本技術(shù)屬于生物，一般而言，本發(fā)明涉及cldn6結(jié)合分子。更具體地，本技術(shù)涉及特異性結(jié)合cldn6的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段或抗體藥物綴合物(adc)組合物、其制備方法及其用途。

背景技術(shù)：

1、cldn6(又稱之為claudin-6，skullin)，cldn6作為claudin家族(簡(jiǎn)寫(xiě)為cldn家族，包含27個(gè)cldn成員)成員之一，是組成細(xì)胞間緊密連接的重要分子。cldn6位于染色體16p3.3，分子量大約20-40kda。claudin成員之間具有相似的結(jié)構(gòu)，每個(gè)claudin分子有4個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，2個(gè)細(xì)胞外環(huán)和2條胞內(nèi)尾區(qū)(lal-nag,m.,battis,m.,santin,a.d.,&morin,p.j.(2012).claudin-6:a?novel?receptor?for?cpe-mediated?cytotoxicity?inovarian?cancer.oncogenesis)。cldn6擁有一個(gè)c端的pdz結(jié)合位點(diǎn)，使得緊密連接蛋白能與細(xì)胞內(nèi)某些蛋白發(fā)生相互作用關(guān)系，在細(xì)胞連接及上皮組織通透性等方面均可發(fā)揮重要作用(bioinformatic?analysis?reveals?potential?properties?of?human?claudin-6regulation?and?functions.oncology.2017)。

2、cldn6作為潛在的腫瘤特異性靶點(diǎn)，在正常組織幾乎不表達(dá)(us9487584)，在多種實(shí)體瘤中表達(dá)，包括卵巢癌(24～54％)、胃癌(9.7～51.6％)、生殖細(xì)胞癌(100％)、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)(6.5～10.9％)、肝癌(79.2～80.9％)、粘液纖維肉瘤(63.9％)(identification?of?claudin-6as?a?molecular?biomarker?in?pan-cancer?throughmultiple?omics?integrative?analysis.front.cell?dev.biol.2021；qu,huinan?et?al.“cldn6:from?traditional?barrier?function?to?emerging?roles?in?cancers.”international?journal?of?molecular?sciences?vol.22,24?13416.14dec.2021)。同時(shí)，在卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌、胃癌、肝癌中，cldn6高表達(dá)與更低的生存率和預(yù)后相關(guān)(gao,peipei?et?al.“association?of?cldn6?and?cldn10?with?immunemicroenvironment?in?ovarian?cancer:a?study?of?the?claudin?family.”frontiersin?genetics?vol.12?595436.23jun.2021；targeting?tumor?lineage?plasticity?inhepatocellular?carcinoma?using?an?anti-cldn6?antibody-drug?conjugate.sciencetranslational?medicine.03feb?2021；yu,s.,zhang,y.,li,q.et?al.cldn6?promotestumor?progression?through?the?yap1-snail1?axis?in?gastric?cancer.cell?deathdis?10,949(2019))。

3、并且，cldn6與多種惡性腫瘤耐藥相關(guān)，可通過(guò)tgf-β/smad、p38-mapk、jaks-stats、ask1-p38/c-jun等多種信號(hào)通路參與腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移(ito,yui?et?al.“aberrant?expression?of?claudin-6contributes?to?malignant?potentials?and?drugresistance?of?cervical?adenocarcinoma.”cancer?science?vol.113,4(2022))，cldn6作為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物(abstract?1907:claudin?6is?a?carcinoembryonic?antigenwith?cancer?stem?cell?marker?features.aacr?annual?meeting?2018/us20190077876a1)，在肝癌中索拉非尼治療下導(dǎo)致cldn6陽(yáng)性腫瘤干細(xì)胞的定向分化從而介導(dǎo)對(duì)索拉非尼耐藥(kong,fan-en?et?al.“targeting?tumor?lineage?plasticity?inhepatocellular?carcinoma?using?an?anti-cldn6?antibody-drug?conjugate.”sciencetranslational?medicine?vol.13,579(2021))。

