至少8個氨基酸殘基、至少9個氨基酸殘基、至少10個氨基酸殘基、 至少15個氨基酸殘基、至少20個氨基酸殘基、至少25個氨基酸殘基、至少30個氨基酸殘基、至少40個氨基酸殘基、至少50個氨基酸殘基、至少60個氨基酸殘基、至少70個氨基酸殘基、至少75個氨基酸殘基、至少76個氨基酸殘基或者至少77個氨基酸殘基。在另一個實施方案中，所述的抗原決定部位在人員DLL4的氨基酸187-201 (TGEYCQQPICLSGCH(SEQ ID NO 91))中形成。在一個實施方案中，所述的抗原決定部位為SEQ ID N0:91中的至少4個氨基酸殘基、至少5個氨基酸殘基、至少6個氨基酸殘基、至少7個氨基酸殘基、至少8個氨基酸殘基、至少9個氨基酸殘基、至少10個氨基酸殘基、至少11個氨基酸殘基、至少12個氨基酸殘基、至少13個氨基酸殘基、至少14個氨基酸殘基或者至少15個氨基酸殘基。在一個實施方案中，本發(fā)明包括本文所公開的抗體的小鼠交叉反應(yīng)性抗體。在一個實施方案中，改變所述抗體的可變區(qū)，使得該抗體能夠結(jié)合小鼠DLL4。通常，所述的小鼠交叉反應(yīng)性抗體具有與本文所公開的抗體的相似的性質(zhì)，例如，能夠結(jié)合DLL4，并且能夠抑制DLL4與Notch受體的結(jié)合。在一個實例中，改變21H3RK抗體的可變區(qū)，使得該抗體能夠結(jié)合小鼠DLL4，例如所述的重鏈可以具有以下改變H31 Asn變?yōu)長ys，H5^i Ala變?yōu)閒tx)， H97 Val 變?yōu)?Thr，HlOOb Val 變?yōu)?Trp，以及 HlOOe Glu 變?yōu)?Ala (參見 SEQ ID NO 84)；而所述的輕鏈可以具有以下改變L30 Ser變?yōu)锳sn，以及L93 Asp變?yōu)閗r (參見SEQ ID NO: 85)。在另一個實施方案中，所述的重鏈具有以下改變H30Thr變?yōu)镮le，H31 Asn變?yōu)镸et， H52a Ala 變?yōu)?Pro，HlOOb Val 變?yōu)?Trp，以及 HlOOe Glu 變?yōu)?Ala (參見 SEQ ID NO 86)； 而所述的輕鏈具有以下改變L93 Asp變?yōu)閗r (參見SEQ ID NO 87)。在另一個實施方案中，所述的重鏈具有以下改變H30 Thr變?yōu)閘ie，H31 Asn變?yōu)镠is，HlOOb Val變?yōu)門rp， 以及HlOOe Glu變?yōu)锳la(參見SEQ ID NO 88)；而所述的輕鏈具有以下改變L30 Ser變?yōu)?Asn，以及 L93 Asp 變?yōu)?Ser (參見 SEQ ID NO 89)。本發(fā)明的其他實施方案包括編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體中的任何一者的經(jīng)分離的核酸分子、具有編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體的經(jīng)分離的核酸分子的載體、 或者使用這種核酸分子的任何一者的轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。本發(fā)明的實施方案包括這樣的核酸分子，該核酸分子編碼特異性地與DLL4相結(jié)合并抑制DLL4與Notch受體相結(jié)合的全人源經(jīng)分離的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明還涵蓋了在如本文所定義的嚴(yán)謹(jǐn)或嚴(yán)謹(jǐn)程度較低的雜交條件下與編碼本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體中的任何一者的多核苷酸相雜交的多核苷酸。本發(fā)明的實施方案還包括具有編碼所述結(jié)合劑的核酸分子的載體。其他實施方案包括具有所述載體(包含所述的核酸分子)的宿主細(xì)胞。如本領(lǐng)域已知的那樣，抗體可以有利地為(例如)多克隆、寡克隆、單克隆、嵌合的、人源的和/或全人源的抗體。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實施方案不限于任何特定形式的抗體或者生成或制備方法。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體的結(jié)合片段。例如，所述的靶向結(jié)合劑可以為全長的抗體(例如具有完整的人源Fc區(qū)域)或者抗體結(jié)合片段(例如Fab、Fab’或F(ab，)2、FV或者dAb)。此外，所述的抗體可以為單一結(jié)構(gòu)域的抗體， 例如與DLL4結(jié)合的駱駝或人源單一 VH或VL結(jié)構(gòu)域(例如dAb片段)。本文所述的本發(fā)明的實施方案還提供了用于制備所述這些抗體的細(xì)胞。細(xì)胞的實例包括雜交瘤細(xì)胞、重組創(chuàng)建的細(xì)胞(例如中國倉鼠卵細(xì)胞(CHO))、CHO細(xì)胞的變體(例如DG44)以及產(chǎn)生對抗DLL4的抗體的NSO細(xì)胞。關(guān)于CHO細(xì)胞的變體的其他信息可以在 Andersen 禾口 Reilly (2004)Current Opinion in Biotechnology 15，456-462 中找到，該文獻以引用方式全文并入本文。所述的抗體可以由分泌所述抗體的雜交瘤細(xì)胞、或者由重組的基因工程細(xì)胞(其經(jīng)編碼所述抗體的基因轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染)制得。此外，本發(fā)明的一個實施方案為通過在核酸分子被表達從而制得所述抗體、然后回收所述抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的抗體的方法。應(yīng)該認(rèn)識到，本發(fā)明的實施方案還包括可以編碼本發(fā)明的抗體或抗體片段的任何核酸分子(包括當(dāng)被轉(zhuǎn)染到用于抗體制備的宿主細(xì)胞中時被優(yōu)化用于提高抗體及其片段的核酸序列的產(chǎn)量)。本發(fā)明的另一個實施方案包括通過使用表達人源DLL4的細(xì)胞免疫哺乳動物、分離含有人源DLL4的細(xì)胞膜、純化出人源DLL4或其片段和/或一個或多個定向進化同源序列或其片段來制備與DLL4特異性結(jié)合并抑制DLL4的生物學(xué)活性的抗體的方法。在其他實施方案中，本發(fā)明提供了組合物，該組合物包含本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體或者其結(jié)合片段、以及可藥用的載體或稀釋劑。本發(fā)明的其他實施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合DLL4 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有血管原增殖性疾病的動物的方法。在某些實施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療腫瘤、癌癥和/或細(xì)胞增殖紊亂的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合DLL4的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的另一個實施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合DLL4 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有贅生性疾病的動物的方法。在某些實施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療贅生性疾病的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合DLL4的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的另一個實施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合DLL4 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有惡性腫瘤的動物的方法。在某些實施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療惡性腫瘤的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合 DLL4的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的另一個實施方案包括通過對動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合DLL4 的靶向結(jié)合劑來有效地治療患有與DLL4表達有關(guān)的疾病或狀況的動物的方法。在某些實施方案中，所述的方法還包括選擇需要治療與DLL4表達有關(guān)的疾病或狀況的動物，以及向這些動物給藥治療有效劑量的、特異性結(jié)合DLL4的靶向結(jié)合劑。惡性腫瘤可以選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞 (肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌 (膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤(pediatric malignancy)以及扁平上皮癌。
