本發(fā)明屬于分子生物學(xué)，具體涉及一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶編碼基因及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)又稱為三磷酸吡啶核苷酸，參與細(xì)胞氧化還原代謝及其它一系列生物化學(xué)反應(yīng)，在生物氧化過程中作為氫傳遞體，是生物體內(nèi)不可缺少的重要輔酶。研究表明，nadp在促進(jìn)物質(zhì)代謝、能量代謝、抵抗細(xì)胞衰老和抗氧化方面發(fā)揮了重要的作用。

2、目前nadp的合成方法可以分為化學(xué)法、生物發(fā)酵法和生物酶法。由于化學(xué)法存在工藝路線冗長(zhǎng)，反應(yīng)條件苛刻，污染環(huán)境，收率低，成本高等問題，該工藝路線并不適用于工業(yè)生產(chǎn)。傳統(tǒng)生物發(fā)酵法通過對(duì)酵母或其它微生物的分離提取得到nadp，該方法也存在成本高，產(chǎn)量低的問題。酶法是利用nad激酶(nadk)催化磷酸基從atp轉(zhuǎn)移到nad生成nadp，然而現(xiàn)有nad激酶普遍存在轉(zhuǎn)化率低的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶編碼基因及其應(yīng)用，提高nad轉(zhuǎn)化nadp的轉(zhuǎn)化效率。

2、本發(fā)明提供了一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶編碼基因，所述nad激酶編碼基因包括如seq?id?no:1所示的核苷酸序列。

3、本發(fā)明還提供了一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶的生物材料，所述生物材料包括重組載體和/或重組菌；

4、所述重組載體包括基礎(chǔ)載體和插入所述基礎(chǔ)載體的nad激酶編碼基因；

5、所述重組菌包括基礎(chǔ)菌株和導(dǎo)入所述基礎(chǔ)菌株的所述nad激酶編碼基因或所述重組載體；

6、所述nad激酶編碼基因?yàn)樯鲜黾夹g(shù)方案所述的nad激酶編碼基因。

7、優(yōu)選的，所述基礎(chǔ)載體包括pet28a；

8、所述基礎(chǔ)菌株包括大腸桿菌bl21(de3)。

9、本發(fā)明還提供了一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶的表達(dá)方法，其特征在于，對(duì)含有上述技術(shù)方案所述nad激酶編碼基因的菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到nad激酶。

10、優(yōu)選的，所述誘導(dǎo)表達(dá)利用異丙基-β-d-硫代半乳糖苷。

11、優(yōu)選的，所述異丙基-β-d-硫代半乳糖苷的終濃度為0.2～1.3mm。

12、優(yōu)選的，所述誘導(dǎo)表達(dá)后，還包括：對(duì)所述誘導(dǎo)表達(dá)的產(chǎn)物進(jìn)行純化。

13、上述技術(shù)方案所述nad激酶編碼基因或所述生物材料或所述表達(dá)方法在提高nad轉(zhuǎn)化nadp的轉(zhuǎn)化效率中的應(yīng)用。

14、本發(fā)明還提供了一種提高nad轉(zhuǎn)化nadp的轉(zhuǎn)化效率的方法，在nad轉(zhuǎn)化nadp的體系中加入上述技術(shù)方案所述nad激酶編碼基因或所述生物材料或所述表達(dá)方法得到的nad激酶后進(jìn)行反應(yīng)。

15、優(yōu)選的，所述體系中nad激酶的濃度為0.3mg/ml；所述反應(yīng)的溫度為30℃，時(shí)間為6～24h。

16、有益效果：

17、本發(fā)明提供了一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶編碼基因，所述nad激酶編碼基因包括如seq?id?no:1所示的核苷酸序列。本發(fā)明構(gòu)建nad激酶的基因文庫，篩選到一個(gè)nad激酶編碼基因(nadk基因)，通過表達(dá)所述nad激酶編碼基因，得到的nad激酶能夠提高nad轉(zhuǎn)化nadp的轉(zhuǎn)化效率。實(shí)施例結(jié)果表明，利用本發(fā)明nad激酶編碼基因編碼的nad激酶能使nad轉(zhuǎn)化nadp的轉(zhuǎn)化效率提高到97.41％，顯著高于其他編碼基因編碼的nad激酶。

技術(shù)特征：

1.一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶編碼基因，其特征在于，所述nad激酶編碼基因包括如seqid?no:1所示的核苷酸序列。

2.一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括重組載體和/或重組菌；

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述生物材料，其特征在于，所述基礎(chǔ)載體包括pet28a；

4.一種高轉(zhuǎn)化率的nad激酶的表達(dá)方法，其特征在于，對(duì)含有權(quán)利要求1所述nad激酶編碼基因的菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到nad激酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述表達(dá)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)表達(dá)利用異丙基-β-d-硫代半乳糖苷。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述表達(dá)方法，其特征在于，所述異丙基-β-d-硫代半乳糖苷的終濃度為0.2～1.3mm。

7.根據(jù)權(quán)利要求4～6任一項(xiàng)所述的表達(dá)方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)表達(dá)后，還包括：對(duì)所述誘導(dǎo)表達(dá)的產(chǎn)物進(jìn)行純化。

8.權(quán)利要求1所述nad激酶編碼基因或權(quán)利要求2或3所述生物材料或權(quán)利要求4～7任一項(xiàng)所述表達(dá)方法在提高nad轉(zhuǎn)化nadp的轉(zhuǎn)化效率中的應(yīng)用。

9.一種提高nad轉(zhuǎn)化nadp的轉(zhuǎn)化效率的方法，其特征在于，在nad轉(zhuǎn)化nadp的體系中加入權(quán)利要求1所述nad激酶編碼基因或權(quán)利要求2或3所述生物材料或權(quán)利要求4～7任一項(xiàng)所述表達(dá)方法得到的nad激酶后進(jìn)行反應(yīng)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述體系中nad激酶的濃度為0.3mg/ml；所述反應(yīng)的溫度為30℃，時(shí)間為6～24h。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高轉(zhuǎn)化率的NAD激酶編碼基因及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種高轉(zhuǎn)化率的NAD激酶編碼基因，所述NAD激酶編碼基因包括如SEQ?ID?NO:1所示的核苷酸序列。本發(fā)明構(gòu)建NAD激酶的基因文庫，篩選到一個(gè)NAD激酶編碼基因(NADK基因)，通過表達(dá)所述NAD激酶編碼基因，得到的NAD激酶能夠提高NAD轉(zhuǎn)化NADP的轉(zhuǎn)化效率。實(shí)施例結(jié)果表明，利用本發(fā)明NAD激酶編碼基因編碼的NAD激酶能使NAD轉(zhuǎn)化NADP的轉(zhuǎn)化效率提高到97.41％，顯著高于其他編碼基因編碼的NAD激酶。

技術(shù)研發(fā)人員：孫瑜,宋清華,陳輝,趙旭
受保護(hù)的技術(shù)使用者：深圳津合生物有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15