本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體為鐵皮石斛定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、操作規(guī)程與制造工藝。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛(學(xué)名：Dendrobii officinalis caulis)，又名：黑節(jié)草、云南鐵皮，屬微子目，蘭科多年生附生草本植物，其莖入藥，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥。主要分布于中國(guó)安徽、浙江、福建等地。我國(guó)第一部藥學(xué)專著《神農(nóng)本草經(jīng)》對(duì)鐵皮石斛描述：“味甘，平。主傷中，除痹，下氣，補(bǔ)五臟虛勞贏弱，強(qiáng)陰，久服厚腸胃?！甭櫳倨健⒉毯Ｌm在《鐵皮石斛活性成分及其功能研究進(jìn)展》中表明經(jīng)現(xiàn)代科學(xué)研究證明，鐵皮石斛中含有的主要活性成分為石斛多糖、石斛堿、氨基酸、芪類及其衍生物以及多種揮發(fā)成分，近來(lái)從鐵皮石斛中發(fā)現(xiàn)了18個(gè)新化合物。李宏楊、劉國(guó)民、楊志娟、陳冠銘在《鐵皮石斛研究開發(fā)綜述與展望》一文中通過對(duì)鐵皮石斛的功效、化學(xué)成分、產(chǎn)品開發(fā)等方面進(jìn)行綜合分析后認(rèn)為鐵皮石斛為滋陰效果極佳的名貴中藥材，具有廣闊的發(fā)展應(yīng)用前景。
我國(guó)最著名的中醫(yī)書籍《本草綱目》詳細(xì)的描述了鐵皮石斛的功效：“石斛除痹下氣，補(bǔ)五臟虛勞贏瘦，強(qiáng)陰益精，久服，厚腸胃，補(bǔ)內(nèi)絕不足，平胃氣，長(zhǎng)肌肉，逐皮膚邪熱痱氣，腳膝疼冷痹弱，定志除驚，輕身延年，益氣除熱，治男子腰膝軟弱，健陽(yáng)，逐皮膚風(fēng)痹，骨中久冷，補(bǔ)腎益力，壯筋骨，暖水休，益智清氣，治發(fā)熱自汗，癰疽排膿內(nèi)塞。”。據(jù)現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》中記載，其功能與主治為益胃生津，滋陰清熱。用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨痿軟。呂圭源、顏美秋、陳素紅在《鐵皮石斛功效相關(guān)藥理作用研究進(jìn)展》一文中通過CNKI數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，結(jié)合鐵皮石斛現(xiàn)代藥理學(xué)研究和臨床應(yīng)用的文獻(xiàn)，總結(jié)出鐵皮石斛主要有增強(qiáng)免疫、抗疲勞、抗氧化、促消化、促進(jìn)唾液分泌、降血糖、降血壓、抗肝損傷、抗腫瘤等方面藥理作用。
從吳韻琴、斯金平的《鐵皮石斛產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及可持續(xù)發(fā)展的探討》中我們可以知道為實(shí)現(xiàn)可持續(xù)發(fā)展，目前鐵皮石斛多采用人工種植，但人工種植不可避免的存在重金屬超標(biāo)、農(nóng)藥殘留超標(biāo)等質(zhì)量問題。楊青在《擬除蟲菊酯類農(nóng)藥在鐵皮石斛中的殘留量研究》中也建議應(yīng)該完善鐵皮石斛的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，制定與國(guó)際接軌的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)，以保障用藥安全。本發(fā)明就是要解決目前市場(chǎng)上的普遍存在中藥飲片療效不明顯與中藥材因環(huán)境污染而重金屬超標(biāo)、農(nóng)藥殘留超標(biāo)等質(zhì)量問題。
附圖說明
附圖1是鐵皮石斛定性定量中藥飲片生產(chǎn)工藝流程圖。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決上述問題，本發(fā)明提供的鐵皮石斛定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與制造工藝，增加對(duì)藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素B1、二氧化硫 殘留量的檢測(cè)，并將含量測(cè)定中的多糖的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.90％提高至0.99％，三萜及甾醇的標(biāo)準(zhǔn)限度從0.50％提高至0.55％。并通過特定的工序生產(chǎn)出片厚0.3～1mm的鐵皮石斛中藥飲片，確保中藥飲片符合高標(biāo)準(zhǔn)高品質(zhì)的要求。
本發(fā)明提供的鐵皮石斛定性定量中藥飲片的制造工藝，包括以下步驟：
A10、凈制：清除混在鐵皮石斛中的雜質(zhì)及霉變品等，或?qū)㈣F皮石斛按大小進(jìn)行分檔，以便達(dá)到潔凈或進(jìn)一步加工處理。注意：鐵皮石斛經(jīng)凈選后不得直接接觸地面。
A20、潤(rùn)藥：凈制后的鐵皮石斛放入洗潤(rùn)池中，噴水堆潤(rùn)6-8h，至鐵皮石斛徹底潤(rùn)透，折斷面無(wú)干心。注意：鐵皮石斛需潤(rùn)透，折斷面無(wú)干心，鐵皮石斛內(nèi)外軟硬適宜。
