本發(fā)明涉及農(nóng)產(chǎn)品轉(zhuǎn)基因檢測，特別涉及一種準(zhǔn)確檢測大豆及其加工品種23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列成分落。

背景技術(shù)：

1、大豆作為重要的油料作物和植物性蛋白來源，也是高蛋白糧飼兼用作物和重要的工業(yè)原料,是關(guān)系國計(jì)民生的重要農(nóng)作物,在國際農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易中占有重要地位。自1996年中國首次成為大豆凈進(jìn)口國起,大豆進(jìn)口量持續(xù)攀升。近年來，開始利用先進(jìn)的育種技術(shù)培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)大豆新品種，大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化有了顯著進(jìn)展，其風(fēng)險(xiǎn)管理亟待跟上。需要進(jìn)一步強(qiáng)化農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物技術(shù)安全管理的法律法規(guī)體系、技術(shù)規(guī)程體系和政府的行政管理體系建設(shè)，加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因大豆科研、生產(chǎn)、流通、加工等全產(chǎn)業(yè)鏈的監(jiān)管體系。同時(shí)，在推廣轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品時(shí)，要保護(hù)消費(fèi)者的知情權(quán)與選擇權(quán)。

2、基于常規(guī)pcr的檢測技術(shù)單個(gè)檢測靶標(biāo)有限，已經(jīng)不能滿足大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化的進(jìn)程中所所面臨的檢測靶標(biāo)增多的要求。多重聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase?chainreaction，pcr）能夠在同一反應(yīng)管中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)核酸靶標(biāo)擴(kuò)增與檢測的技術(shù)，具有高通量、低成本等特點(diǎn)，能夠滿足對樣品的大規(guī)模篩查、定量等檢測需求。因此，如何利用多重pcr擴(kuò)增方法進(jìn)行大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的檢測工作，是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因檢測手段檢測靶標(biāo)通量低，不能滿足大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化監(jiān)管需求的現(xiàn)狀，本發(fā)明的主要目的是建立一種能夠同時(shí)檢測已獲得我國農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全證書（生產(chǎn)應(yīng)用）的23種常見大豆轉(zhuǎn)化體和旋特異性序列成分的檢測引物組，滿足準(zhǔn)確，高通量的大豆及其衍生品的檢測需求，大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化過程中新品種上市前的生物安全評價(jià)及上市后的市場監(jiān)管提供有力的技術(shù)支撐。

2、本發(fā)明的目的在于提供一種用于大豆轉(zhuǎn)化體的樣品高通量、多靶標(biāo)檢測方法，已解決大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程中現(xiàn)有檢測方法樣品和檢測靶標(biāo)通量低的問題。

3、本發(fā)明的目的在于提供上述用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列位點(diǎn)的引物組在高通量、多靶標(biāo)檢測大豆生物育種產(chǎn)品種的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示上述引物組特異性強(qiáng)、且檢出限能夠達(dá)到0.1%。

4、本發(fā)明的目的在于提供一種檢測大豆轉(zhuǎn)化體其制品的核酸特異性序列位點(diǎn)的產(chǎn)品。

5、本發(fā)明提供了一種用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體特異性序列位點(diǎn)的引物基因組，所述的檢測大豆轉(zhuǎn)化體包括：a5547-127、das-44406-6、cv127、gts40-3-2、das-81419-2、mon87701、mon87708、mon87751、mon87769、a2704-12、mon87705、das-68416-4、mon89788、305423、zh6106、wyn029gma、cal16、dbn9004、dbn8002、ind-00410-5、shzd3201、wyn341gmc和gmb151。

6、本發(fā)明還提供了一種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列位點(diǎn)的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品包括用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸序列位點(diǎn)的試劑和/或設(shè)備，以及上述的引物組。

7、另外，本發(fā)明還提供了一種檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列位點(diǎn)的方法，所述方法包括應(yīng)用上述的引物組對待測樣品基因組中大豆轉(zhuǎn)化體的核酸序列位點(diǎn)進(jìn)行檢測。

8、本發(fā)明實(shí)施例提供的上述技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：

9、本發(fā)明實(shí)施例提供一種準(zhǔn)確的多靶標(biāo)檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列位點(diǎn)的引物組，能夠檢測大豆轉(zhuǎn)化體包括：a5547-127、das-44406-6、cv127、gts40-3-2、das-81419-2、mon87701、mon87708、mon87751、mon87769、a2704-12、mon87705、das-68416-4、mon89788、305423、zh6106、wyn029gma、cal16、dbn9004、dbn8002、ind-00410-5、shzd3201、wyn341gmc和gmb151。檢測結(jié)果覆蓋了23個(gè)大豆轉(zhuǎn)化體，檢測方法能夠保證在單個(gè)檢測樣本中實(shí)現(xiàn)上述23個(gè)靶標(biāo)的檢測，提高了檢測效率，縮短了檢測時(shí)間。