4、序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)cldn6與其它c(diǎn)ldn家族蛋白之間存在高度的序列保守性，序列相似度為25～70％，同cldn9，cldn3和cldn4序列相似度較高，其中與cldn9在第一個(gè)胞外區(qū)僅相差一個(gè)氨基酸，第二個(gè)胞外區(qū)相差兩個(gè)氨基酸(bioinformatic?analysis?revealspotential?properties?of?human?claudin-6regulation?andfunctions.oncology.2017)，其中cldn9在正常組織中低表達(dá)，而在卵巢癌、宮頸癌等高表達(dá)(bispecific?claudin-6x?cd3antibodies?in?a?2+1format?demonstrate?selectivityand?activity?on?human?ovarian?cancer?cells.2021.aacr)。因此開(kāi)發(fā)特異性靶向cldn6或者同時(shí)靶向cldn6和cldn9的抗體藥物，將能夠用于潛在的更廣的患者人群，在卵巢癌等適應(yīng)癥上具有更強(qiáng)的協(xié)同藥效。

5、納米抗體具有更小的相對(duì)分子質(zhì)量以及更好的組織穿透，可以潛在地用于car-t、雙抗和核素治療(i,muyldermans?s.the?therapeutic?potential?ofnanobodies.biodrugs.2020；34(1):11-26.)。

6、本領(lǐng)域迫切需要可以強(qiáng)結(jié)合cldn6弱結(jié)合(或不結(jié)合)cldn9且不結(jié)合cldn3和cldn4，或者強(qiáng)結(jié)合cldn6和cldn9且不結(jié)合cldn3，cldn4的納米抗體，以達(dá)到更好的抗體治療效果。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種新的cldn6結(jié)合分子，具體而言，提供一種新的特異性識(shí)別cldn6的單結(jié)構(gòu)域抗體，所述特異性識(shí)別cldn6的單結(jié)構(gòu)域抗體具有更低的毒副作用和更佳的臨床藥效，能夠更有效地治療癌癥。

2、總的來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供一種特異性結(jié)合cldn6的結(jié)合分子，具體地，一種特異性結(jié)合cldn6的單結(jié)構(gòu)域抗體，又稱cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體。術(shù)語(yǔ)“cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體”在下文中也稱為cldn6單域抗體、納米抗體形式的cldn6抗體、cldn6納米抗體或cldn6的vhh抗體，以上術(shù)語(yǔ)可以互換使用。本技術(shù)還提供了構(gòu)建和篩選所述cldn6結(jié)合分子或單結(jié)構(gòu)域抗體的方法，編碼所述cldn6結(jié)合分子或單結(jié)構(gòu)域抗體的核酸分子、用于表達(dá)cldn6結(jié)合分子或單結(jié)構(gòu)域抗體的載體和宿主細(xì)胞以及包含所述cldn6結(jié)合分子或單結(jié)構(gòu)域抗體的組合物或試劑盒。

3、具體而言，本發(fā)明提供納米抗體形式的cldn6抗體以及其人源化改造或親和力成熟后的衍生分子，在保持高親和力、低分子量等優(yōu)勢(shì)的同時(shí)，進(jìn)行免疫原性修飾，改善了成藥性，具有極大的治療優(yōu)勢(shì)。

4、在一些方面，本發(fā)明提供分離的cldn6結(jié)合分子，其能夠特異性結(jié)合cldn6，并且包含重鏈可變區(qū)，所述重鏈可變區(qū)包含如下的cdr1、cdr2和cdr3：

5、(a)分別包含seq?id?no:1-3，或

6、(b)分別包含seq?id?no:1和4-5，或

7、(c)分別包含seq?id?no:1和6-7，或

8、(d)分別包含seq?id?no:8-9和3，或

9、(e)分別包含seq?id?no:10-11和3，或

10、(f)分別包含seq?id?no:12和2-3，或

11、(g)分別包含seq?id?no:13-14和3，或

12、(h)分別包含seq?id?no:15-17，或

13、(i)分別包含seq?id?no:1和18-19，或

14、(j)分別包含seq?id?no:1和20-21，或

15、(k)分別包含seq?id?no:1和22-23。

16、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子包含如下的重鏈可變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3：