A30、切制：片厚0.3～1mm，按全自動(dòng)高速切片機(jī)操作規(guī)程操作，調(diào)好刀距，將鐵皮石斛進(jìn)行試切，用游標(biāo)卡尺檢測(cè)，調(diào)整好切制厚度，符合要求后再正式切藥。
A40、干燥：采用熱風(fēng)循環(huán)烘箱進(jìn)行干燥，將鐵皮石斛鋪于烘箱架子上，攤鋪厚度均勻，厚度在3cm以下。打開開關(guān)，開啟加熱開關(guān)、風(fēng)機(jī)，在溫度55±2℃進(jìn)行干燥，在溫度達(dá)到設(shè)定溫度后干燥6-8h，干燥完畢，關(guān)閉加熱開關(guān)，繼續(xù)吹風(fēng)，待箱內(nèi)溫度降下至35～40℃，關(guān)閉風(fēng)機(jī)。干燥后崗位人員需填寫中間產(chǎn)品請(qǐng)檢單，交質(zhì)量部由QA取樣進(jìn)行水分檢查。
A50、包裝：根據(jù)本品包裝規(guī)格要求進(jìn)行包裝。包裝前需對(duì)包裝間進(jìn)行檢查，確認(rèn)包裝生產(chǎn)線的清場(chǎng)已經(jīng)完成，并核對(duì)包裝材料是否符合要求。內(nèi)包裝：在設(shè)備上調(diào)整好需要印制的生產(chǎn)日期、批號(hào)，QA監(jiān)控，稱取規(guī)定重量的鐵皮石斛放入料斗中，用封口機(jī)封口，要求做到封口嚴(yán)密、平整、美觀。外包裝：在設(shè)備上調(diào)整好需印制的生產(chǎn)日期及批號(hào)，QA監(jiān)控，在外包裝盒子上打印批號(hào)、生產(chǎn)日期，打印過程中需注意批號(hào)及生產(chǎn)日期是否清晰。將內(nèi)包裝完成后的飲片及檢驗(yàn)報(bào)告書放入外包盒中，4袋/盒。將每10盒飲片，套入1個(gè)熱縮膜中，進(jìn)行熱收縮；熱收縮后裝入大紙箱中，240盒/箱。操作過程中，QA隨時(shí)抽檢。包裝后崗位人員需填寫成品請(qǐng)檢單，交質(zhì)量部由QA取樣進(jìn)行產(chǎn)品檢查。
A60、成品：包裝后崗位人員需填寫成品請(qǐng)檢單，交質(zhì)量部由QA取樣進(jìn)行產(chǎn)品檢查。
增加藥屑雜質(zhì)、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量、黃曲霉毒素B1、二氧化硫殘留量，并將含量測(cè)定中的鐵皮石斛多糖的標(biāo)準(zhǔn)限度從25.0％提高至27.5％，甘露糖的標(biāo)準(zhǔn)限度范圍從13.0％～38.0％提高至14.3％～41.8％。修訂后的鐵皮石斛定性定量中藥飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下所示：
鐵皮石斛飲片
拼音名稱：Tiepishihu Yinpian
包裝：純鋁復(fù)合膜包裝。
【性狀】取本品適量，在日光下觀察，本品為不規(guī)則薄片，質(zhì)堅(jiān)實(shí)，易折斷，嗅之，氣微，嘗之，味淡，嚼之有黏性。
鑒別
顯微鑒別
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、藥典篩、顯微鏡、酒精燈
試劑及試液：水合氯醛試液、甘油醋酸試液、甘油乙醇試液、稀甘油(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
測(cè)定及結(jié)果判定
取本品適量，切片置載玻片上，滴加甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其他試液1～2滴，蓋上蓋玻片。必要時(shí)滴加水合氯醛試液后，在酒精燈上加熱透化，并滴加甘油乙醇試液或稀甘油，蓋上蓋玻片，于顯微鏡下觀察：
本品橫切面：表皮細(xì)胞1列，扁平，外壁及側(cè)壁稍增厚、微木化，外被黃色角質(zhì)層，有的外層可見無(wú)色的薄壁細(xì)胞組成的葉鞘層?；颈”诮M織細(xì)胞多角形，大小相似，其間散在多數(shù)維管束，略排成5圈，維管率外韌型，外圍排列有厚壁的纖維束，有的外側(cè)小型薄壁細(xì)胞中含有硅度塊。含草酸鈣針晶束的黏液細(xì)胞多見于近表皮處。
薄層鑒別
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、超聲波清洗機(jī)、點(diǎn)樣器、展開缸、薄層板、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、三用紫外儀
試劑及試液：三氯甲烷、甲醇、甲苯、甲酸乙酯、甲酸、10％硫酸乙醇(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照藥材：鐵皮石斛對(duì)照藥材
測(cè)定及結(jié)果判定
取本品粉末1g，加三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液15ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取鐵皮石斛對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2～5μl，分別點(diǎn)于同硅膠G薄層板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(6∶3∶1)為展開劑，展開，取出，烘干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在95℃加熱約3分鐘，置紫外光燈(365nm)下檢視。