可治療的增殖性或血管原疾病包括贅生性疾病，例如黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、膽囊癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤、 扁平上皮癌和白血病(包括慢性粒細(xì)胞白血病)。在一個實施方案中，本發(fā)明適用于抑制患有單取決于或部分取決于DLL4的腫瘤的患者中的DLL4。本發(fā)明的另一個實施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有增殖或血管原相關(guān)性疾病的動物的藥劑中的用途。在某些實施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療增殖或血管原相關(guān)性疾病的動物。本發(fā)明的另一個實施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有贅生性疾病的動物的藥劑中的用途。在某些實施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療贅生性疾病的動物。本發(fā)明的另一個實施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有非贅生性疾病的動物的藥劑中的用途。在某些實施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療非贅生性疾病的動物。本發(fā)明的另一個實施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有惡性腫瘤的動物的藥劑中的用途。在某些實施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療惡性腫瘤的動物。本發(fā)明的另一個實施方案包括本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體在制備用于治療患有 DLL4表達相關(guān)性疾病或狀況的動物的藥劑中的用途。在某些實施方案中，所述的用途還包括選擇需要治療DLL4表達相關(guān)性疾病或狀況的動物。本發(fā)明的另一個實施方案包括用作用于治療患有增殖或血管原相關(guān)性疾病的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個實施方案包括用作用于治療患有贅生性疾病的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個實施方案包括用作用于治療患有惡性腫瘤的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個實施方案包括用作用于治療患有DLL4表達相關(guān)性疾病或狀況的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。本發(fā)明的另一個實施方案包括用作用于治療患有DLL4誘導(dǎo)疾病的動物的藥劑的、本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體。在一個實施方案中，治療增殖性或血管原相關(guān)性疾病；贅生性疾??；惡性腫瘤；或與DLL4表達有關(guān)的疾病或狀況；或者包括管理、減輕、抑制任何上述疾病或狀況。在一個實施方案中，贅生性疾病的治療包括腫瘤生長的抑制、腫瘤生長的延遲、腫瘤的衰退、腫瘤的收縮、在治療終止時腫瘤再次生長的時間的增長、腫瘤復(fù)發(fā)的時間的增長、疾病進程的減慢。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的待治療的動物為人。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為全人源單克隆抗體。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑選自全人源單克隆抗體4B4， 2H10，21F7，12A1,17F3,9G8,20G8,21H3,1E4，3A7，4B3，1D4 或 21H3RK。本發(fā)明的實施方案包括含有本文所述的靶向結(jié)合劑與治療劑的綴合物。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述的治療劑為毒素。在其他實施方案中，所述的治療劑為放射性同位素。在其他實施方案中，所述的治療劑為藥物組合物。在另一個方面中，提供了選擇性地殺死患者中的癌細(xì)胞的方法。所述的方法包括向患者給藥全人源抗體綴合物。該全人源抗體綴合物包括可以與DLL4結(jié)合的抗體、以及試劑。所述的試劑為毒素、放射性同位素，或者會殺死癌細(xì)胞的另一種物質(zhì)。因此，所述的抗體綴合物選擇性地殺死癌細(xì)胞。在一個方面中，提供了特異性地結(jié)合DLL4的綴合全人源抗體。所述的抗體附著在試劑上，并且抗體與細(xì)胞相結(jié)合使得所述的試劑被傳遞給細(xì)胞。在一個實施方案中，上述綴合全人源抗體與DLL4的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域結(jié)合。在另一個實施方案中，所述的抗體與綴合的毒素被表達DLL4的細(xì)胞內(nèi)化。在另一個實施方案中，所述的試劑為細(xì)胞毒性試劑。在另一個實施方案中，所述的試劑為(例如)皂草素、auristatin、假單胞菌外毒素、白樹毒素、蓖麻毒素、刺孢毒素、或者基于美登素的免疫綴合物等。在另一個實施方案中，所述的試劑為放射性同位素。本發(fā)明的靶向結(jié)合劑或抗體可以單獨給藥，或者可以與其他的抗體、化療藥品或放療結(jié)合給藥。例如，封阻細(xì)胞粘連、入侵、血管生成或增殖的DLL4抗體的單克隆、寡克隆或多克隆混合物可以與表現(xiàn)出可抑制腫瘤細(xì)胞增殖的藥品結(jié)合給藥。本發(fā)明的另一個實施方案包括診斷疾病或狀況的方法，其中本文所述的抗體用于檢測患者或患者樣品中DLL4的水平。在一個實施方案中，所述的患者樣品為血液、血清或尿液。在另一個實施方案中，列出了檢測風(fēng)險因子、診斷疾病以及疾病分段的方法，其中涉及使用抗DLL4抗體檢測DLL4的表達和/或過表達。在一些實施方案中，所述的方法包括向患者給藥與細(xì)胞上的DLL4選擇性地結(jié)合的全人源抗體綴合物。所述的抗體綴合物包含特異性地與DLL4相結(jié)合的抗體以及標(biāo)記。所述的方法還包括觀察患者中所述標(biāo)記的存在情況。標(biāo)記的量相對高表明所述疾病的風(fēng)險相對高，而標(biāo)記的量相對低表明所述疾病的風(fēng)險相對低。在一個實施方案中，所述的標(biāo)記為綠色熒光蛋白質(zhì)。本發(fā)明還提供了測定患者樣品中DLL4水平的方法，包括將本文所述的抗體與得自患者的生物學(xué)樣品相接處，以及檢測所述樣品中所述抗體與DLL4之間的結(jié)合水平。在更具體的實施方案中，所述的生物學(xué)樣品為血液、血漿或血清。本發(fā)明的另一個實施方案包括通過將所述的血清或細(xì)胞與本文所述的抗體相接觸、然后檢測DLL4的存在情況來診斷與細(xì)胞中DLL4的表達有關(guān)的狀況的方法。在一個實施方案中，所述的狀況可以為增殖、血管生成、細(xì)胞粘連或入侵相關(guān)性疾病，包括但不限于贅生性疾病。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括用于檢測哺乳動物組織、細(xì)胞或體液中的DLL4以篩查DLL4相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括本文所述的抗體以及用于表明所述抗體與DLL4(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。在一個實施方案中，與DLL4相結(jié)合的抗體被標(biāo)記。在另一個實施方案中，所述的抗體為未標(biāo)記的初級抗體，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述初級抗體的手段。在一個實施方案中，所述的檢測手段包括作為抗免疫球蛋白的經(jīng)標(biāo)記的第二抗體。所述的抗體可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。在一些實施方案中，可以對本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體進行修飾，從而增強它們結(jié)合補體及參與補體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在其他實施方案中，可以對所述的靶向結(jié)合劑或抗體進行修飾，從而增強它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性 (ADCC)的能力。