一種牛超排緩釋劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及畜牧業(yè)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種牛超排緩釋劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 牛超數(shù)排卵（Superovulation)處理的主要目的是誘導(dǎo)更多數(shù)量的排卵卵泡，從 而獲得更多數(shù)量的可移植胚胎和較高的移植妊娠率（Boetal.，2002)。傳統(tǒng)的牛超排處理 藥物包括孕馬血清（PMSG)或促性腺激素一促卵泡素（FSH)(Mapletoftetal.，1992)JMSG 單次肌注使用不僅能夠誘導(dǎo)供體卵巢上的卵泡發(fā)育（Schamsetal.，1977)，同時(shí)由于其半 衰期較長（40h以上)，供體牛卵巢在超數(shù)排卵過程中會(huì)形成大的未排卵卵泡，影響胚胎收集 效率，必須結(jié)合抗PMSG在牛超排上聯(lián)合使用（Dielemanetal.，1993)，因此PMSG已經(jīng)逐漸 不在牛超數(shù)排卵處理中使用。目前，國內(nèi)外普遍使用FSH用于牛超數(shù)排卵。但是，F(xiàn)SH在牛 體內(nèi)半衰期較短，大約5h左右（Laster, 1972;Demoustieretal.，1988)，因此超數(shù)排卵過 程中需要頻繁注射FSH，以誘導(dǎo)卵泡發(fā)育（Bellowsetal.，1969;Monniauxetal.，1983)。 如一次常規(guī)的牛超數(shù)排卵處理過程，需要1天2次，間隔12h肌肉注射FSH，持續(xù)4天，在處 理過程中存在供體牛應(yīng)激反應(yīng)大，試驗(yàn)及牛場(chǎng)人工成本增加等問題。另外，隨著越來越多 的國家對(duì)食品安全的日益重視，雌激素（E2)被禁止用于超排供體牛的卵泡前期處理（Lane etal. 2008)，這些問題都影響了牛超數(shù)排卵的效率，如2002-2011年美國奶牛超排平均可 用胚胎數(shù)為6. 1-6. 7枚（Hasler，2012)，提高效果不明顯。為了解決上述問題，探索在超數(shù) 排卵用FSH中添加緩釋劑（SRF)，提高牛超數(shù)排卵效率，簡(jiǎn)化牛超數(shù)排卵程序具有極大的應(yīng) 用價(jià)值。已有研究報(bào)道在FSH中添加氫氧化鋁凝膠（Al-gel)(Kimuraetal.，2007)或聚 乙烯吡咯烷酮（PVP)(Yamamotoetal.，1994)稀釋FSH進(jìn)行超排獲得了初步成功。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種新型的牛超排緩釋劑及其制備方法。
[0004] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明的一種牛超排緩釋劑，所述緩釋劑為5. 0-10.Omg/mL 的透明質(zhì)酸溶液。其制備方法為：稱取透明質(zhì)酸，用水(例如去離子水、注射用水）溶解，即 得。
[0005] 本發(fā)明還提供一種牛超排藥物，所述藥物由5. 0-10.Omg/mL的透明質(zhì)酸和 300-400mg/mL的促卵泡素復(fù)配制得。
[0006] 上述藥物的制備方法為，稱取透明質(zhì)酸和促卵泡素，分別用水配制成溶液，將兩種 溶液混合，即得。
[0007] 本發(fā)明使用的超數(shù)排卵緩釋劑名稱：透明質(zhì)酸。透明質(zhì)酸為高分子聚合物，由單位 D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺組成。D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺之間由(6-1, 3-配 糖鍵相連，雙糖單位之間由(6-l，4-配糖鍵相連?；瘜W(xué)分子式：C14H20NNa011。透明質(zhì)酸為白 色粉狀物，濃度為5. 0-10.Omg/mL的透明質(zhì)酸，可以使水溶液粘度增加，同時(shí)又不影響透明 質(zhì)酸與去尚子水的充分混合。
[0008] 本發(fā)明進(jìn)一步提供所述藥物在牛超排中的應(yīng)用。按每kg體重計(jì)，每次每只牛的給 藥量為300-400mg，分2次給藥，每次給藥時(shí)間間隔為48h。
[0009] 本發(fā)明提供的超數(shù)排卵緩釋劑的特點(diǎn)與作用：緩釋劑無生物活性，可在動(dòng)物組織 內(nèi)生物降解，可以促使促卵泡素（FSH)緩慢釋放，延長FSH作用時(shí)間。
[0010]常規(guī)牛超數(shù)排卵處理的主要方法是：使用促卵泡素1天2次，間隔12h肌肉注射 FSH，持續(xù)4天。常規(guī)牛超數(shù)排卵方法存在著FSH注射次數(shù)多，供體牛應(yīng)激反應(yīng)大，人工成本 大等問題。本發(fā)明的牛超數(shù)排卵緩釋劑與FSH聯(lián)合使用，延長了FSH作用時(shí)間，簡(jiǎn)化了牛超 數(shù)排卵程序，由4天8次注射減少為4天2次注射，超排效率得到提高，能夠獲得與常規(guī)超 排一致的超排效果，此法操作方便，提高了超排效率，便于在牛場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)操作及推廣使用。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例 中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。