結(jié)果判定：供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
檢查
藥屑、雜質(zhì)
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩
測(cè)定及結(jié)果判定：照雜質(zhì)檢查法(通則2301)測(cè)定。取供試品約100g(精確到0.1g)，攤開，揀出雜質(zhì)，用6號(hào)篩篩出藥屑，合并，稱重，計(jì)算其在供試品中的量(％)。
結(jié)果判定：本品雜質(zhì)不得過3％。
甘露糖與葡萄糖峰面積比
儀器及用具：同【含量測(cè)定】
試劑及試液：同【含量測(cè)定】
對(duì)照品：葡萄糖對(duì)照品
取葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含50mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密吸取0.4ml，按【含量測(cè)定】甘露糖項(xiàng)下方法依法測(cè)定。
結(jié)果判定：供試品色譜中，甘露糖與葡萄糖的峰面積比應(yīng)為2.4～8.0。
水分
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、稱量瓶
照水分測(cè)定法(通則0832第二法)測(cè)定。
取供試品2～5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過5mm，疏松供試品不超過10mm，精密稱定，開啟瓶蓋在100～105℃干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30分鐘，精密稱定，再在上述溫度干燥1小時(shí)，放冷，稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量(％)。
結(jié)果判定：本品水分不得過12.0％。
總灰分
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、馬弗爐、電爐、坩堝
照灰分測(cè)定法(通則2302)測(cè)定。
取供試品2～3g(如須測(cè)定酸不溶性灰分，可取供試品3～5g)，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g)，緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量(％)。
結(jié)果判定：本品總灰分不得過6.0％。
重金屬及有害元素
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、微波消解儀、原子吸收分光光度計(jì)
試劑及試液：硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂、碘化鉀、抗壞血酸、鹽酸、硼氫化鈉、氫氧化鈉、硫酸、高錳酸鉀、鹽酸羥胺(其中硝酸、磷酸二氫銨、硝酸鎂為優(yōu)級(jí)純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
標(biāo)準(zhǔn)樣品：鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、砷單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、汞單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品、銅單元素標(biāo)準(zhǔn)樣品
方法：照鉛、鎘、砷、汞、銅測(cè)定法(通則2321)測(cè)定
鉛的測(cè)定(石墨爐法)
測(cè)定條件參考條件：波長(zhǎng)283.3nm，干燥溫度100～120℃，持續(xù)20秒；灰化溫度400～750℃，持續(xù)20～25秒；原子化溫度1700～～2100℃，持續(xù)4～5秒。
鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鉛(Pb)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鉛標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液制成每1ml分別含鉛0ng、5ng、20ng、40ng、60ng、80ng的溶液。分別精密量取1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取20μl注入石墨爐原子化器，測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氯乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)，進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后，取消解內(nèi)罐置電熱板上緩緩加熱至紅棕色 蒸氣揮盡，并繼續(xù)緩緩濃縮至2～3ml，放冷，用水轉(zhuǎn)入25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測(cè)定法精密量取空白溶液與供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，精密吸取10～20μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鉛(Pb)的含量，計(jì)算，即得。
