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一種谷氨酸棒桿菌突變株與應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):11837273閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種谷氨酸棒桿菌突變株,其特征在于:是以谷氨酸棒桿菌ATCC 13032為出發(fā)菌株,通過(guò)常壓室溫等離子體誘變,在含2g/L 5-甲基色氨酸基本培養(yǎng)基上篩選獲得的谷氨酸棒桿菌TP607,菌株鄰氨基苯甲酸合酶小亞基編碼基因trpG發(fā)生2個(gè)點(diǎn)突變,突變基因的序列為序列表<400>1所示序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的谷氨酸棒桿菌突變株,其特征在于:保藏號(hào)為CGMCC No.12302。

3.權(quán)利要求1或2所述谷氨酸棒桿菌突變株在制備色氨酸方面的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的谷氨酸棒桿菌突變株的應(yīng)用,其特征在于:制備色氨酸的具體步驟如下:首先將菌體谷氨酸棒桿菌突變株接種到試管斜面活化培養(yǎng)基中,然后轉(zhuǎn)接搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng),培養(yǎng)至對(duì)數(shù)中期時(shí)轉(zhuǎn)接到5L發(fā)酵罐中,發(fā)酵34h時(shí)菌體OD600為108。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的谷氨酸棒桿菌突變株的應(yīng)用,其特征在于:制備色氨酸的具體步驟如下:

(1)菌種活化

斜面培養(yǎng):取-80℃保藏菌種劃線接種于活化斜面,32℃培養(yǎng)12h,并傳代一次;

(2)種子培養(yǎng)

種子培養(yǎng):使用5L發(fā)酵罐培養(yǎng)種子,用無(wú)菌水沖洗二代斜面制備菌懸液,按10%接種到種子培養(yǎng)基中,終體積為2L。發(fā)酵溫度32℃、pH 7.0±0.2,相對(duì)溶氧控制在40±5%,培養(yǎng)12h,菌體OD600達(dá)到15±2時(shí),接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中;

(3)發(fā)酵罐培養(yǎng)

發(fā)酵培養(yǎng):采用分批流加補(bǔ)料工藝,發(fā)酵罐放液種子培養(yǎng)基1.4L,添加2.4L的發(fā)酵培養(yǎng)基,接種量為20±2%;培養(yǎng)溫度為32±2℃,pH 7.0±0.2,相對(duì)溶氧控制在25±5%,發(fā)酵周期為36h。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的谷氨酸棒桿菌突變株的應(yīng)用,其特征在于:所述步驟(1)中使用的活化培養(yǎng)基(g/L):蛋白胨10,牛肉膏10,酵母粉5,NaCl 2.5,玉米漿15mL/L,瓊脂25,pH 7.0-7.2,滅菌條件:121℃、20min。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的谷氨酸棒桿菌突變株的應(yīng)用,其特征在于:所述步驟(2)中使用的種子培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖35,酵母粉5,玉米漿60mL/L,豆粕水解液20mL/L,KH2PO4 1.5,MgSO40.5,F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01,MnSO4·H2O0.01,VB1 0.001,pH7.0-7.2,滅菌條件:121℃、20min。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的谷氨酸棒桿菌突變株的應(yīng)用,其特征在于:所述步驟(3)中使用的發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖100,玉米漿25mL/L,豆粕水解液25mL/L,(NH4)2SO43,KH2PO42.2,MgSO40.7,F(xiàn)eSO4·7H2O 0.01,MnSO4·H2O0.01,VB10.001,pH 7.0-7.2,滅菌條件:121℃,20min。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的谷氨酸棒桿菌突變株的應(yīng)用,其特征在于:所述菌體谷氨酸棒桿菌突變株的保存條件為-80℃、保存于16%甘油管中。

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