10、本發(fā)明提供的引物經(jīng)過優(yōu)化，擴(kuò)增產(chǎn)物包括23種大豆轉(zhuǎn)化體的核酸特異性序列，通過調(diào)整引物的擴(kuò)增位點(diǎn)，優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，經(jīng)過樣本檢測，確保引物組能夠?qū)?3個(gè)大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列進(jìn)行檢出，并且能夠達(dá)到高通量測序的要求。

11、本發(fā)明提供的用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體多靶標(biāo)、樣品高通量的產(chǎn)品，包括用于開展檢測的試劑和/或設(shè)備及本發(fā)明提供的引物組，該產(chǎn)品能夠?qū)Υ蠖罐D(zhuǎn)化體核酸特異性序列進(jìn)行準(zhǔn)確檢測，檢測靶標(biāo)多，樣品通量高，檢測效率高，操作流程簡便，在大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程中轉(zhuǎn)基因大豆及其加工品的檢測領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用場景。

12、本發(fā)明提供的多靶標(biāo)檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的方法，包括應(yīng)用上述的引物組檢測待測樣品基因組中大豆轉(zhuǎn)化體，具體為：a5547-127、das-44406-6、cv127、gts40-3-2、das-81419-2、mon87701、mon87708、mon87751、mon87769、a2704-12、mon87705、das-68416-4、mon89788、305423、zh6106、wyn029gma、cal16、dbn9004、dbn8002、ind-00410-5、shzd3201、wyn341gmc和gmb151，包括23個(gè)大豆轉(zhuǎn)化體、具有準(zhǔn)確性強(qiáng)、檢測高通量的特點(diǎn)。

13、本發(fā)明首次將多重?cái)U(kuò)增技術(shù)、高通量測序技術(shù)運(yùn)用于多達(dá)23種大豆轉(zhuǎn)化體的多靶標(biāo)、高通量檢測。該發(fā)明將現(xiàn)有的技術(shù)中單個(gè)檢測反應(yīng)孔中單個(gè)靶標(biāo)的檢測提高至23個(gè)，極大的提高了檢測效率；本發(fā)明所包含的大豆轉(zhuǎn)化體靶標(biāo)數(shù)量覆蓋度廣，涵蓋了90%以上的獲得我國審批和獲得我國安全證書的大豆轉(zhuǎn)化體，應(yīng)用范圍廣；本發(fā)明能對大豆轉(zhuǎn)化體及其加工產(chǎn)品進(jìn)行檢測，適用性強(qiáng)，可應(yīng)用于大豆生物育種產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程中大豆品種商品化前的生物安全評價(jià)和上市后的市場監(jiān)管等過程。

14、本發(fā)明更加詳細(xì)的描述如下：

15、23種大豆轉(zhuǎn)化體檢測引物組分、試劑盒及方法：

16、根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，供了一種用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性位點(diǎn)的引物組，所述大豆轉(zhuǎn)化體包括：a5547-127、das-44406-6、cv127、gts40-3-2、das-81419-2、mon87701、mon87708、mon87751、mon87769、a2704-12、mon87705、das-68416-4、mon89788、305423、zh6106、wyn029gma、cal16、dbn9004、dbn8002、ind-00410-5、shzd3201、wyn341gmc和gmb151。

17、本發(fā)明提供的用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性位點(diǎn)的引物組，針對與大豆轉(zhuǎn)化體的核酸特異性序列進(jìn)行設(shè)計(jì)，可對大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)特異性檢測，檢測結(jié)果準(zhǔn)確性強(qiáng)，檢測周期短，檢測成本低，覆蓋度廣，獲得我國生產(chǎn)安全證書的95%大豆轉(zhuǎn)化體材料。此外本發(fā)明設(shè)計(jì)的引物組是經(jīng)過特異性設(shè)計(jì)及優(yōu)化測試所得，所有引物均能夠?qū)z測的靶標(biāo)序列進(jìn)行擴(kuò)增，建庫目標(biāo)條帶大小能夠滿足高通量測序需求。

18、所述的大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性位點(diǎn)的檢測引物組分包含23對多重?cái)U(kuò)增檢測引物對，所述檢測引物對擴(kuò)增的目標(biāo)轉(zhuǎn)化體序列如seq?no.1?～?id?no.23所示，所述檢測引物對的核酸序列分別如seq?no.24?～?id?no.69所示。