鎘的測(cè)定(石墨爐法)
測(cè)定條件參考條件：波長(zhǎng)228.8nm，干燥溫度100～120℃，持續(xù)20秒；灰化溫度300～500℃，持續(xù)20～25秒；原子化溫度1500～1900℃，持續(xù)4～5秒。
鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取鎘單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含鎘(Cd)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取鎘標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含鎘0ng、0.8ng、2.0ng、4.0ng、6.0ng、8.0ng的溶液。分別精密吸取10μl，注入石墨爐原子化器，測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10～20μl，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下方法測(cè)定吸光度(若供試品有干擾，可分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液、空白溶液和供試品溶液各1ml，精密加含1％磷酸二氫銨和0.2％硝酸鎂的溶液0.5ml，混勻，依法測(cè)定)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中鎘(Cd)的含量，計(jì)算，即得。
砷的測(cè)定(氫化物法)
測(cè)定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含硼氫化鈉和0.3％氫氧化鈉溶液(臨用前配制)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮?dú)鉃檩d氣，檢測(cè)波長(zhǎng)為193.7nm。
砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取砷單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含砷(As)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取砷標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液稀釋制成每1ml分別含砷0ng、5ng、10ng、20ng、30ng、40ng的溶液。分別精密量取10ml，置25ml量瓶中，加25％碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml，搖勻，加10％抗壞血酸溶液(臨用前配制)1ml，搖勻，用鹽酸溶液(20→100)稀釋至刻度，搖勻，密塞，置80℃水浴中加熱3分鐘，取出，放冷。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測(cè)定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備中的A法制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液各10ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下，自“加25％碘化鉀溶液(臨用前配制)1ml”起，依法測(cè)定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中砷(As)的含量，計(jì)算，即得。
汞的測(cè)定(冷蒸氣吸收法)
測(cè)定條件采用適宜的氫化物發(fā)生裝置，以含0.5％硼氫化鈉和0.1％氫氧化鈉的溶液(臨用前配制)作為還原劑，鹽酸溶液(1→100)為載液，氮?dú)鉃檩d氣，檢測(cè)波長(zhǎng)為253.6nm。
汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取汞單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含汞(Hg)1μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取汞標(biāo)準(zhǔn)貯備液0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，置50ml量瓶中，加20％硫酸溶液10ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，用水稀釋至刻度，搖勻。取適量，吸入氫化物發(fā)生裝置，測(cè)定吸收值，以峰面積(或吸光度)為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備A法取供試品粗粉0.5g，精密稱定，置聚四氟乙烯消解罐內(nèi)，加硝酸3～5ml，混勻，浸泡過夜，蓋好內(nèi)蓋，旋緊外套，置適宜的微波消解爐內(nèi)進(jìn)行消解(按儀器規(guī)定的消解程序操作)。消解完全后，取消解內(nèi)罐置電熱板上，于120℃緩緩加熱至紅棕色蒸氣揮盡，并繼續(xù)濃縮至2～3ml，放冷，加20％硫酸溶液2ml、5％高錳酸鉀溶液0.5ml，搖勻，滴加5％鹽酸羥胺溶液至紫紅色恰消失，轉(zhuǎn)入10ml量瓶中，用水洗滌容器，洗液合并于量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，必要時(shí)離心，取上清液，即得。同法同時(shí)制備試劑空白溶液。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法測(cè)定從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中汞(Hg)的含量，計(jì)算，即得。
