專利名稱：胰島素的純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于胰島素的純化方法，更具體地說是胰島素的結(jié)晶方法，用于制備高純度胰島素。
本發(fā)明的技術(shù)方案是其純化方法為胰島素鹽析物→鈉鹽結(jié)晶→重結(jié)晶→收集干燥得胰島素結(jié)晶粉；鈉鹽結(jié)晶的方法為胰島素鹽析物用0.1N稀鹽酸溶解成20-30％的溶解液(W/V)；用10N氫氧化鈉溶液將該溶解液調(diào)PH7左右，加入0.5-2/10量的30％濃度的氯化鈉溶液，攪拌均勻；再用5N氫氧化鈉溶液補(bǔ)調(diào)至PH7.5-8.5，室溫?cái)嚢杞Y(jié)晶8-10小時(shí)。再靜置，使結(jié)晶完全沉下后，吸去上清液，用離心或過濾的方法收集結(jié)晶；用濃度2-10％的冷氯化鈉溶液洗結(jié)晶1-2次，得胰島素鈉鹽濕結(jié)晶。重結(jié)晶的方法為將胰島素鈉鹽濕結(jié)晶按26-30％析干，按0.5-2％濃度計(jì)算出總體積；按每克干品加入固體檸檬酸1-1.5克，再加水溶解成總體積的約1/3量；冷室靜置10-15小時(shí)后過濾得澄清濾液；向?yàn)V液中按1-1.5克干品加入濃度為20％醋酸鋅溶液1-2ml，冷丙酮16-20ml，再用冷水稀釋至總體積后，用4N氨水調(diào)PH6.0-6.5，慢速攪拌5小時(shí)以上，轉(zhuǎn)入冷室靜置使結(jié)晶完全沉下。收集干燥方法為吸去上清液用離心方法收集結(jié)晶，再用冷蒸餾水水洗1-2次，然后丙酮、乙醚脫水、用五氧化二磷做干燥劑真空干燥，即得胰島素結(jié)晶粉。
術(shù)語“胰島素鹽析物”是本技術(shù)領(lǐng)域?qū)I(yè)人員所熟知的。
所述冷室是指攝氏溫度5-10℃。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是克服了單純鋅鹽結(jié)晶或單純鈉鹽結(jié)晶的缺點(diǎn)，使胰島素結(jié)晶收率和純度提高，效價(jià)收率提高10-15％。
實(shí)施例1將1Kg胰島素鹽析物用0.1N稀鹽酸溶解，使成體積5立升，用10當(dāng)量氫氧化鈉調(diào)PH8.2，加入濃度30％的氯化鈉溶液0.5立升，攪拌均勻，再用5N氫氧化鈉補(bǔ)調(diào)至PH8.2，室溫?cái)嚢?小時(shí)后靜置，待結(jié)晶完全沉下后離心收集結(jié)晶，用3％氯化鈉溶液洗滌結(jié)晶1次，得鈉鹽濕結(jié)晶。
重結(jié)晶按26％析干，按干重0.5/10計(jì)算出總體積，按每克干品加入固體檸檬酸1克，加水溶解至總體積的1/3量，冷室靜置約10小時(shí)后，過濾，向?yàn)V液中按1.0克干品加入20％的醋酸鋅1毫升，冷丙酮20毫升，用5-10℃冷水稀釋至總體積，用4N氨水調(diào)PH6.1-6.3，慢速攪拌5小時(shí)，冷室靜置10小時(shí)至結(jié)晶完全沉下。收集干燥，得胰島素結(jié)晶粉。效價(jià)收率提高10-15％。
實(shí)施例2將1Kg胰島素鹽析物用0.1N稀鹽酸溶解，使成體積3立升，用10當(dāng)量氫氧化鈉調(diào)PH7.8，加入濃度30％的氯化鈉溶液0.15立升，攪拌均勻，再用5N氫氧化鈉補(bǔ)調(diào)至PH7.8，室溫?cái)嚢?小時(shí)后靜置，待結(jié)晶完全沉下后離心收集結(jié)晶，用3％氯化鈉溶液洗滌結(jié)晶1次，得胰島素鈉鹽濕結(jié)晶。
重結(jié)晶按30％析干，按干重2/10計(jì)算出總體積，按每克干品加入固體檸檬酸1.2克，加水溶解至總體積的1/3量，靜置約15小時(shí)后，過濾，向?yàn)V液中按1克干品加入20％的醋酸鋅1.5毫升，冷丙酮20毫升，用5-10℃冷水稀釋至總體積，用4N氨水調(diào)PH6.1-6.3，慢速攪拌5小時(shí)，冷室靜置10小時(shí)至結(jié)晶完全。收集干燥，得胰島素結(jié)晶粉，效價(jià)收率提高10-15％。
權(quán)利要求
1.一種胰島素的純化方法，其特征是該方法是胰島素鹽析物→鈉鹽結(jié)晶→重結(jié)晶→收集干燥得胰島素結(jié)晶粉；所述鈉鹽結(jié)晶的方法是(a)將胰島素鹽析物，用0.1N稀鹽酸溶解成20-30％的溶解液(W/V)；(b)用氫氧化鈉溶液對(duì)溶解液調(diào)PH7.5-8.5，室溫?cái)嚢杞Y(jié)晶8-10小時(shí)；(c)靜置，使結(jié)晶完全沉下后用離心或過濾收集結(jié)晶；(d)用2-10％的冷氯化鈉溶液洗結(jié)晶1-2次，得胰島素鈉鹽濕結(jié)晶。所述重結(jié)晶的方法是(a)將胰島素鈉鹽濕結(jié)晶按26-30％析干，按0.5-2/10濃度計(jì)算出總體積，按每克干品加入固體檸檬酸1-1.5克，再加水溶解成總體積的1/3量；(b)冷室靜置10-15小時(shí)后過濾，濾液需澄清；(c)向?yàn)V液中按1克干品加入濃度為20％醋酸鋅溶液1-2ml，冷丙酮16-20ml，再用冷水稀釋至總體積后，用4N氨水調(diào)PH6.0-6.5，慢速攪拌5小時(shí)以上使結(jié)晶完全，再冷室靜置至結(jié)晶完全沉下。所述收集干燥方法是吸去上清液，用離心方法收集結(jié)晶，再用冷蒸餾水水洗1-2次，然后丙酮、乙醚脫水、以五氧化二磷做干燥劑真空干燥即得胰島素結(jié)晶粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是鈉鹽結(jié)晶的(b)步驟是用10N氫氧化鈉溶液，將溶解液調(diào)PH7左右，再按體積加入0.5-2/10量的30％的氯化鈉溶液攪拌均勻，再用5N氫氧化鈉溶液補(bǔ)調(diào)PH7.5-8.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是冷室溫度為攝氏5-10℃。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種胰島素的純化方法，本方法是胰島素鹽析物→鈉鹽結(jié)晶→鋅鹽重結(jié)晶→收集干燥得胰島素結(jié)晶粉。本發(fā)明和單純鈉鹽結(jié)晶、單純鋅鹽結(jié)晶相比，具有生產(chǎn)周期短、效價(jià)收率高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07K1/14GK1390854SQ0211318
公開日2003年1月15日 申請(qǐng)日期2002年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月15日
發(fā)明者羅桂榮, 彭淑華, 陳慧 申請(qǐng)人:江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司