本發(fā)明屬于生物培養(yǎng)基領(lǐng)域，涉及一種角質(zhì)蛋白培養(yǎng)基，具體的涉及兔須癬毛癬菌角質(zhì)蛋白培養(yǎng)基及其制作方法。

背景技術(shù)：

兔須癬毛癬菌專一侵害人皮膚、指甲、毛發(fā)以及動(dòng)物的皮膚、角、蹄和毛發(fā)，是引起人和兔等動(dòng)物皮膚真菌病最常見病原之一。為了有效的防控兔須癬毛癬菌，常常需建立動(dòng)物模型，或培養(yǎng)皮膚組織進(jìn)行模擬體內(nèi)生長試驗(yàn)，不僅費(fèi)用高，且技術(shù)難度大，用動(dòng)物作模型也違背動(dòng)物福利。因此，如何研制模擬體內(nèi)組織環(huán)境生長的培養(yǎng)基，是研究者們一直探索的課題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)問題，提供了一種利用動(dòng)物屠宰的廢棄——豬蹄為原料，制作以角質(zhì)蛋白為唯一氮源和碳源角質(zhì)蛋白培養(yǎng)基。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：兔須癬毛癬菌角質(zhì)蛋白培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基包括角質(zhì)蛋白和基質(zhì)；其中基質(zhì)所含成分按重量份數(shù)比包括：硫酸鎂0.3~0.7重量份、磷酸二氫鉀0.05~0.15重量份、硫酸亞鐵0.005~0.015重量份、硫酸鋅0.003~0.007重量份、磷酸二氫鈉3~5重量份、磷酸氫二鈉2.5~5重量份、蒸餾水1000重量份。

進(jìn)一步地，所述基質(zhì)所含成分按重量份數(shù)比包括：硫酸鎂0.5重量份、磷酸二氫鉀0.1重量份、硫酸亞鐵0.01重量份、硫酸鋅0.005重量份、磷酸二氫鈉3.86重量份、磷酸氫二鈉3.97重量份、蒸餾水1000重量份。

進(jìn)一步地，所述角質(zhì)蛋白的制作方法為：將豬蹄匣洗凈除去雜物和粘附物，再剔除角質(zhì)底和角質(zhì)球、保留角質(zhì)壁純角質(zhì)，然后切成碎塊、烘干、粉碎，最后過200目篩，干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

進(jìn)一步地，所述角質(zhì)蛋白培養(yǎng)基分為角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基和角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，將角蛋白與基質(zhì)按重量比1:1000裝入三角瓶中，加熱溶解，然后在121℃下高壓滅菌20min，冷卻，即得角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，按重量比將角質(zhì)蛋白：基質(zhì)：細(xì)菌培養(yǎng)瓊脂為1：100：15配置后，加熱溶解，121℃下高壓滅菌20min，得到混合液；當(dāng)做斜面試管培養(yǎng)基時(shí)，將混合液趁熱倒入試管中，使之有形成坡度，凝固后即得角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基；當(dāng)做平皿培養(yǎng)基時(shí)，將混合液冷卻到50~60℃，在超凈工作臺內(nèi)，將其倒入滅菌平皿中，且每平皿含有瓊脂10~15mL，凝固后即得角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基。

進(jìn)一步地，所述粘附物為肉蹄和殘留的皮膚組織。

進(jìn)一步地，所述角質(zhì)蛋白培養(yǎng)基的保存溫度為4℃。

本發(fā)明獲得的有益效果為：本發(fā)明原料獲取簡單易得且成本低，制作方法簡單、可控，操作強(qiáng)。角質(zhì)蛋白來自豬屠宰后廢棄物——蹄匣，豬蹄匣剔除角質(zhì)底和角質(zhì)球，用角質(zhì)壁制成角質(zhì)蛋白粉，以此為唯一氮源和碳源，制作角蛋白瓊脂培養(yǎng)基和角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基，模擬人體或動(dòng)物體內(nèi)組織環(huán)境，接種兔須癬毛癬菌，分別在角蛋白瓊脂培養(yǎng)基和角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基生長出菌落和菌絲，該角質(zhì)蛋白培養(yǎng)基制作成功為兔須癬毛癬菌發(fā)病機(jī)理及有效防治奠定基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明兔須癬毛癬菌在角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基中的菌落正面圖。

圖2為本發(fā)明兔須癬毛癬菌在角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基中的菌落背面圖。

圖3為本發(fā)明兔須癬毛癬菌在角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基中的菌絲球圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖的具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明

實(shí)施例1

角質(zhì)蛋白的制作方法為：將豬蹄匣洗凈除去雜物、肉蹄和殘留的皮膚組織，再剔除角質(zhì)底和角質(zhì)球、保留角質(zhì)壁純角質(zhì)，然后切成碎塊、烘干、粉碎，最后過200目篩，干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

基質(zhì)所含成分按重量份數(shù)比包括：硫酸鎂0.3重量份、磷酸二氫鉀0.05重量份、硫酸亞鐵0.005重量份、硫酸鋅0.003重量份、磷酸二氫鈉3重量份、磷酸氫二鈉2.5重量份、蒸餾水1000重量份。

角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基的制作方法，將角蛋白1g與基質(zhì)1000mL裝入三角瓶中，加熱溶解，然后在121℃下高壓滅菌20min，冷卻，即得角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基，4℃保存。