17、(a)分別如seq?id?no:1-3所示，或

18、(b)分別如seq?id?no:1和4-5所示，或

19、(c)分別如seq?id?no:1和6-7所示，或

20、(d)分別如seq?id?no:8-9和3所示，或

21、(e)分別如seq?id?no:10-11和3所示，或

22、(f)分別如seq?id?no:12和2-3所示，或

23、(g)分別如seq?id?no:13-14和3所示，或

24、(h)分別如seq?id?no:15-17所示，或

25、(i)分別如seq?id?no:1和18-19所示，或

26、(j)分別如seq?id?no:1和20-21所示，或

27、(k)分別如seq?id?no:1和22-23所示。

28、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子的重鏈可變區(qū)(vh)包含或由選自seq?idno:24-44中任一項(xiàng)的氨基酸序列組成。

29、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子的重鏈可變區(qū)由選自seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)的氨基酸序列組成。

30、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子的重鏈可變區(qū)(vh)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)具有至少80％、85％、90％、95％或99％同一性并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列。

31、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子的重鏈可變區(qū)(vh)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)相比具有一處或多處氨基酸的添加、缺失和/或取代并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列。

32、在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述一處或多處氨基酸的添加、缺失和/或取代(例如，保守性取代)不超過(guò)五處，優(yōu)選地不超過(guò)三處。

33、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子為抗體，例如，但不限于，駱駝源抗體、人源化抗體或親和力成熟的抗體。

34、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子與另一分子融合，所述另一分子是例如免疫球蛋白(例如igg)的fc結(jié)構(gòu)域、抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、抗體-藥物偶聯(lián)物、抗體樣分子、抗體樣分子的抗原結(jié)合片段或熒光蛋白。

35、在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述cldn6結(jié)合分子與人igg(如人igg1或人igg4)的fc結(jié)構(gòu)域融合。

36、在一些方面，所述cldn6結(jié)合分子為單結(jié)構(gòu)域抗體，其包含如上文定義的重鏈可變區(qū)。因此，本發(fā)明還提供分離的納米抗體形式的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體。

37、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合cldn6。

38、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)(vh)，所述重鏈可變區(qū)包含如下的cdr1、cdr2和cdr3：

39、(a)分別包含seq?id?no:1-3，或

40、(b)分別包含seq?id?no:1和4-5，或

41、(c)分別包含seq?id?no:1和6-7，或

42、(d)分別包含seq?id?no:8-9和3，或

43、(e)分別包含seq?id?no:10-11和3，或

44、(f)分別包含seq?id?no:12和2-3，或

45、(g)分別包含seq?id?no:13-14和3，或

46、(h)分別包含seq?id?no:15-17，或

47、(i)分別包含seq?id?no:1和18-19，或

48、(j)分別包含seq?id?no:1和20-21，或

49、(k)分別包含seq?id?no:1和22-23。

50、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)(vh)，所述重鏈可變區(qū)包含如下的cdr1、cdr2和cdr3：

51、(a)分別如seq?id?no:1-3所示，或

52、(b)分別如seq?id?no:1和4-5所示，或

53、(c)分別如seq?id?no:1和6-7所示，或

54、(d)分別如seq?id?no:8-9和3所示，或

55、(e)分別如seq?id?no:10-11和3所示，或

56、(f)分別如seq?id?no:12和2-3所示，或

57、(g)分別如seq?id?no:13-14和3所示，或

58、(h)分別如seq?id?no:15-17所示，或

59、(i)分別如seq?id?no:1和18-19所示，或

60、(j)分別如seq?id?no:1和20-21所示，或

61、(k)分別如seq?id?no:1和22-23所示。

62、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)(vh)，所述重鏈可變區(qū)包含選自seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)的氨基酸序列。

63、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)(vh)，所述重鏈可變區(qū)由選自seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)的氨基酸序列組成。

64、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈可變區(qū)(vh)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)具有至少80％、85％、90％、95％或99％同一性并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列。

65、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈可變區(qū)(vh)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)相比具有一處或多處氨基酸的添加、缺失和/或取代并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列。

66、在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述一處或多處氨基酸的添加、缺失和/或取代(例如，保守性取代)不超過(guò)五處，優(yōu)選地不超過(guò)三處。