在其他實施方案中，可以對本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體進行修飾，從而增強它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力，以及增強它們結(jié)合補體及參與補體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在一些實施方案中，可以對本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體進行修飾，從而降低它們結(jié)合補體及參與補體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在其他實施方案中，可以對所述的靶向結(jié)合劑或抗體進行修飾，從而降低它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性 (ADCC)的能力。在其他實施方案中，可以對本文所述的靶向結(jié)合劑或抗體進行修飾，從而降低它們活化效應(yīng)器細(xì)胞及參與抗體依賴的細(xì)胞毒性(ADCC)的能力，以及降低它們結(jié)合補體及參與補體依賴的細(xì)胞毒性(CDC)的能力。在某些實施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期為至少大約4至7天。在某些實施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的平均半衰期以及本發(fā)明的組合物的平均半衰期為至少大約2至5天、3至6天、4至7天、5 至8天、6至9天、7至10天、8至11天、8至12天、9至13天、10至14天、11至15天、12 至16天、13至17天、14至18天、15至19天、或者16至20天。在其他實施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的平均半衰期以及本發(fā)明的組合物的平均半衰期為至少大約17 至21天、18至22天、19至23天、20至M天、21至25天、22至沈天、23至27天、M至28 天、25至四天、或者沈至30天。在另一個實施方案中，本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期可以為至多大約50天。在某些實施方案中，抗體的半衰期以及本發(fā)明的組合物的半衰期可以通過本領(lǐng)域已知的方法延長。這種延長轉(zhuǎn)而可以降低所述抗體組合物的定量給藥的量和/或頻率。具有改善的體內(nèi)半衰期的抗體以及制備這些抗體的方法在美國專利No. 6，277，375、以及國際公開No. WO 98/23289和WO 97/3461 中有所公開。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了具有容器的制造制品。所述的容器包含裝有本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的組合物，以及表明所述組合物可以用于治療細(xì)胞粘連、 入侵、血管生成和/或增殖相關(guān)性疾病(包括但不限于由DLL4表達或過表達所表征的疾病)的包裝插入物或標(biāo)記。在其他實施方案中，本發(fā)明提供了試劑盒，該試劑盒包含裝有本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體的組合物、以及向需要治療的受試對象給藥所述組合物的說明書。本發(fā)明提供了包含變體Fc區(qū)域的蛋白質(zhì)的配制物。即，非天然形成的Fc區(qū)域，例如包含一個或多個非天然形成的氨基酸殘基的Fc區(qū)域。此外，本發(fā)明的變體Fc區(qū)域還涵蓋了包含氨基酸刪除、添加和/或修飾的Fc區(qū)域?？梢酝ㄟ^增加Fc區(qū)域?qū)cfoi的結(jié)合親和性來增長包含F(xiàn)c區(qū)域的蛋白質(zhì)的血清半衰期。在一個實施方案中，與同類分子相比，F(xiàn)c變體蛋白質(zhì)增長了血清半衰期。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域在選自239、330 和332 (按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自239D、330L和332E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然形成的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自239D、330L和332E (按照Kabat列出的EU 索引編號)中的非天然形成的氨基酸，以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的 EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然形成的氨基酸。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域在選自234、235 和331 (按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然形成的氨基酸。 在另一個具體的實施方案中，本發(fā)明的Fc變體包含234F、235F和331S (按照Kabat列出的 EU索引編號)非天然形成的氨基酸殘基。在另一個具體的實施方案中，本發(fā)明的Fc變體包含234F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)非天然形成的氨基酸?？蛇x地， 所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S (按照Kabat列出的EU 索引編號)中的非天然形成的氨基酸；以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的 EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然形成的氨基酸。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域在選自239、330和332(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自239D、330L和332E (按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然形成的氨基酸?？蛇x地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256(按照Kabat 列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自 239D、330L和332E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然形成的氨基酸，以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然形成的氨基酸。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域在選自234、235和331(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含至少一個非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然形成的氨基酸。可選地，所述的Fc區(qū)域還可以在選自252、2M和256 (按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處包含添加的非天然形成的氨基酸。在具體的實施方案中，本發(fā)明提供了 Fc變體蛋白質(zhì)配制物，其中所述的Fc區(qū)域包含至少一個選自234F、235F、235Y和331S(按照Kabat列出的EU索引編號)中的非天然形成的氨基酸； 以及在選自252Y、254T和256E(按照Kabat列出的EU索引編號)中的一個或多個位置處的至少一個非天然形成的氨基酸。用于生成非天然形成的Fc區(qū)域的方法是本領(lǐng)域已知的。例如，氨基酸的取代和/或刪除可以通過突變方法生成，包括但不限于定點突變(Kunkel，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82 :488-492(1985))、PCR 突變(Higuchi, in “ PCR Protocols :A Guide to Methods and Applications " , Academic Press, San Diego, pp. 177-183 (1990))、盒式突變(Wells et al，Gene 34:315-323(1985))。優(yōu)選的是，定點突變是通過重疊延伸PCR 方法來進行的(Higuchi, in" PCR Technology Principles and Applications for DNA Amplification" ,Stockton Press, New York，pp. 61—70 (1989))。重疊延伸 PCR (Higuchi， ibid.)技術(shù)還可以用于向靶向序列(起始DNA)中引入任何所需的突變。例如，在重疊延伸方法中PCR的第一個循環(huán)涉及使用外引物(引物1)和內(nèi)突變引物(引物3)、以及分開的第二外引物(引物4)和內(nèi)引物(引物2)來擴增靶向序列，從而產(chǎn)生兩條PCR節(jié)段(節(jié)段A 和B)。內(nèi)突變引物(引物幻被設(shè)計成包含與靶向序列的錯配，從而指定了所需的突變。在 PCR的第二個循環(huán)中，通過使用所述的兩個外引物(引物1和4)進行PCR而擴增得到第一個 PCR循環(huán)的產(chǎn)物(節(jié)段A和B)。