實(shí)施例2

角質(zhì)蛋白的制作方法為：將豬蹄匣洗凈除去雜物、肉蹄和殘留的皮膚組織，再剔除角質(zhì)底和角質(zhì)球、保留角質(zhì)壁純角質(zhì)，然后切成碎塊、烘干、粉碎，最后過200目篩，干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

基質(zhì)所含成分按重量份數(shù)比包括：硫酸鎂0.5重量份、磷酸二氫鉀0.1重量份、硫酸亞鐵0.01重量份、硫酸鋅0.005重量份、磷酸二氫鈉3.86重量份、磷酸氫二鈉3.97重量份、蒸餾水1000重量份。

角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基的制作方法，將角蛋白1g與基質(zhì)1000mL裝入三角瓶中，加熱溶解，然后在121℃下高壓滅菌20min，冷卻，即得角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基，4℃保存。

實(shí)施例3

角質(zhì)蛋白的制作方法為：將豬蹄匣洗凈除去雜物、肉蹄和殘留的皮膚組織，再剔除角質(zhì)底和角質(zhì)球、保留角質(zhì)壁純角質(zhì)，然后切成碎塊、烘干、粉碎，最后過200目篩，干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

基質(zhì)所含成分按重量份數(shù)比包括：硫酸鎂0.5重量份、磷酸二氫鉀0.1重量份、硫酸亞鐵0.01重量份、硫酸鋅0.005重量份、磷酸二氫鈉3.86重量份、磷酸氫二鈉3.97重量份、蒸餾水1000重量份。

角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基的制作方法，將角蛋白1g，基質(zhì)100mL，細(xì)菌培養(yǎng)瓊脂15g加熱溶解，121℃下高壓滅菌20min，得到混合液；斜面試管培養(yǎng)基，將混合液趁熱倒入試管中，使之有形成坡度，凝固后即得角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基，4℃保存。

實(shí)施例4

角質(zhì)蛋白的制作方法為：將豬蹄匣洗凈除去雜物、肉蹄和殘留的皮膚組織，再剔除角質(zhì)底和角質(zhì)球、保留角質(zhì)壁純角質(zhì)，然后切成碎塊、烘干、粉碎，最后過200目篩，干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

基質(zhì)所含成分按重量份數(shù)比包括：硫酸鎂0.7重量份、磷酸二氫鉀0.15重量份、硫酸亞鐵0.015重量份、硫酸鋅0.007重量份、磷酸二氫鈉5重量份、磷酸氫二鈉5重量份、蒸餾水1000重量份。

角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基的制作方法，將角蛋白1g，基質(zhì)100mL，細(xì)菌培養(yǎng)瓊脂15g加熱溶解，121℃下高壓滅菌20min，得到混合液；將混合液冷卻到50~60℃，在超凈工作臺內(nèi)，將其倒入滅菌平皿中，且每平皿含有瓊脂10~15mL，凝固后即得角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基，4℃保存。

實(shí)施例5

角質(zhì)蛋白的制作方法為：將豬蹄匣洗凈除去雜物、肉蹄和殘留的皮膚組織，再剔除角質(zhì)底和角質(zhì)球、保留角質(zhì)壁純角質(zhì)，然后切成碎塊、烘干、粉碎，最后過200目篩，干燥保存?zhèn)溆谩?/p>

基質(zhì)所含成分按重量份數(shù)比包括：硫酸鎂0.6重量份、磷酸二氫鉀0.10重量份、硫酸亞鐵0.012重量份、硫酸鋅0.005重量份、磷酸二氫鈉4重量份、磷酸氫二鈉4.5重量份、蒸餾水1000重量份。

角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基的制作方法，將角蛋白1g，基質(zhì)100mL，細(xì)菌培養(yǎng)瓊脂15g加熱溶解，121℃下高壓滅菌20min，得到混合液；將混合液冷卻到50~60℃，在超凈工作臺內(nèi)，將其倒入滅菌平皿中，且每平皿含有瓊脂10~15mL，凝固后即得角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基，4℃保存。

實(shí)驗(yàn)1：以實(shí)施例2所得培養(yǎng)基為例研究兔須癬毛癬菌在角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基生長情況

將保存兔須癬毛癬菌接種在沙保弱培養(yǎng)基（Sabourand′sagar culture medium），放入28℃真菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)10天，觀察菌落生長情況。用接種針挑取菌落中部新生菌絲，接種于角質(zhì)蛋白液體培養(yǎng)基，放入搖床培養(yǎng)，28℃，120轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)10-20天，即可觀察到成團(tuán)的菌絲球，如圖3所示。

實(shí)驗(yàn)2：以實(shí)施例3所得培養(yǎng)基為例研究兔須癬毛癬菌在角質(zhì)蛋白瓊脂培養(yǎng)基生長情況

將保存兔須癬毛癬菌接種在沙保弱培養(yǎng)基（Sabourand′sagar culture medium），放入28℃真菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)10天，觀察菌落生長情況。用接種針挑取菌落中部新生菌絲，接種于角蛋白瓊脂培養(yǎng)基，為防止水分蒸發(fā)，用封口膜密封平皿，置濕盒內(nèi)，放入28℃真菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)，15-30天。

培養(yǎng)15天可觀察到菌絲生長，菌落正面為白色粉末狀，圓形，較疏松如圖1所示；菌落背面有色素沉著，菌落中央色素較深，為黃褐色，周圍為淺黃色，如圖2所示。隨著時(shí)間的延長，菌落增大，色素產(chǎn)量增多，由黃色變成褐色。