19、23對檢測引物擴(kuò)增的核苷酸序列

20、

21、23種大豆轉(zhuǎn)化體特異性序列檢測引物序列

22、 轉(zhuǎn)化體 序列號 序列信息 a5547-127-forward?primer id?no.24 cttccgccattatcgccattcc a5547-127-reverse?primer id?no.25 tcgccgcatacactattctcaga das-44406-6-forward?primer id?no.26 cgcaccctacgattcagtgtata das-44406-6-reverse?primer id?no.27 cggtgagtaatattgtacggctaaga cv127-forward?primer id?no.28 ttggagtttggaggaatgagttgaa cv127-reverse?primer id?no.29 gtagctcggatcgtgtactgtct gts40-3-2-forward?primer id?no.30 cccttcaatttaaccgatgctaatgag gts40-3-2-reverse?primer id?no.31 tgtcggcagaggcatcttcaa das-81419-2-forward?primer id?no.32 ctacagcacttattggtacttgtccta das-81419-2-reverse?primer id?no.33 gcgacttagtgatgagcggaac mon87701-forward?primer id?no.34 tggtgatatgaagatacatgc mon87701-reverse?primer id?no.35 ccgctctagaactagtggat mon87708-forward?primer id?no.36 agagaggtttgcaatttctgagttc mon87708-reverse?primer id?no.37 ctcgtggatgctcgtggataag mon87751-forward?primer id?no.38 agaacaccactaaattgctctttgg mon87751-reverse?primer id?no.39 actactacatccgaactcgtcaa mon87769-forward?primer id?no.40 agttccttgagttggaaagggataac mon87769-reverse?primer id?no.41 tgtcgtttcccgccttcagt a2704-12-forward?primer id?no.42 tctgacgctcagtggaacga a2704-12-reverse?primer id?no.43 ttaactcctttgggatcaaacaagc mon87705-forward?primer id?no.44 cctattagcttcttcattgtggattcc mon87705-reverse?primer id?no.45 ctccatattgaccatcatactcattgc das-68416-4-forward?primer id?no.46 cgtatccgctacttgctcttgtc das-68416-4-reverse?primer id?no.47 cggtgagtaatattgtacggctaaga mon89788-forward?primer id?no.48 aacttgttcctgctccactcttcc mon89788-reverse?primer id?no.49 agattgtcgtttcccgccttca 305423-3-forward?primer id?no.50 aacctctgacacatgcagctc 305423-3-reverse?primer id?no.51 ccatctcacttgttccagttgatatac zh-6106-forward?primer id?no.52 gattcttcgccttctatcggtaacac zh-6106-reverse?primer id?no.53 gctagagcagcttgagcttgga wyn029gma-forward?primer id?no.54 tggttccaccatatgacaaggtt wyn029gma-reverse?primer id?no.55 tgctccaccatgttgacgaag cal16-forward?primer id?no.56 tgtttgtctccttcttccctactctt cal16-reverse?primer id?no.57 gattgtcgtttcccgccttcag dbn9004-forward?primer id?no.58 ttacgctccataaacgtgtgcttt dbn9004-reverse?primer id?no.59 gccgtatccgcaatgtgttattaag dbn8002-forward?primer id?no.60 gtataaggtctttggttggattatc dbn8002-reverse?primer id?no.61 cagattgtcgtttcccgccttc ind-00410-5-forward?primer id?no.62 ggagaggcggtttgcgtattg ind-00410-5-reverse?primer id?no.63 cagaccactgaaatagagagaaagact shzd3201-forward?primer id?no.64 cactcaaagtcactcattattggaacc shzd3201-reverse?primer id?no.65 ctcatgtgttgagcatataagaaaccc wyn341gmc-forward?primer id?no.66 gcggtgtcatctatgttactag wyn341gmc-reverse?primer id?no.67 agactatgaaggagcaatggtt gmb151-forward?primer id?no.68 attcagagtcaaatcaacatggg gmb151-reverse?primer id?no.69 cgagttcccgtagcgatc

23、本發(fā)明所述檢測引物對用于檢測23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列，23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列分別為da5547-127、das-44406-6、cv127、gts40-3-2、das-81419-2、mon87701、mon87708、mon87751、mon87769、a2704-12、mon87705、das-68416-4、mon89788、305423、zh6106、wyn029gma、cal16、dbn9004、dbn8002、ind-00410-5、shzd3201、wyn341gmc和gmb151。所述引物對能夠用于對23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列進(jìn)行擴(kuò)增；23對所述引物對中forward?primer的tm值再49-59?℃之間，gc含量在38.1-65之間，reverse?primer的值再50-58.7之間，gc含量在50-58.7之間。引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物在89-283?bp大小。