使用限定性酶對所得的全長PCR節(jié)段(節(jié)段C)進行水解， 并將所得的限制性片段克隆到合適的載體中。作為突變的第一個步驟，將起始DNA(例如編碼Fc融合蛋白質(zhì)、抗體或者簡單的Fc區(qū)域)可操作地克隆到突變載體中。所述的引物被設(shè)計成反應(yīng)了所需的氨基酸取代。用于生成變體Fc區(qū)域的其他方法是本領(lǐng)域已知的(例如參見美國專禾Ij No. 5，624，821 ；5, 885，573 ；5，677，425 ；6，165，745 ； 6，277，375 ；5，869，046 ； 6，121，022 ；5，624，821 ；5，648，260 ；6，528，624 ；6，194，551 ；6，737，056 ；6，821，505 ； 6，277，375 ；美國專利公開 No. 2004/0002587 以及 PCT 公開 W 94/29351 ；WO 99/58572 ；WO 00/42072 ；WO 02/060919 ；WO 04/029207 ；WO 04/099249 ；WO 04/063351)。在本發(fā)明的一些實施方案中，本文所提供的抗體的糖基化模式被修改，以增強 ADCC 和 CDC 效應(yīng)器的功能。參見 Shields RL et al, (2002) JBC. 277 :26733 ；Shinkawa T et al“2003) JBC. 278 :3466 和 Okazaki A et al, (2004) J. Mol. Biol. ,336 12390 在一些實施方案中，F(xiàn)c變體蛋白質(zhì)包含一個或多個基因工程化的糖型，S卩，碳水化合物組合物以共價方式與包含F(xiàn)c區(qū)域的分子相連。基因工程化的糖型可以用于多種目的，包括但不限于增強或降低效應(yīng)器的功能?；蚬こ袒奶切涂梢酝ㄟ^本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的任何方法生成，例如通過采用基因工程化的或變體表達的菌株，通過與一種或多種酶(例如DI N-乙?；被咸寝D(zhuǎn)移酶IIItenTIll))共表達，通過在多種有機體或得自多種有機體的細(xì)胞系中表達包含F(xiàn)c區(qū)域的分子，或者通過在包含F(xiàn)c區(qū)域的分子已經(jīng)被表達之后對碳水化合物進行修飾。用于生成基因工程化的糖型的方法是本領(lǐng)域已知的，并且包括但不限于在Umana et al,1999,Nat. Biotechnol 17 :176-180 ；Davies et al,20017 Biotechnol Bioeng 74: 288-294 ；Shields et al，2002，J Biol Chem 277 :26733-26740 ；Shinkawa et al，2003，J Biol Chem 278 :3466-3473)美國專利 No. 6，602，684 ；美國系列號 No. 10/277，370 ；美國系列號 No. 10/113，929 ;PCT WO 001/61739A1 ；PCT WO 01/292246A1 ；PCT WO 02/311140A1 ；PCT WO 02/30954A1 ；Potillegent technology (Biowa,Inc. Princeton,N. J.) ；GlycoMAb glycosylation engineering technology(GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland)。例如參見 WO 00061739 ；EA01229125 ；US 20030115614 ；Okazaki et al, 2004，JMB，336 :1239-49中所描述的那些。此外，本領(lǐng)域已知Fc區(qū)域的糖基化可以被修飾，以增強或降低效應(yīng)器的功能(例如參見Umana et al, 1999,Nat. Biotechnol 17 :176-180 ；Davies et al, 2001,Biotechnol Bioeng 74:288-294 ；Shields et al，2002，J Biol Chem 277 :26733-26740 ；Shinkawa et al，2003，J Biol Chem 278 :3466-3473) U. S. Pat. No. 6，602，684 ；美國序列 No. 10/277, 370 ； 美國序列 No. 10/113，929 ;PCT WO 00/61739A1 ；PCT WO 01/292246A1 ；PCT WO 02/311140A1 ；PCT WO 02/30954A1 ；Potillegent technology(Biowa, Inc. Princeton, N. J.) ；GlycoMAb glycosylation engineering technology(GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland)).因此，在一個實施方案中，本發(fā)明的抗體的Fc區(qū)域包含糖基化被改變的氨基酸殘基。在另一個實施方案中，糖基化被改變的氨基酸使得效應(yīng)器的功能降低。 在另一個實施方案中，糖基化被改變的氨基酸殘基使得效應(yīng)器的功能增強。在具體的實施方案中，所述的Fc區(qū)域具有減少的巖藻糖基化。在另一個實施方案中，所述的Fc區(qū)域為巖藻糖基化的(例如參見美國專利申請公開No. 2005/0226867)。附圖簡述

圖1描繪了顯示IgGl DLL4抗體對于HUVEC增殖的DLL4-刺激的抑制的作用的柱狀圖。數(shù)據(jù)表示η >2個獨立試驗。圖2描繪了顯示IgG2/4 DLL4抗體在體外對HUVEC管的形成的作用(通過測量血管長度(mm)和#分支來估測)的柱狀圖。圖3描繪了顯示未標(biāo)記的抗DLL4的抗體在0. 1 μ g/ml的濃度下替代Alex_647標(biāo)記的21H3RK來進行結(jié)合的作用(通過FACS分析測定)的柱狀圖。圖4描繪了 12種嵌合DLL4/DLL1變體的圖示線性圖。所有的變體都編碼了人源 DLL4的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，并且人源DLLl替代了所描繪的單個亞結(jié)構(gòu)域或結(jié)合結(jié)構(gòu)域節(jié)段。圖5描繪了顯示21H3RK與編碼DLL4的嵌合敲除(“K0”)變體的結(jié)合情況的線性圖，其中所述的DLL4具有使用相應(yīng)的DLLl結(jié)構(gòu)域取代的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域節(jié)段。圖6描繪了顯示21H3RK與編碼DLL4的嵌合敲除(“K0”)變體和嵌合敲入(“KI”) 變體的結(jié)合情況的線性圖，其中所述的DLL4具有使用相應(yīng)的DLLl結(jié)構(gòu)域取代的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域節(jié)段，而其中所述的變體編碼了具有使用DLL4對應(yīng)物取代的區(qū)域的DLLl。發(fā)明詳述本發(fā)明的實施方案涉及能夠抑制Notch受體信號傳導(dǎo)的一組新型的DLL4封阻分子，例如抗體。這種分子可以以單一試劑的形式使用、或者可選擇地與其他結(jié)合抗體/試劑組合使用。此外，它們還可以與任何標(biāo)準(zhǔn)品或新型抗癌試劑組合使用。本發(fā)明的實施方案涉及與DLL4相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。在一些實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑與DLL4相結(jié)合，并抑制DLL4與其受體Notch (例如Notchl、Notch2、Notch3和 /或Notch4)相結(jié)合。在一些實施方案中，這種結(jié)合可以中和、封阻、抑制、消除或干擾DLL4 相關(guān)作用的一個或多個方面。在一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為單克隆抗體或其結(jié)合片段。本文中，這種單克隆抗體可以被稱為抗DLL4的抗體。
