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一種利用枯草芽孢桿菌工程菌高產(chǎn)D?核糖的方法與流程

文檔序號(hào):11145554閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種利用枯草芽孢桿菌工程菌高產(chǎn)D-核糖的發(fā)酵方法,其特征在于,

(1)菌種培養(yǎng):將工程菌株活化后接種到種子培養(yǎng)基培養(yǎng),獲得一級(jí)種子和/二級(jí)種子;

(2)D-核糖發(fā)酵:將步驟(1)培養(yǎng)好的一級(jí)或二級(jí)種子接種到發(fā)酵罐中,進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中,控制pH,通過(guò)調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速和通風(fēng)比,控制溶解氧進(jìn)行發(fā)酵;發(fā)酵過(guò)程中流加葡萄糖酸內(nèi)酯進(jìn)行代謝流的調(diào)控;

所述枯草芽孢桿菌工程菌為枯草芽孢桿菌SFA-H43菌株中轉(zhuǎn)酮酶基因替換為SEQ ID NO.7所示基因序列后獲得的工程菌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵方法,其特征在于,所述枯草芽孢桿菌工程菌為,枯草芽孢桿菌SFA-H43菌株中轉(zhuǎn)酮酶基因終止密碼子前500bp序列,替換為枯草芽孢桿菌SFR-4菌株的轉(zhuǎn)酮酶基因終止密碼子前500bp序列獲得的工程菌;

優(yōu)選的,所述枯草芽孢桿菌工程菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)工程菌SFR-43T,該菌株于2016年11月23日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏地址為:湖北省武漢市武昌珞珈山,保藏號(hào)為:CCTCC M 2016666。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的發(fā)酵方法,其特征在于,發(fā)酵過(guò)程中,進(jìn)行補(bǔ)料培養(yǎng),補(bǔ)料流加葡萄糖和葡萄糖酸內(nèi)酯,兩者重量比例為(2-4):(4-6)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的發(fā)酵方法,其特征在于,步驟(1)菌種培養(yǎng):取35-40℃培養(yǎng)2-3天工程菌株的新鮮斜面,用接種環(huán)取1-2環(huán)斜面菌種,接種到50ml液體種子培養(yǎng)基中,35-40℃,150-200rpm,搖瓶培養(yǎng)10-16小時(shí),是為一級(jí)種子;將一級(jí)種子以1-10%的(體積百分?jǐn)?shù))接種種子培養(yǎng)基,35-40℃培養(yǎng)6-12小時(shí),是為二級(jí)種子。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的發(fā)酵方法,其特征在于,步驟(2)D-核糖發(fā)酵:將步驟(1)培養(yǎng)好的一級(jí)或二級(jí)種子以1-10%(體積百分?jǐn)?shù))的接種量接種到發(fā)酵罐中(55-65%的裝液量),35-40℃進(jìn)行通風(fēng)攪拌培養(yǎng),培養(yǎng)過(guò)程中,通過(guò)流加物料控制pH在5-7,通過(guò)調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速和通風(fēng)比,保持發(fā)酵液中相對(duì)溶解氧濃度10-50%;補(bǔ)料時(shí)流加物料為按一定比例配制的葡萄糖和葡萄糖酸內(nèi)酯,控制發(fā)酵過(guò)程總碳源添加量為120-150g/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的發(fā)酵方法,其特征在于,斜面培養(yǎng)所用的斜面菌種培養(yǎng)基的組成為:酵母浸提物5g/L,蛋白胨10g/L,NaCl 3g/L,瓊脂20g/L,其余為水,pH7.0-7.2;

或者,液體一級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖20-40g/L,酵母浸提物2-10g/L,玉米漿8-12g/L,pH 7.0-7.2;

或者,二級(jí)種子培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖30-60g/L,酵母浸提物2-10g/L,玉米漿8-12g/L,(NH4)2SO4 2-3g/L,MgSO4 2g/L,pH 7.0-7.2;

或者,搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:葡萄糖120-150g/L,酵母浸提物2-10g/L,玉米漿5-15g/L,(NH4)2SO4 2-3g/L,MgSO4 2g/L,MnSO4 0.2g/L,pH 7.0-7.2。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的發(fā)酵方法,其特征在于,發(fā)酵初始培養(yǎng)基組成為:葡萄糖120-150g/L,酵母浸提物3-6g/L,玉米漿5-10g/L,(NH4)2SO4 2-3g/L,MgSO4 2g/L,MnSO40.2g/L,pH 6.0-7.2。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的發(fā)酵方法,其特征在于,發(fā)酵過(guò)程中流加物料組成為:葡萄糖200-400g/L,葡萄糖酸內(nèi)酯600-400g/L,酵母浸提物0.5-1g/L。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)酵方法,其特征在于,一級(jí)種子培養(yǎng)基培養(yǎng)的時(shí)間為12-14小時(shí);

或者,所述二級(jí)種子培養(yǎng)基培養(yǎng)的時(shí)間為6-8小時(shí);

或者,發(fā)過(guò)程培養(yǎng)溫度為36-38℃;

或者,發(fā)酵過(guò)程pH控制在5.5-6.5;

或者,發(fā)酵過(guò)程溶解氧濃度保持在20-30%。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的發(fā)酵方法,其特征在于,所述流加物料組成為:葡萄糖200-300g/L,葡萄糖酸內(nèi)酯600-500g/L,酵母浸提物0.4-0.6g/L。

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