24、具體的，本發(fā)明所述的擴(kuò)增序列和引物對是一一對應(yīng)的，對應(yīng)的引物對和延伸引物用于檢測共同的核苷酸位點(diǎn)。例如，第一條擴(kuò)增序列seq?id?no.1對應(yīng)的多重?cái)U(kuò)增引物為seq?id?no.24所示的上游引物和id?no.25下游引物序列，上述擴(kuò)增產(chǎn)出序列、引物對用于檢測同一的核苷酸位點(diǎn)。

25、具體的，多重?cái)U(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過磁珠純化后進(jìn)行高通量測序建庫，將所建高通量測序文庫進(jìn)行高通量測序，將測序結(jié)果與擴(kuò)增序列seq?id?no.1~?seq?id?no.23進(jìn)行比對，判斷待檢測樣本中大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的成分，轉(zhuǎn)化體特性序列reads檢出≥1，則判定陽性。

26、本發(fā)明進(jìn)一步公開了一種準(zhǔn)確檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括所述的特異性核酸序引物組預(yù)混液以及方法。所述引物組預(yù)混液的組分包括所述檢測引物對按照1:1的比例進(jìn)行預(yù)混，再預(yù)混液中，單條引物的終濃度400nm，也可根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶⑺枰飳M(jìn)行混合并選擇適當(dāng)?shù)囊锝K濃度。

27、本發(fā)明更進(jìn)一步公開了檢測大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的試劑盒在用于檢測大豆轉(zhuǎn)化體及其衍生產(chǎn)品方面的應(yīng)用。所述方法包括：

28、（1）分別得到23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列；根據(jù)所述23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列，分別設(shè)計(jì)出引物組（seq?id?no.24～seq?id?no.69），并將引物等比混合，單條引物的終濃度為400?nm；

29、（2）以待檢測樣本的基因組dna為模版，利用上述引物組進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，擴(kuò)增反應(yīng)的加樣體系和pcr程序如下：

30、 reagent volume multiplex?pcr?buffer 10?μl primer?mix?（10?μm） 1?μl multiplex?pcr?enzyme 1?μl template 10-200?ng water,?hplc?grade to?25?μl

31、反應(yīng)程序?yàn)椋?/p>

32、

33、（3）利用磁珠將擴(kuò)增反應(yīng)的產(chǎn)物進(jìn)行純化，加入擴(kuò)增產(chǎn)物0.8倍體積的磁珠，使其與擴(kuò)增產(chǎn)物充分混勻，并靜止5?min，隨后在磁力加上是混合液變澄清，并去除上清；用80%含量的酒精沖洗磁力架2次后將磁力架在室溫下干燥。最后用無酶水（rnase?water）溶解吸附在磁力架上的擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物。

34、（4）將擴(kuò)增產(chǎn)物加上測序的高通量測序識別序列，構(gòu)建測序文庫，擴(kuò)增反應(yīng)的加樣體系和pcr程序如下：

35、 reagent volume pcr?mix 25?μl barcode 5?μl template 7.5?μl water,?hplc?grade to?50?μl

36、反應(yīng)程序?yàn)椋?/p>

37、

38、（5）利用磁珠將建庫產(chǎn)物進(jìn)行純化，操作步驟如（3）所示，純化完成后利用21?μl的無酶水（rnase?water）溶解吸附在磁力架上的高通量建庫反應(yīng)產(chǎn)物。

39、（6）利用qubit?1x?dsdna?hs?assay?kit?對高通量文庫進(jìn)行定量，保證文庫濃度大于10?ng/μl。

40、（7）將高通量建庫產(chǎn)物在高通量測序平臺進(jìn)行測序，并利用引物擴(kuò)增序列seq?idno.1～seq?id?no.23與高通量測序數(shù)據(jù)進(jìn)行比對，判定待檢測樣本中大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列成分，轉(zhuǎn)化體特性序列reads檢出≥1，則判定陽性。

41、本發(fā)明實(shí)施例提供的上述技術(shù)方案與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：

42、本發(fā)明實(shí)施例提供一種準(zhǔn)確的檢測23種大豆轉(zhuǎn)化提核酸特異性序列成分的引物組，根據(jù)23種大豆轉(zhuǎn)化提核酸特異性序列設(shè)計(jì)出23對特異性多重檢測引物，利用23對多重檢測引物組對待檢測樣品的靶序列進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序文庫的建庫，并高通量測序，對高通量測序數(shù)據(jù)與23種大豆轉(zhuǎn)化提核酸特異性序列文庫進(jìn)行比對分析，從而確定待檢測樣品中是都含有23種大豆轉(zhuǎn)化提核酸特異性序列成分，實(shí)現(xiàn)利用多重pcr技術(shù)對樣品中轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行準(zhǔn)確的定性檢測。