本發(fā)明的其他實施方案包括全人源抗DLL4的抗體，以及具有治療用途的抗體制備物。在一個實施方案中，本發(fā)明的抗DLL4抗體的制備物具有所需的治療性質(zhì)，包括對 DLL4的強的結(jié)合親和性、封阻DLL4受體-配基相互作用的能力、封阻DLL4介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)的能力、促進內(nèi)皮細(xì)胞增殖和非功能性血管形成的能力、調(diào)節(jié)周細(xì)胞對血管的補充的能力、 抑制腫瘤生長的能力、增加腫瘤氧不足/壞疽的能力、改變內(nèi)皮頂端/柄細(xì)胞命運的能力， 以及調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生存或癌癥干細(xì)胞生存及自我更新的能力。此外，本發(fā)明的實施方案包括使用本文所述的抗體來治療疾病的方法。本發(fā)明的抗DLL4的抗體可以用于預(yù)防DLL4介導(dǎo)的健康組織的腫瘤發(fā)生和腫瘤入侵。此外，DLL4抗體可以用于治療與腫瘤發(fā)生(例如眼部疾病(如AMD)、炎性紊亂(如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、心腦血管疾病、敗血癥以及贅生性疾病)有關(guān)的疾病?？梢员碚鳛槿魏晤愋偷膼盒阅[瘤(包括轉(zhuǎn)移性癌癥、淋巴腫瘤以及血癌)的任何疾病也都可以通過這種抑制機制來進行治療。人類中示例性的癌癥包括膀胱腫瘤、乳腺腫瘤、前列腺腫瘤、基細(xì)胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦和 CNS癌(例如神經(jīng)膠質(zhì)腫瘤)、宮頸癌、絨毛膜癌、結(jié)腸和直腸癌、結(jié)締組織癌、消化系統(tǒng)的癌癥；子宮內(nèi)膜癌、食管癌；眼癌；頭部和頸部的癌癥；胃部的癌癥；上皮內(nèi)贅生物 ’腎癌；喉癌；白血病；肝癌；肺癌(例如小細(xì)胞和非小細(xì)胞)；淋巴瘤，包括Hodgkin或非Hodgkin淋巴瘤；黑素瘤；骨髓瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、口腔癌(例如唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤；橫紋肌肉瘤；直腸癌、腎癌、呼吸系統(tǒng)的癌癥；肉瘤、皮膚癌；胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌；子宮癌、泌尿系統(tǒng)的癌癥以及其他癌癥和肉瘤。通常在狗、貓和其他寵物中診斷的惡性紊亂包括但不限于淋巴肉瘤、骨肉瘤、乳房腫瘤、肥大細(xì)胞瘤、腦腫瘤、黑素瘤、腺鱗癌、 良性的肺部腫瘤、支氣管腺腫瘤、細(xì)支氣管腺癌、纖維瘤、粘液軟骨瘤、肺部肉瘤、神經(jīng)肉瘤、 骨瘤、刺瘤、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、Ewing肉瘤、Wilm腫瘤、Burkitt淋巴瘤、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、 成神經(jīng)細(xì)胞瘤、破骨細(xì)胞瘤、口腔瘤形成、纖維肉瘤、骨肉瘤和橫紋肌肉瘤、生殖器鱗狀細(xì)胞癌、傳染性性病腫瘤、睪丸腫瘤、精原細(xì)胞瘤、Sertoli細(xì)胞腫瘤、血管外皮細(xì)胞瘤、組織細(xì)胞瘤、綠色瘤(例如粒細(xì)胞肉瘤)、角膜刺瘤、角膜鱗狀細(xì)胞癌、血管肉瘤、胸膜間皮瘤、基細(xì)胞腫瘤、胸腺瘤、胃部腫瘤、腎上腺癌、口腔多發(fā)性乳頭瘤、血管內(nèi)皮瘤和囊腺瘤、毛囊淋巴瘤、 小腸淋巴瘤、纖維肉瘤和肺部鱗狀細(xì)胞癌。在嚙齒動物(例如雪貂)中，示例性的癌癥包括胰島瘤、淋巴瘤、肉瘤、神經(jīng)瘤、胰腺島細(xì)胞腫瘤、胃部MALT淋巴瘤和胃腺瘤。影響農(nóng)業(yè)牲畜的瘤形成包括白血病、血管外皮細(xì)胞瘤和牛眼部的瘤形成(在牛中)；包皮纖維肉瘤、潰瘍性鱗狀細(xì)胞癌、包皮癌、結(jié)締組織瘤形成和肥大細(xì)胞瘤(在馬中)；肝細(xì)胞癌(在豬中)；淋巴瘤和肺部腺瘤病(在羊中)；肺部肉瘤、淋巴瘤、Rous肉瘤、成血細(xì)胞綜合癥、纖維肉瘤、腎母細(xì)胞瘤、B細(xì)胞淋巴瘤和淋巴白血性增生(在鳥類物種中)；視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、肝臟的瘤形成、淋巴肉瘤(成淋巴細(xì)胞的淋巴瘤)、類漿細(xì)胞白血病和浮囊肉瘤(在魚中)、干酪樣淋巴結(jié)炎(CLA)；由細(xì)菌假結(jié)核棒桿菌(Corynebacterium pseudotuberculosis)引起的綿羊和山羊的慢性、感染性、傳染病、以及由南非羊肺炎引起的綿羊的傳染性肺部腫瘤。本發(fā)明的其他實施方案包括用于特異性檢測生物學(xué)樣品中DLL4的數(shù)量的診斷性測試。所述的測試試劑盒可以包括本文所公開的靶向結(jié)合劑或抗體、以及用于檢測這些抗體的必要性的標(biāo)記。這些診斷性測試可用于篩查細(xì)胞粘連、入侵、血管生成或增殖相關(guān)性疾病，包括但不限于贅生性疾病。本發(fā)明的另一個方面為DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑，其中所述的拮抗劑能夠與DLL4結(jié)合。在一個實施方案中，所述的拮抗劑為靶向結(jié)合劑，例如抗體。所述的拮抗劑可以選自本文所述的抗體，例如抗體 4B4, 2H10, 21F7，12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3，1E4，3A7，4B3， 1D4 或 21H3RK。在一個實施方案中，所述的DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑可以與DLL4相結(jié)合，并由此抑制或阻止DLL4與Notch相結(jié)合，由此抑制細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖。一個實施方案為與全人源單克隆抗體4B4，2H10，21F7，12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3，1E4，3A7，4B3，1D4或21H3RK相同的一個或多個抗原決定部位相結(jié)合的靶向結(jié)合劑。一個實施方案為與全人源單克隆抗體4B4，2H10，21F7，12A1，17F3，9G8，20G8， 21H3，1E4，3A7，4B3，1D4或21H3RK相同的一個或多個抗原決定部位相結(jié)合的抗體。一個實施方案為能夠產(chǎn)生上文所述的靶向結(jié)合劑的雜交瘤細(xì)胞。在一個實施方案中，為能夠產(chǎn)生上文所述的抗體的輕鏈和/或重鏈的雜交瘤細(xì)胞。在一個實施方案中，所述的雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生全人源單克隆抗體的輕鏈和/或重鏈。在另一個實施方案中，所述的雜交瘤細(xì)胞能夠產(chǎn)生全人源單克隆抗體4B4，2H10, 21F7，12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3， 1E4，3A7，4B3，1D4或21H3RK的輕鏈和/或重鏈?？蛇x擇地，所述的雜交瘤細(xì)胞可以產(chǎn)生這樣的抗體，該抗體能夠與全人源單克隆抗體4B4，2H10, 21F7，12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3，1E4， 3A7，4B3，1D4或21H3RK相同的一個或多個抗原決定部位相結(jié)合。另一個實施方案為編碼上文所述的靶向結(jié)合劑的核酸分子。在一個實施方案中， 為編碼上文所述的抗體的輕鏈或重鏈的核酸分子。在一個實施方案中，所述的核酸分子編碼了全人源單克隆抗體的輕鏈或重鏈。另一個實施方案為編碼選自抗體4B4，2H10，21F7， 12A1，17F3，9G8，20G8, 21H3，1E4，3A7，4B3，1D4或21H3RK中的全人源單克隆抗體的輕鏈或重鏈的核酸分子。本發(fā)明的另一個實施方案為包含一個或多個上文所述的核酸分子的載體，其中所述的載體編碼了上文所述的靶向結(jié)合劑。在本發(fā)明的一個實施方案中，為包含一個或多個上文所述的核酸分子的載體，其中所述的載體編碼了上文所述的抗體的輕鏈和/或重鏈。本發(fā)明的另一個實施方案為包含上文所述的載體的宿主細(xì)胞?？蛇x擇地，所述的宿主細(xì)胞可以包含多于一個的載體。此外，本發(fā)明的一個實施方案為通過在其中核酸分子被表達從而產(chǎn)生所述的靶向結(jié)合劑、然后回收所述的靶向結(jié)合劑的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的靶向結(jié)合劑的方法。在本發(fā)明的一個實施方案中衛(wèi)通過在核酸分子被表達從而產(chǎn)生所述的抗體、然后回收所述的抗體的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞來制備本發(fā)明的抗體的方法。在一個實施方案中，本發(fā)明包括通過用編碼上文所述的靶向結(jié)合劑的至少一個核酸分子轉(zhuǎn)染至少一個宿主細(xì)胞、在所述的宿主細(xì)胞中表達所述的核酸分子以及分離所述的靶向結(jié)合劑來制備靶向結(jié)合劑的方法。在一個實施方案中，本發(fā)明包括通過用編碼上文所述的抗體的至少一個核酸分子轉(zhuǎn)染至少一個宿主細(xì)胞、在所述的宿主細(xì)胞中表達所述的核酸分子以及分離所述的抗體來制備抗體的方法。根據(jù)另一個方面，本發(fā)明包括通過給藥本文所述的拮抗劑來拮抗DLL4的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑。本發(fā)明的另一個方面包括通過給藥上文所述的靶向結(jié)合劑來拮抗DLL4的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。本發(fā)明的另一個方面包括通過給藥上文所述的抗體來拮抗DLL4的生物學(xué)活性的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑來治療動物中疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑來治療動物中疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的方法。 所述的方法可以包括選擇需要治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。