67、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體為駱駝源抗體、人源化抗體或親和力成熟的抗體。

68、在一些實(shí)施方案中，所述cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段與另一分子融合，所述另一分子是例如免疫球蛋白(例如igg)的fc結(jié)構(gòu)域、抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、藥物分子、抗體樣分子、抗體樣分子的抗原結(jié)合片段或熒光蛋白。

69、在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與人igg(如人igg1或人igg4)的fc結(jié)構(gòu)域融合。

70、在一些方面，本發(fā)明涉及分離的核酸分子，其包含編碼如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子的核苷酸序列或包含編碼如本文所公開(kāi)的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段的核苷酸序列。

71、在一些方面，本發(fā)明涉及包含編碼如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子的核苷酸序列的表達(dá)載體或包含編碼如本文所公開(kāi)的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸分子的表達(dá)載體。

72、在一些方面，本發(fā)明涉及包含如本文所公開(kāi)的核酸分子或表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。

73、在一些實(shí)施方案中，所述宿主細(xì)胞為細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

74、在另一些方面，本發(fā)明涉及抗體藥物綴合物(adc)組合物，其包含本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子或本文所公開(kāi)的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段與藥物分子的綴合物。

75、在一些實(shí)施方案中，所述藥物分子可以為細(xì)胞毒性劑，例如化療劑、免疫治療劑、抗病毒劑或抗微生物劑。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物分子可以選自，但不限于：微管蛋白抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑或dna結(jié)合劑。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物分子可以選自mmae(單甲基奧利斯他汀e(monomethyl?auristatin?e))、mmad(單甲基奧利斯他汀d)或mmaf(單甲基奧利斯他汀f)。

76、在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的cldn6結(jié)合分子或本發(fā)明所述的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段與藥物分子與適當(dāng)?shù)乃幬锓肿涌梢园凑毡绢I(lǐng)域常用的抗體-藥物綴合方法制成抗體藥物綴合物(adc)混合物。具體而言，抗體中的二硫鍵被還原劑(例如tcep)還原成游離巰基，藥物分子可通過(guò)與這些游離巰基直接形成二硫鍵或通過(guò)接頭與這些游離巰基形成二硫鍵而被偶聯(lián)到抗體上，從而生成抗體藥物綴合物(adc)。并且，由于包含重鏈和輕鏈的抗體通常含有4個(gè)鏈間二硫鍵，因此理論上一個(gè)抗體分子可以偶聯(lián)0、2、4、6或8個(gè)藥物分子，所生成的抗體藥物綴合物(adc)通常為具有這些不同偶聯(lián)數(shù)(dar)的綴合物分子的混合物(在本文中也稱為“抗體藥物綴合物(adc)組合物”)。關(guān)于制備抗體藥物綴合物時(shí)所用的接頭，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠根據(jù)需要綴合的藥物分子進(jìn)行適當(dāng)選擇，通常藥物可以通過(guò)胺偶聯(lián)法與接頭形成藥物-接頭復(fù)合物，然后該藥物-接頭復(fù)合物再與經(jīng)還原的抗體分子偶聯(lián)，所用的接頭中通常包含能夠與抗體偶聯(lián)的反應(yīng)性基團(tuán)，所述反應(yīng)性基團(tuán)例如是馬來(lái)酰亞胺、機(jī)溴化物、碘化物等。

77、在一些方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子或如本文所公開(kāi)的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，以及藥學(xué)上可接受的載體；或者包含如本文所公開(kāi)的抗體藥物綴合物(adc)組合物，以及藥學(xué)上可接受的載體。

78、在一些方面，本發(fā)明涉及用于制備cldn6結(jié)合分子的方法，其包括在宿主細(xì)胞中表達(dá)cldn6結(jié)合分子并從宿主細(xì)胞分離所述cldn6結(jié)合分子。

79、在一些方面，本發(fā)明涉及用于制備cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其包括在宿主細(xì)胞中表達(dá)cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段并從宿主細(xì)胞分離抗體或抗原結(jié)合片段。

80、在一些實(shí)施方案中，所述受試者為患有與cldn6相關(guān)的疾病的人或哺乳動(dòng)物。具體地，所述受試者可能患有下述疾病，但不限于此：卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、生殖細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、肝癌、粘液纖維肉瘤、子宮頸癌等。

