本發(fā)明屬于生物，具體涉及亞洲玉米螟ofjhbp基因及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、亞洲玉米螟（ostrinia?furnacalis）是我國東北地區(qū)玉米作物的主要害蟲之一，目前已被增列為國家一類農(nóng)作物害蟲。該害蟲分布較為廣泛，對玉米危害嚴(yán)重，且具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性。其幼蟲主要啃食玉米植株地上各部位，導(dǎo)致玉米產(chǎn)量降低、品質(zhì)下降。亞洲玉米螟5齡幼蟲通常需經(jīng)過滯育這一生物學(xué)過程，并利用滯育躲避不利的環(huán)境因素，以確保個體存活。因此，滯育這一階段對于其種群數(shù)量的控制至關(guān)重要。目前，亞洲玉米螟的防治主要依賴化學(xué)防治方法，但傳統(tǒng)化學(xué)防治帶來環(huán)境污染和害蟲抗藥性問題。因此，迫切需要新型綠色核酸農(nóng)藥的研發(fā)。

2、rna干擾(rnai)是指通過導(dǎo)入與內(nèi)源性mrna編碼區(qū)同源的dsrna時，該mrna發(fā)生降解而導(dǎo)致目標(biāo)基因表達(dá)沉默的現(xiàn)象，沉默目標(biāo)基因使其正常生物功能減弱或者缺失，以使昆蟲死亡?；趓nai進(jìn)行害蟲防治的前提是篩選靶標(biāo)序列獲得對昆蟲具有高致死作用的dsrna。

3、保幼激素結(jié)合蛋白jhbp（juvenile?hormone?binding?protein）是一類與保幼激素（juvenile?hormone，jh）結(jié)合的蛋白質(zhì)，jhbp與保幼激素在昆蟲體內(nèi)發(fā)揮著保持幼蟲特征、抑制昆蟲化蛹、促進(jìn)生殖發(fā)育的作用。研究表明，jhbp基因在昆蟲生長發(fā)育的不同階段均發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用，甚至對攝食、生殖交配、抗藥性及免疫應(yīng)答方面也有影響。

4、因此，如何利用rnai技術(shù)，特異性地沉默jhbp基因，干擾亞洲玉米螟5齡幼蟲變態(tài)發(fā)育，導(dǎo)致其死亡，從而達(dá)到防治害蟲的目的，是目前亟需研究的課題。現(xiàn)有技術(shù)中亟需一種亞洲玉米螟保幼激素結(jié)合蛋白jhbp基因及其在亞洲玉米螟防治中的應(yīng)用，以解決化學(xué)殺蟲劑帶來的環(huán)境污染和害蟲抗藥性問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種亞洲玉米螟ofjhbp基因及其應(yīng)用。

2、本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

3、一種亞洲玉米螟ofjhbp基因，核苷酸序列如seq?id?no?:1所示。設(shè)計相應(yīng)的簡并引物后，通過pcr擴(kuò)增獲得其保守區(qū)，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測其片段長度為764?bp，命名為ofjhbp，開放閱讀框?yàn)?26?bp，編碼241個氨基酸。

4、通過pcr擴(kuò)增合成該亞洲玉米螟ofjhbp基因的rna干擾序列片段，核苷酸序列如seq?id?no?:2所示。合成rna干擾序列片段所用的引物的核苷酸序列如下：

5、ofjhbp-rnaif：5’-taatacgactcactatagggttctaggcaaaacttgcgct-3’，?seq?idno:5；

6、ofjhbp-rnair：5’-taatacgactcactatagggtccttgctaacgtgtctggg?-3’，?seq?idno:6。

7、進(jìn)一步利用試劑盒，采用亞洲玉米螟ofjhbp基因的rna干擾序列片段合成dsrna。

8、該dsrna在亞洲玉米螟防治中的應(yīng)用，dsrna特異性地沉默jhbp基因mrna表達(dá)，干擾亞洲玉米螟5齡幼蟲的變態(tài)發(fā)育，使亞洲玉米螟5齡幼蟲解除滯育，在脫皮及變?yōu)橛己笪茨苷ＩL發(fā)育導(dǎo)致死亡。

9、本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明獲得了亞洲玉米螟ofjhbp基因、亞洲玉米螟ofjhbp基因的rna干擾序列片段及由亞洲玉米螟ofjhbp基因rna干擾序列片段合成的dsrna，提供了將該dsrna用于亞洲玉米螟防治的生物學(xué)防治方法，通過該dsrna特異性地沉默jhbp基因mrna表達(dá)，干擾亞洲玉米螟5齡幼蟲的變態(tài)發(fā)育，導(dǎo)致其死亡。本發(fā)明的應(yīng)用可有效減少化學(xué)殺蟲劑的使用，解決環(huán)境污染和害蟲抗藥性問題。

技術(shù)特征：

1.亞洲玉米螟ofjhbp基因的應(yīng)用，其特征在于：采用亞洲玉米螟ofjhbp基因，核苷酸序列如seq?id?no?:1所示；通過pcr擴(kuò)增合成該亞洲玉米螟ofjhbp基因的rna干擾序列片段，核苷酸序列如seq?id?no?:2所示；采用亞洲玉米螟ofjhbp基因的rna干擾序列片段合成dsrna，通過該dsrna特異性地沉默jhbp基因mrna表達(dá)，干擾亞洲玉米螟5齡幼蟲的變態(tài)發(fā)育，使亞洲玉米螟5齡幼蟲解除滯育，在脫皮及變?yōu)橛己笪茨苷ＩL發(fā)育導(dǎo)致死亡。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的亞洲玉米螟ofjhbp基因的應(yīng)用，其特征在于：合成所述rna干擾序列片段所用的引物的核苷酸序列如下：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了亞洲玉米螟OfJHBP基因及其應(yīng)用。亞洲玉米螟OfJHBP基因的應(yīng)用，采用亞洲玉米螟OfJHBP基因，核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；通過PCR擴(kuò)增合成該亞洲玉米螟OfJHBP基因的RNA干擾序列片段，核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；采用亞洲玉米螟OfJHBP基因的RNA干擾序列片段合成dsRNA，通過該dsRNA特異性地沉默JHBP基因mRNA表達(dá)，干擾亞洲玉米螟5齡幼蟲的變態(tài)發(fā)育，使亞洲玉米螟5齡幼蟲解除滯育，在脫皮及變?yōu)橛己笪茨苷ＩL發(fā)育導(dǎo)致死亡。本發(fā)明的應(yīng)用可有效減少化學(xué)殺蟲劑的使用，解決環(huán)境污染和害蟲抗藥性問題。

技術(shù)研發(fā)人員：馬紅悅,劉葉,曹勝雁,高書晶,閆鋒
受保護(hù)的技術(shù)使用者：內(nèi)蒙古民族大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15