所述的靶向結(jié)合劑可以單獨給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體來治療動物中疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑來治療動物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑。所述的拮抗劑可以單獨給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑來治療動物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。所述的靶向結(jié)合劑可以單獨給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體來治療動物癌癥的方法。所述的方法可以包括選擇需要治療癌癥的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體來減輕或抑制動物腫瘤細(xì)胞的增殖、粘連、入侵和/或血管生成的方法。所述的方法可以包括選擇需要減輕或抑制增殖、細(xì)胞粘連、入侵和/或血管生成的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)另一個方面，提供了通過給藥治療有效量的拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體來減緩動物腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移的方法。所述的方法可以包括選擇需要減緩腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移的動物，以及向所述的動物給藥治療有效劑量的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體。所述的抗體可以單獨給藥，或者與其他抗體或者化療藥品或放療結(jié)合給藥。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了 DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑在用于制造治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的藥劑中的用途。在一個實施方案中，所述的DLL4的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實施方案中，所述的DLL4的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的藥劑的、DLL4的生物學(xué)活性拮抗劑。在一個實施方案中，所述的DLL4的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實施方案中，所述的DLL4的生物學(xué)活性拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的藥劑的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療疾病相關(guān)性細(xì)胞粘連和/或入侵和/或血管生成和/或增殖的藥劑的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了 DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑在用于制造治療動物癌癥的藥劑中的用途。在一個實施方案中，DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實施方案中，DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了 DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑在用于治療動物癌癥的藥劑中的用途。在一個實施方案中，DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑為本發(fā)明的靶向結(jié)合劑。在一個實施方案中，DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑為本發(fā)明的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑在用于制造治療動物癌癥的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療動物癌癥的藥劑的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體在用于制造治療動物癌癥的藥劑中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于治療動物癌癥的藥劑的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造減輕或抑制動物增殖、細(xì)胞粘連、入侵和/或血管生成的藥劑中的用途。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了用作用于制造減輕或抑制動物增殖、細(xì)胞粘連、 入侵和/或血管生成的藥劑的、拮抗DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。根據(jù)另一個方面，提供了拮抗所述的DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體在用于制造用于減緩動物腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移的藥劑中的用途。根據(jù)另一個方面，提供了用作用于減緩動物腫瘤生長和/或轉(zhuǎn)移的藥劑的、拮抗所述的DLL4的生物學(xué)活性的靶向結(jié)合劑或抗體。在一個實施方案中，本發(fā)明特別適用于在患有單獨依賴于或部分依賴于DLL4的腫瘤患者中拮抗DLL4。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了包含DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑以及可藥用的載體的藥物組合物。在一個實施方案中，所述的拮抗劑包含抗體。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了包含DLL4的生物學(xué)活性的拮抗劑以及可藥用的載體的藥物組合物。在一個實施方案中，所述的拮抗劑包含抗體。在一些實施方案中，在給藥特異性結(jié)合DLL4的抗體之后，給藥清除劑，從而移除血液中過量的循環(huán)抗體。抗DLL4的抗體可以用于消除患者樣品中的DLL4，并因此可以用作用于本文所述的疾病狀態(tài)的診斷工具。此外，基于抗DLL4抗體的顯著抑制由DLL4介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)活性 (如以下實施例中所表明的那樣)的能力，所述的抗DLL4的抗體在治療由DLL4的表達所導(dǎo)致的癥狀和狀況中具有治療作用。在具體的實施方案中，本文所述的抗體和方法涉及治療由DLL4誘導(dǎo)的細(xì)胞粘連、入侵、血管生成、增殖和/或細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)所導(dǎo)致的癥狀。另一個實施方案涉及采用本文所述的抗體和方法來治療細(xì)胞粘連、入侵、血管生成和/或增殖相關(guān)性疾病，包括贅生性疾病，例如黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、干細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌以及胰腺癌。所述的抗體還可以用于治療關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化以及與血管生成有關(guān)的疾病中的細(xì)胞粘連和/或入侵。在一個具體的實施方案中，所述的抗DLL4的抗體或靶向結(jié)合劑可以在治療實體腫瘤中具有治療作用，其中所述的實體腫瘤的發(fā)展依賴于具有增殖能力并且能夠有效地對其他腫瘤干細(xì)胞(例如急性髓細(xì)胞白血病(AML)和乳腺腫瘤)產(chǎn)生所述的抗體和所述的靶向結(jié)合劑的一小群干細(xì)胞。本發(fā)明的另一個實施方案包括用于檢測哺乳動物組織、細(xì)胞或體液中的DLL4以篩查細(xì)胞粘連、入侵、血管生成或增殖相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括與DLL4 相結(jié)合的靶向結(jié)合劑以及用于表明所述的靶向結(jié)合劑與DLL4(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。在一個實施方案中，與DLL4相結(jié)合的靶向結(jié)合劑被標(biāo)記。在另一個實施方案中，所述的靶向結(jié)合劑為未標(biāo)記的，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述靶向結(jié)合劑的手段。優(yōu)選的是，所述的靶向結(jié)合劑可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及輻射非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。本發(fā)明的另一個實施方案包括用于檢測哺乳動物組織、細(xì)胞或體液中的DLL4以篩查細(xì)胞粘連、入侵、血管生成或增殖相關(guān)性疾病的測試試劑盒。所述的試劑盒包括與DLL4 相結(jié)合的抗體以及用于表明所述抗體與DLL4(如果存在的話)的反應(yīng)情況的手段。所述的抗體可以為單克隆抗體。在一個實施方案中，與DLL4相結(jié)合的抗體被標(biāo)記。在另一個實施方案中，所述的抗體為未標(biāo)記的初級抗體，而所述的試劑盒還包含用于檢測所述初級抗體的手段。在一個實施方案中，所述的手段包括作為抗免疫球蛋白的經(jīng)標(biāo)記的第二抗體。優(yōu)選的是，所述的抗體可以用選自熒光色素、酶、放射性核以及輻射非透過性材料的標(biāo)志物來標(biāo)記。在以下另外的詳細(xì)材料中提供了本文所公開的、關(guān)于所述抗體的其他實施方案、 特征等。序列列表本發(fā)明的實施方案包括以下表1中所列的特異性抗體。該表格分別報告了各種抗 DLL4的抗體的識別編號，以及相應(yīng)重鏈和輕鏈的基因和多肽的可變結(jié)構(gòu)域的SEQ ID編號。 各種抗體已經(jīng)給出了識別編號。表權(quán)利要求