81、在一些方面，本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防與cldn6相關(guān)的疾病的方法，其中包括向患有所述與cldn6相關(guān)的疾病的患者或有患有所述與cldn6相關(guān)的疾病的傾向的受試者施用有效量的如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子、或施用如本文所公開(kāi)的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段、或施用如本文所公開(kāi)的抗體藥物綴合物(adc)組合物、或施用有效量的包含如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子、cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段或抗體藥物綴合物(adc)組合物的藥物組合物。

82、在一些方面，本發(fā)明涉及治療可以通過(guò)消除、抑制或降低cldn6活性而被改善、減緩、抑制或預(yù)防的任何疾病或病癥的方法。

83、在另一些方面，本發(fā)明的方法還涉及通過(guò)聯(lián)合療法治療或預(yù)防腫瘤的方法，所述方法包括向受試者施用有效量的本文所述的cldn6結(jié)合分子、cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段和一種或多種其它藥物。

84、在一些實(shí)施方案中，本文公開(kāi)的方法還包括向受試者聯(lián)合施用有效量的第二藥物，其中本文公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子或cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段是第一藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，第二藥物是用于治療相關(guān)疾病的化療劑、放療劑或者生物大分子藥物。在一個(gè)實(shí)施方案中，該生物大分子藥物例如是通過(guò)t細(xì)胞識(shí)別攻擊腫瘤細(xì)胞的各種單克隆抗體藥，例如利妥昔單抗、西妥昔單抗與曲妥珠單抗。如本文所用的表述“第二藥物”并不意味著它是指第一藥物之外的唯一藥物。因此，第二藥物不必是一種藥物，而可以是構(gòu)成或包含多于一種這類藥物。

85、在一些實(shí)施方案中，受試者或個(gè)體是哺乳動(dòng)物，例如，人和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物，例如小鼠或大鼠、猴等，優(yōu)選地是人。

86、在一些方面，本發(fā)明涉及如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子在制備用于治療或預(yù)防與cldn6相關(guān)的疾病的藥物中的用途。

87、在一些方面，本發(fā)明涉及如本文所公開(kāi)的cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段在制備用于治療或預(yù)防與cldn6相關(guān)的疾病的藥物中的用途。

88、在一些方面，本發(fā)明涉及如本文所公開(kāi)的抗體藥物綴合物(adc)組合物在制備用于治療或預(yù)防與cldn6相關(guān)的疾病的藥物中的用途。

89、在一些實(shí)施方案中，所述與cldn6相關(guān)的疾病選自，但不限于卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、生殖細(xì)胞癌、nsclc、肝癌、粘液纖維肉瘤、非小細(xì)胞肺癌、子宮頸癌等。

90、在一些方面，本發(fā)明涉及使用如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子、cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段、或抗體藥物綴合物(adc)組合物的試劑盒或裝置和相關(guān)方法，以及如本文所公開(kāi)的藥物組合物，其可用于治療與cldn6相關(guān)的疾病，例如，癌癥。為此，本發(fā)明優(yōu)選提供可用于治療此類病癥的制品，其包含含有如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子、cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段、抗體藥物綴合物(adc)組合物的容器，以及用于使用如本文所公開(kāi)的cldn6結(jié)合分子、cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段、抗體藥物綴合物(adc)組合物來(lái)治療、改善或預(yù)防與cldn6相關(guān)的疾病或其進(jìn)展或復(fù)發(fā)的使用說(shuō)明。

91、本發(fā)明還涵蓋本文所述的任何實(shí)施方案的任意組合。本文所述的任何實(shí)施方案或其任何組合適用于本文所述的發(fā)明的任何和所有cldn6結(jié)合分子、cldn6單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段、方法和用途。

92、綜上所述，本發(fā)明涉及以下實(shí)施方案：

93、1.一種分離的cldn6結(jié)合分子，其包含重鏈可變區(qū)(vh)，所述重鏈可變區(qū)包含如下的重鏈可變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3：