43、本發(fā)明更加詳細(xì)的描述如下：

44、23種大豆轉(zhuǎn)化體檢測引物組分、試劑盒及方法：

45、所述的23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列檢測引物組包含23對多重檢測引物對，23對所述檢測引物對的核酸序列分別如seq?no.24～?id?no.69所示。在一些可選的實(shí)施方式中，所示多重檢測引物對用于23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列成分的檢測，23種所述大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列包括的轉(zhuǎn)化體為：da5547-127、das-44406-6、cv127、gts40-3-2、das-81419-2、mon87701、mon87708、mon87751、mon87769、a2704-12、mon87705、das-68416-4、mon89788、305423、zh6106、wyn029gma、cal16、dbn9004、dbn8002、ind-00410-5、shzd3201、wyn341gmc和gmb151。所述引物對能夠用于對23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列進(jìn)行擴(kuò)增；23對所述引物對中forward?primer的tm值再49-59?℃之間，gc含量在38.1-65之間，reverse?primer的值再50-58.7之間，gc含量在50-58.7之間。引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物在89-283?bp大小。

46、23對所述引物對中forward?primer的tm值再49-59?℃之間，gc含量在38.1-65之間，reverse?primer的tm值再50-58.7?℃之間，gc含量在50-58.7之間。引物對的擴(kuò)增產(chǎn)物在89-283?bp大小。具體的，所述多重pcr預(yù)混液的組分包括所述引物組每條按照1:1的比例進(jìn)行預(yù)混，單條引物的終濃度為400?nm，根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行各引物的混合（seq?idno.24～seq?id?no.69）

47、將23種大豆轉(zhuǎn)化體檢測引物組分、試劑盒及方法中包含的10個(gè)大豆轉(zhuǎn)化體（mon87708、wyn029gma、305423、a2704-12、cal16、das-68416-4、cv127、dbn9004、mon87701、mon87705）、不包含的2個(gè)基因編輯大豆材料（ae15-18-1、37ae47-1）及陰性材料（天隆1號）為dna模版，以上述23中引物組的混合引物進(jìn)行多重?cái)U(kuò)增反應(yīng)，用于該檢測方法的特異性測試。檢測結(jié)果如下所示，本發(fā)明涉及的23中大豆轉(zhuǎn)化體的檢測引物組分對測試的10個(gè)陽性大豆的轉(zhuǎn)化體序列具有較強(qiáng)的特異性，且對于兩種基因編輯材料和陰性材料無陽性轉(zhuǎn)化體檢出，本發(fā)明檢測結(jié)果良好，不存在非靶標(biāo)樣本和陰性樣本的非特異性檢出情況。特異性分析結(jié)果如下表所示；

48、

49、引物優(yōu)化：

50、根據(jù)23種大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列設(shè)計(jì)檢測引物組，并開展擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，檢驗(yàn)引物擴(kuò)增效果，擴(kuò)增結(jié)果表明，其中mon87769、das-81419-2、dbn8002和zh6106存在陽性樣本中全部重復(fù)中均無目標(biāo)序列擴(kuò)增。根據(jù)以上問題進(jìn)行優(yōu)化，選擇mon87769、wyn341gmc、mon87751和zh6106大豆轉(zhuǎn)化體核酸特異性序列的另外一端或改變擴(kuò)增引物的位置重新設(shè)計(jì)引物，并進(jìn)行測試，引物優(yōu)化結(jié)果如下表所示：

51、

52、

53、檢出限分析：

54、將2個(gè)含量為1%的大豆轉(zhuǎn)化體標(biāo)準(zhǔn)樣品mon87701和mon87751轉(zhuǎn)化體dna用非轉(zhuǎn)基因大豆品種天隆1號的dna進(jìn)行稀釋，稀釋成0.5%?和0.1%?含量的mon87701和mon87751測試樣本，以測試樣本為模版，以上述23中引物組的混合引物進(jìn)行多重?cái)U(kuò)增反應(yīng)，用于該檢測方法的檢出限。檢測結(jié)果如下所示，通過0.1%?mon87701和0.1%?mon87751兩個(gè)位點(diǎn)的測試結(jié)果表明，本發(fā)明引物組檢出限能夠達(dá)到0.1%的大豆轉(zhuǎn)化體含量。

55、