1.一種與DLL4特異性結(jié)合的經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的抗體表現(xiàn)出一種或多種以下所述的性質(zhì)，包括以小于200pM的Kd與人源DLL4相結(jié)合；與獼猴DLL4交叉反應(yīng)；與小鼠DLL4發(fā)生微弱的交叉反應(yīng)；以幾乎相等的親和性與獼猴DLL4相結(jié)合；不會顯著地結(jié)合DLLl或Jaggedl ；在2D培養(yǎng)物中，與對照相比，表現(xiàn)出超過85%的HUVEC細(xì)胞增殖的反向DLL4-刺激的抑制率；在2D培養(yǎng)物中，在0. 08 μ g/ml的濃度下，與對照相比，表現(xiàn)出對HUVEC細(xì)胞管形成的抑制率高于50% ；以及在4小時時，相對于t = 0的對照，表現(xiàn)出內(nèi)化率小于50%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體抑制哺乳動物中腫瘤的生長和/或轉(zhuǎn)移。
3.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體以低于IOOpM的 Kd與DLL4相結(jié)合。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體與抗原決定部位相結(jié)合，所述的抗原決定部位包含由至少3個氨基酸殘基構(gòu)成的至少一個氨基酸序列與 SEQ ID NO 90的臨近氨基酸的完整特定部分的組合。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為4B4，2H10， 21F7,12A1,17F3，9G8，20G8，21H3，1E4，3A7，4B3，1D4 或 21H3RK 中的任意一者。
6.一種包含氨基酸序列的經(jīng)分離的抗體，所述氨基酸序列包括a)如表2或13中所示的CDR3序列；b)如表2或13中所示的⑶R1、⑶R2或⑶R3序列中的任何一者；c)如表2中所示的可變輕鏈序列的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列；或者d)如表2中所示的可變重鏈序列的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列。
7.—種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其免疫特異性地結(jié)合DLL4并包含(a)SEQ ID N0:6的VH CDRl，其具有與SEQ ID N0:6的VH CDRl相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 6的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQID N0:6的VH CDR2，其具有與SEQ ID N0:6的VH CDR2相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 6的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0:6的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0:6的VH CDR3相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 6的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQID N0:8的VL CDRl，其具有與SEQ ID N0:8的VL CDRl相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 8的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQID N0:8的VL CDR2，其具有與SEQ ID N0:8的VL CDR2相同的氨基酸序列，或者包含與SEQID NO 8的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID N0:8的VL CDR3，其具有與SEQ ID N0:8的VL CDR3相同的氨基酸序列，或者包含與SEQ ID NO 8的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含(a)SEQ ID NO 6 的 VH CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 8 的 VL CDR1、CDR2和 CDR3。
9.一種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的抗體或片段免疫特異性地結(jié)合DLL4， 并包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域以及輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，所述的重鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQ ID N0:6的氨基酸具有至少90%的一致性；而所述的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQ ID NO :8的氨基酸序列具有至少90%的一致性，其中所述的抗體具有結(jié)合DLL4的活性。
10.一種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其免疫特異性地結(jié)合DLL4并包含(a)SEQ ID NO :30的VH CDR1，其具有與SEQ ID N0:30的VH CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(b)SEQID NO :30的VH CDR2，其具有與SEQ ID N0:30的VH CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(c)SEQID N0:30的VH CDR3，其具有與SEQ ID N0:30的VH CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 30的VH⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(d)SEQID NO :32的VL CDR1，其具有與SEQ ID N0:32的VL CDRl相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶Rl相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；(e)SEQID NO :32的VL CDR2，其具有與SEQ ID N0:32的VL CDR2相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶R2相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代；以及(f)SEQ ID N0:32的VL CDR3，其具有與SEQ ID N0:32的VL CDR3相同的氨基酸序列， 或者包含與SEQ ID NO 32的VL⑶R3相比具有1、2或3個氨基酸殘基的取代。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體包含(a)SEQ ID NO :30 的 VH CDR1、CDR2 和 CDR3 ；以及(b)SEQID NO 32 的 VL CDR1、CDR2和 CDR3。
12.—種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其免疫特異性地結(jié)合DLL4，并包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域以及輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其中所述的重鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQ ID NO :30的氨基酸具有至少 90%的一致性；而所述的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域與SEQ ID NO 32的氨基酸序列具有至少90%的一致性；其中所述的抗體具有結(jié)合DLL4的活性。