94、(a)分別包含seq?id?no:1-3，或

95、(b)分別包含seq?id?no:1和4-5，或

96、(c)分別包含seq?id?no:1和6-7，或

97、(d)分別包含seq?id?no:8-9和3，或

98、(e)分別包含seq?id?no:10-11和3，或

99、(f)分別包含seq?id?no:12和2-3，或

100、(g)分別包含seq?id?no:13-14和3，或

101、(h)分別包含seq?id?no:15-17，或

102、(i)分別包含seq?id?no:1和18-19，或

103、(j)分別包含seq?id?no:1和20-21，或

104、(k)分別包含seq?id?no:1和22-23。

105、2.根據(jù)實(shí)施方案1所述的cldn6結(jié)合分子，其中所述cldn6結(jié)合分子包含如下的重鏈可變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3：

106、(a)分別如seq?id?no:1-3所示，或

107、(b)分別如seq?id?no:1和4-5所示，或

108、(c)分別如seq?id?no:1和6-7所示，或

109、(d)分別如seq?id?no:8-9和3所示，或

110、(e)分別如seq?id?no:10-11和3所示，或

111、(f)分別如seq?id?no:12和2-3所示，或

112、(g)分別如seq?id?no:13-14和3所示，或

113、(h)分別如seq?id?no:15-17所示，或

114、(i)分別如seq?id?no:1和18-19所示，或

115、(j)分別如seq?id?no:1和20-21所示，或

116、(k)分別如seq?id?no:1和22-23所示。

117、3.根據(jù)實(shí)施方案1所述的cldn6結(jié)合分子，其中所述重鏈可變區(qū)包含或由選自seqid?no:24-44中任一項(xiàng)的氨基酸序列組成，或

118、所述重鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)具有至少80％、85％、90％、95％或99％同一性并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列，或

119、所述重鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)相比具有一處或多處氨基酸的添加、缺失和/或取代并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列。

120、4.根據(jù)實(shí)施方案3所述的cldn6結(jié)合分子，其中一處或多處氨基酸的添加、缺失和/或取代(例如，保守性取代)不超過(guò)五處，優(yōu)選地不超過(guò)三處。

121、5.根據(jù)實(shí)施方案1所述的cldn6結(jié)合分子，其中所述cldn6結(jié)合分子為駱駝源抗體、人源化抗體或親和力成熟的抗體。

122、6.根據(jù)實(shí)施方案1-5中任一項(xiàng)所述的cldn6結(jié)合分子，其中所述cldn6結(jié)合分子與另一分子融合，所述另一分子選自免疫球蛋白(例如igg)的fc結(jié)構(gòu)域、抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、藥物分子、抗體樣分子、抗體樣分子的抗原結(jié)合片段或熒光蛋白。

123、7.根據(jù)實(shí)施方案6所述的cldn6結(jié)合分子，其中所述cldn6結(jié)合分子與人igg(如人igg1或人igg4)的fc結(jié)構(gòu)域融合。

124、8.一種分離的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合cldn6，所述分離的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)(vh)，所述重鏈可變區(qū)包含如下的cdr1、cdr2和cdr3：

125、(a)分別包含seq?id?no:1-3，或

126、(b)分別包含seq?id?no:1和4-5，或

127、(c)分別包含seq?id?no:1和6-7，或

128、(d)分別包含seq?id?no:8-9和3，或

129、(e)分別包含seq?id?no:10-11和3，或

130、(f)分別包含seq?id?no:12和2-3，或

131、(g)分別包含seq?id?no:13-14和3，或

132、(h)分別包含seq?id?no:15-17，或

133、(i)分別包含seq?id?no:1和18-19，或

134、(j)分別包含seq?id?no:1和20-21，或

135、(k)分別包含seq?id?no:1和22-23。

136、9.根據(jù)實(shí)施方案8所述的分離的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含如下的cdr1、cdr2和cdr3：

137、(a)分別如seq?id?no:1-3所示，或

138、(b)分別如seq?id?no:1和4-5所示，或

139、(c)分別如seq?id?no:1和6-7所示，或

140、(d)分別如seq?id?no:8-9和3所示，或

141、(e)分別如seq?id?no:10-11和3所示，或

142、(f)分別如seq?id?no:12和2-3所示，或

143、(g)分別如seq?id?no:13-14和3所示，或

144、(h)分別如seq?id?no:15-17所示，或

145、(i)分別如seq?id?no:1和18-19所示，或

146、(j)分別如seq?id?no:1和20-21所示，或

147、(k)分別如seq?id?no:1和22-23所示。

148、10.根據(jù)實(shí)施方案8所述的分離的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含或由選自seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)的氨基酸序列組成，或