[0012] 實(shí)施例牛超排緩釋劑、其制備方法及應(yīng)用
[0013] 1.試劑與材料：F0LLTR0PIN-V(貝爾尼奇公司，400mgNIH/瓶）；孕酮陰道栓（貝 爾尼奇公司，1. 56克孕酮/支）；氯前列烯醇(齊魯動(dòng)物保健品公司，0. 322mg/支)，沖卵液 (貝爾尼奇公司，1000 ml/袋)，乙二醇保存液（貝爾尼奇公司，50ml/袋)，精液(購買自北京奶 牛中心，精液號(hào)為11106002)，透明質(zhì)酸（山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司，25g/瓶)，采卵管（德 國米尼圖公司，型號(hào)15#)，集卵杯（日本富士平）。
[0014] 10.Omg/mL緩釋劑的制備：使用電子天平稱取透明質(zhì)酸100.Omg,按照10.Omg/mL 的濃度標(biāo)準(zhǔn)，使用10.OmL去離子水溶解100.Omg透明質(zhì)酸，待充分溶解后，室溫靜置保存。
[0015]FSH的稀釋：FSH用20.OmL注射用水充分溶解稀釋。
[0016]FSH-緩釋劑的配制：
[0017] 步驟I:FSH的預(yù)稀釋：使用2.OmL注射器吸取I.OmL注射用水稀釋400.OmgFSH， 待充分溶解后靜置待用；
[0018] 步驟2 :FSH-緩釋劑混合：使用10.OmL注射器吸取9.OmL超排緩釋劑溶液，與 I.OmL的FSH溶液混合配制成10.Oml的FSH-緩釋劑溶液，同時(shí)40°C水浴中充分混勻，待用。
[0019] 實(shí)驗(yàn)例1
[0020] 1.供體牛：選擇40-45月齡、體重500-550kg的成年奶牛15頭作為供體。
[0021] 2?供體牛超排處理
[0022] 2. 1常規(guī)超排處理（FSH組）：供體牛發(fā)情周期任意天(發(fā)情當(dāng)天除外）埋植陰道栓 (CIDR)(第0天)，第5天早、晚各肌注4.OmLFSH;第6天早、晚各肌注3mLFSH;第7天早、 晚各肌注2.OmLFSH;第8天早、晚各肌注I.OmLFSH，總劑量為20.OmL(400mg)FSH。第7 天注射FSH同時(shí)分別肌肉注射氯前列烯醇0. 6mg和0. 4mg(3支和2支），第7天晚上撤除陰 道栓(表1)。
[0023] 2. 2添加緩釋劑超排處理（FSH-SRF組):供體牛發(fā)情周期任意天(發(fā)情當(dāng)天除外)埋 植陰道栓（CIDR)(第0天)，第5天上午注射7. 5mL(300mg)FSH-SRF混合物，第7天上午注 射2. 5mL(100mg)FSH-SRF混合物，下午撤除CIDR，上、下午分別肌注PG6.OmL和4.OmL(表 1)。
[0024] 3?人工授精
[0025] 第8天早、晚觀察供體母牛發(fā)情，發(fā)情后12h第一次人工輸精，精液為常規(guī)冷凍細(xì) 管精液，間隔12h第二次輸精。每次使用1支凍精，輸精部位為子宮體。
[0026] 4.胚胎采集
[0027] 供體母牛超排后發(fā)情第7天（發(fā)情當(dāng)天為0天）非手術(shù)采集胚胎。每側(cè)子宮角用 250mL沖卵液，反復(fù)沖洗6~7次，胚胎回收液使用集卵杯收集，體式顯微鏡下進(jìn)行胚胎鑒 定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種牛超排緩釋劑，其特征在于，所述緩釋劑為5. 0-10.0 mg/mL的透明質(zhì)酸溶液。
2. 權(quán)利要求1所述緩釋劑的制備方法，其特征在于，稱取透明質(zhì)酸，用水溶解。
3. -種牛超排藥物，其特征在于，所述藥物由5. 0-10.0 mg/mL的透明質(zhì)酸和 300-400mg/mL的促卵泡素復(fù)配制得。
4. 權(quán)利要求3所述藥物的制備方法，其特征在于，稱取透明質(zhì)酸和促卵泡素，分別用水 配制成溶液，將兩種溶液混合。
5. 權(quán)利要求3所述藥物在牛超排中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，按每kg體重計(jì)，每次每只牛的給藥量為 300-400mg，分2次給藥，每次給藥時(shí)間間隔為48h。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種新型的牛超排緩釋劑，所述緩釋劑為5.0-10.0mg/mL的透明質(zhì)酸溶液。將本發(fā)明的牛超數(shù)排卵緩釋劑與FSH聯(lián)合使用，延長了FSH作用時(shí)間，簡(jiǎn)化了牛超數(shù)排卵程序，由4天8次注射減少為4天2次注射，超排效率得到提高，能夠獲得與常規(guī)超排一致的超排效果，此法操作方便，提高了超排效率，便于在牛場(chǎng)現(xiàn)場(chǎng)操作及推廣使用。
【IPC分類】A61P15-08, A61K38-24, A61K47-36
【公開號(hào)】CN104800834
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410033320
【發(fā)明人】郝海生, 朱化彬, 杜衛(wèi)華, 王棟, 宋金輝
【申請(qǐng)人】中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
【公開日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2014年1月23日