13.—種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :6的序列，并且其中所述的SEQ ID NO. :6包含表9中的各行所示的種系殘基和非種系殘基的任何一種獨特的組合。
14.一種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :8的序列，并且其中所述的SEQ ID NO. :8包含表10中的各行所示的種系殘基和非種系殘基的任何一種獨特的組合。
15.一種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :30的序列，并且其中所述的SEQ ID NO. :30包含表5中的各行所示的種系殘基和非種系殘基的任何一種獨特的組合。
16.一種經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的抗體包含SEQ ID NO. :32的序列，并且其中所述的SEQ ID NO. :32包含表6中的各行所示的種系殘基和非種系殘基的任何一種獨特的組合。
17.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體是單克隆抗體。
18.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體為全人源單克隆抗體的結(jié)合片段。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的經(jīng)分離的抗體，其中所述的抗體選自Fab，F(xiàn)ab，，F(xiàn)(ab，)2, Fv和dAb片段。
20.一種單克隆抗體，其與抗體 4B4，2H10，21F7，12A1,17F3,9G8, 20G8, 21H3,1E4，3A7， 4B3，1D4或21H3RK中的任何一者競爭以結(jié)合DLL4。
21.一種單克隆抗體，其與抗體 4B4，2H10，21F7，12A1,17F3,9G8, 20G8, 21H3,1E4，3A7， 4B3，1D4或21H3RK中的任何一者結(jié)合DLL4上相同的抗原決定部位。
22.一種包含氨基酸序列的經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的氨基酸序列包括包含由命名為Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-10181 ；包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9502 ；或者包含由命名為Mab2H10VH0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9502;以及包含由命名為Mab2H10VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-10181。
23.一種包含氨基酸序列的經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的氨基酸序列包括包含由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為 PTA-9517 ；包含由命名為Mab9G8VL0PT 1的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9516 ；或者包含由命名為Mab9G8VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心 (ATCC)中，編號為PTA-9517 ；以及包含由命名為Mab9G8VL0PTl的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9516。
24.一種包含氨基酸序列的經(jīng)分離的抗體或其結(jié)合片段，其中所述的氨基酸序列包括包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為 PTA-9501 ；包含由命名為Mab21H3VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9500 ；或者包含由命名為Mab21H3VH的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的重鏈⑶R中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變重鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9501 ；以及包含由命名為Mab21H3VL0P的質(zhì)粒中的多核苷酸所編碼的輕鏈CDR中的至少一者、至少二者或者至少三者的可變輕鏈氨基酸序列，其中所述的質(zhì)粒保藏在美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)中，編號為PTA-9500。
25.一種包含根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體的組合物。
26.一種包含根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體的藥物組合物。
27.—種編碼根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體的核酸分子。
28.一種治療動物中惡性腫瘤的方法，包括選擇需要治療惡性腫瘤的動物；以及向所述的動物給藥治療有效劑量的根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體。
29.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述的動物為人。
30.根據(jù)權(quán)利要求觀所述的方法，其中所述的抗體選自全人源單克隆抗體4B4，2H10， 21F7,12A1,17F3，9G8，20G8，21H3，1E4，3A7，4B3，1D4 或 21H3RK。
31.根據(jù)權(quán)利要求22-30所述的方法，其中所述的惡性腫瘤選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、 非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、乳腺癌、 卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤以及扁平上皮癌。
32.—種治療非贅生性疾病的方法，包括選擇需要治療非贅生性疾病的動物；以及向所述的動物給藥治療有效劑量的根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的動物為人。
34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述的抗體選自抗體4B4，2H10,21F7，12A1， 17F3，9G8，20G8,21H3,1E4,3A7，4B3，1D4 或 21H3RK。
35.根據(jù)權(quán)利要求32-34所述的方法，其中所述的非贅生性疾病選自眼部疾病、炎性紊亂、心血管疾病和敗血癥。
36.根據(jù)權(quán)利要求25所述的組合物在用于治療惡性腫瘤中的用途。
37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的組合物的用途，其中所述的惡性腫瘤選自黑素瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞(肝)癌、甲狀腺腫瘤、胃部(胃)癌、前列腺癌、 乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、腎癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、食管癌、 頭部和頸部的癌癥、間皮瘤、肉瘤、膽管癌(膽管細(xì)胞癌)、小腸腺癌、小兒惡性腫瘤以及扁平上皮癌。
38.根據(jù)權(quán)利要求25所述的組合物在用于治療非贅生性疾病中的用途。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的組合物的用途，其中所述的非贅生性疾病選自眼部疾病、 炎性紊亂、心血管疾病和敗血癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及對抗DLL4的靶向結(jié)合劑以及這種試劑的用途。更具體而言，本發(fā)明涉及定向于DLL4的全人源單克隆抗體。所述的靶向結(jié)合劑可用于治療與DLL4的活性和/或過量生產(chǎn)有關(guān)的疾病，并且可以用作診斷工具。
文檔編號A61K39/395GK102264763SQ200980142423
公開日2011年11月30日 申請日期2009年9月18日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月19日
發(fā)明者D·詹金斯, I·福爾茨, V·貝迪安 申請人:米迪繆尼有限公司