149、所述重鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)具有至少80％、85％、90％、95％或99％同一性并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列，或

150、所述重鏈可變區(qū)包含與seq?id?no:24-44中任一項(xiàng)相比具有一處或多處氨基酸的添加、缺失和/或取代并且保留特異性結(jié)合cldn6的能力的氨基酸序列。

151、11.根據(jù)實(shí)施方案8所述的分離的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述分離的抗體為駱駝源抗體、人源化抗體或親和力成熟的抗體。

152、12.根據(jù)實(shí)施方案8-11中任一項(xiàng)所述的分離的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與另一分子融合，所述另一分子選自免疫球蛋白(例如igg)的fc結(jié)構(gòu)域、抗體、抗體的抗原結(jié)合片段、藥物分子、抗體樣分子、抗體樣分子的抗原結(jié)合片段或熒光蛋白。

153、13.根據(jù)實(shí)施方案12所述的分離的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段與人igg(如人igg1或人igg4)的fc結(jié)構(gòu)域融合。

154、14.一種分離的核酸分子，其包含編碼實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述的分離的cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段的核苷酸序列。

155、15.一種載體，其包含實(shí)施方案14所述的核酸分子。

156、16.一種宿主細(xì)胞，其包含實(shí)施方案14所述的核酸分子或?qū)嵤┓桨?5所述的載體。

157、17.一種抗體藥物綴合物(adc)組合物，其包含實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述的分離的cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段與藥物分子的綴合物。

158、18.根據(jù)實(shí)施方案17所述的抗體藥物綴合物(adc)組合物，其中所述藥物分子為細(xì)胞毒性劑，例如化療劑、免疫治療劑、抗病毒劑或抗微生物劑，優(yōu)選地選自微管蛋白抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑或dna結(jié)合劑，更優(yōu)選地選自mmae(單甲基奧利斯他汀e(monomethylauristatin?e))、mmad(單甲基奧利斯他汀d)或mmaf(單甲基奧利斯他汀f)。

159、19.一種藥物組合物，其包含至少一種實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述的cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段，以及藥學(xué)上可接受的載體；或包含實(shí)施方案17或18所述的抗體藥物綴合物組合物以及藥學(xué)上可接受的載體。

160、20.一種制備實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其包括以下步驟：

161、-在實(shí)施方案16的宿主細(xì)胞中表達(dá)實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述的cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段；和

162、-從所述宿主細(xì)胞分離所述cldn6結(jié)合分子或單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段。

163、21.實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述的cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段或?qū)嵤┓桨?7或18所述的抗體藥物綴合物(adc)組合物或?qū)嵤┓桨?9所述的藥物組合物在制備用于預(yù)防或治療受試者中與cldn6相關(guān)的疾病的藥物中的用途。

164、22.根據(jù)實(shí)施方案21所述的用途，其中所述受試者為人或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物，優(yōu)選為人。

165、23.根據(jù)實(shí)施方案21所述的用途，其中所述與cldn6相關(guān)的疾病選自卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、生殖細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、肝癌、粘液纖維肉瘤或子宮頸癌。

166、24.一種用于預(yù)防或治療受試者中與cldn6相關(guān)的疾病的試劑盒，其包含容器，所述容器包含至少一種實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述的cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段、實(shí)施方案17或18所述的抗體藥物綴合物(adc)組合物或?qū)嵤┓桨?9所述的藥物組合物，和使用說(shuō)明。

167、25.一種預(yù)防或治療受試者中與cldn6相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括：向所述受試者施用治療有效量的實(shí)施方案1-7中任一項(xiàng)所述的cldn6結(jié)合分子或?qū)嵤┓桨?-13中任一項(xiàng)所述的單結(jié)構(gòu)域抗體或其抗原結(jié)合片段、實(shí)施方案17或18所述的抗體藥物綴合物(adc)組合物或?qū)嵤┓桨?9所述的藥物組合物。