本發(fā)明涉及一種納米脂質(zhì)載體的制備方法。

背景技術(shù)：

將藥物分子或載藥納米制劑與靶向分子連接，可以與細(xì)胞表面的受體結(jié)合，將藥物選擇性地遞送至腫瘤細(xì)胞從而提高藥效。葉酸受體是一種糖基化磷脂肌醇連接的膜糖蛋白，葉酸具有無毒、免疫原性弱、性質(zhì)穩(wěn)定的特點(diǎn)，與葉酸受體親和力高。研究表明相較于正常細(xì)胞，葉酸受體在多種人類腫瘤細(xì)胞(如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌等)膜表面過度表達(dá)，且葉酸與其他分子共價(jià)連接后，仍保持對(duì)細(xì)胞膜表面葉酸受體的高親和力，這為葉酸特異性受體介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞靶向提供了依據(jù)。牛血清白蛋白(BSA)分子中賴氨酸的一氨基及末端氨基眾多，是對(duì)其進(jìn)行化學(xué)修飾的有效部位，能夠與葉酸活性酯共價(jià)連接。白蛋白在中性pH條件下荷負(fù)電，可以通過靜電引力吸附于陽離子納米載體表面以延長血液滯留時(shí)間，并且白蛋白可被腫瘤和炎癥部位優(yōu)先攝取，本身就具有一定的靶向作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種納米脂質(zhì)載體的制備方法。

一種納米脂質(zhì)載體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應(yīng)4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環(huán)境中、室溫下攪拌反應(yīng)10h；

（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應(yīng)的FA；

（3）收集未反應(yīng)的FA，

（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環(huán)境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經(jīng)0.22納米微孔濾膜過膜數(shù)次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；

（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。

所述步驟（4）中BSA溶液為2.5mg/mL。

所述步驟（4）中水和時(shí)間為20 min。

所述步驟（4）的反應(yīng)溫度為35℃。

本發(fā)明所述方法制備的納米脂質(zhì)載體，顯著提高了腫瘤細(xì)胞對(duì)納米載體的特異性攝取，并提高了在荷瘤裸鼠體內(nèi)的抗腫瘤效果?？梢?，葉酸修飾的主動(dòng)靶向納米脂質(zhì)載體，增加了腫瘤細(xì)胞主動(dòng)靶向能力，提高了體內(nèi)抗腫瘤效果。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1。

一種納米脂質(zhì)載體的制備方法，包括以下步驟：

（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應(yīng)4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環(huán)境中、室溫下攪拌反應(yīng)10h；

（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應(yīng)的FA；

（3）收集未反應(yīng)的FA，

（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環(huán)境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經(jīng)0.22納米微孔濾膜過膜數(shù)次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；

（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。

實(shí)施例2。

一種納米脂質(zhì)載體的制備方法，包括以下步驟：

（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應(yīng)4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環(huán)境中、室溫下攪拌反應(yīng)10h；

（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應(yīng)的FA；

（3）收集未反應(yīng)的FA，

（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環(huán)境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經(jīng)0.22納米微孔濾膜過膜數(shù)次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；

（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。

所述步驟（4）中BSA溶液為2.5mg/mL。

實(shí)施例3。

一種納米脂質(zhì)載體的制備方法，包括以下步驟：

（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應(yīng)4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環(huán)境中、室溫下攪拌反應(yīng)10h；

（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應(yīng)的FA；

（3）收集未反應(yīng)的FA，

（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環(huán)境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經(jīng)0.22納米微孔濾膜過膜數(shù)次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；

（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。

所述步驟（4）中水和時(shí)間為20 min。

所述步驟（4）的反應(yīng)溫度為35℃。