銅的測(cè)定(火焰法)
測(cè)定條件檢測(cè)波長(zhǎng)為324.7nm，采用空氣-乙炔火焰，必要時(shí)進(jìn)行背景校正。
銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備精密量取銅單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，用2％硝酸溶液稀釋，制成每1ml含銅(Cu)10μg的溶液，即得(0～5℃貯存)。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密量取銅標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用2％硝酸溶液制成每1ml分別含銅0μg、0.05μg、0.2μg、0.4μg、0.6μg、0.8μg的溶液。依次噴入火焰，測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備同鉛測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備。
測(cè)定法精密吸取空白溶液與供試品溶液適量，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法測(cè)定。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中銅(Cu)的含量，計(jì)算，即得。
結(jié)果判定：本品含鉛不得過8mg/kg；鎘不得過0.8mg/kg；砷不得過4mg/kg；汞不得過0.8mg/kg；銅不得過20mg/kg。
有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留量
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲波清洗機(jī)、離心機(jī)、氣相色譜儀
試劑及試液：石油醚(60～90℃)、丙酮、氯化鈉、二氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉(其中石油醚(60～90℃)為色譜純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品：α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC、p，p′-DDE，p，p′-DDD，o，p′-DDT，p，p′-DDT、PCNB農(nóng)藥對(duì)照品
方法：照農(nóng)藥殘留量測(cè)定法(通則0512第一法)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以(14％-氰丙基-苯基)甲基聚硅氧烷或(5％苯基)甲基聚硅氧烷為固定液的彈性石英毛細(xì)管柱(30m×0.32mm×0.25μm)，63Ni-ECD電子捕獲 檢測(cè)器。進(jìn)樣口溫度230℃，檢測(cè)器溫度300℃，不分流進(jìn)樣。程序升溫：初始100℃，每分鐘10℃升至220℃，每分鐘8℃升至250℃，保持10分鐘。理論板數(shù)按α-BHC峰計(jì)算應(yīng)不低于1×106，兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
對(duì)照品貯備溶液的制備精密稱取六六六(BHC)(α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC)、滴滴涕(DDT)(p，p′-DDE，p，p′-DDD，o，p′-DDT，p，p′-DDT)及五氯硝基苯(PCNB)農(nóng)藥對(duì)照品適量，用石油醚(60～90℃)分別制成每1ml約含4～5μg的溶液，即得。
混合對(duì)照品貯備溶液的制備精密量取上述各對(duì)照品貯備液0.5ml，置10ml量瓶中，用石油醚(60～90℃)稀釋至刻度，搖勻，即得。
混合對(duì)照品溶液的制備精密量取上述混合對(duì)照品貯備液，用石油醚(60～90℃)制成每1L分別含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、250μg的溶液，即得。
供試品溶液的制備取供試品，粉碎成粉末(過三號(hào)篩)，取約2g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，加水20ml浸泡過夜，精密加丙酮40ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用丙酮補(bǔ)足減失的重量，再加氯化鈉約6g，精密加二氯甲烷30ml，稱定重量，超聲15分鐘，再稱定重量，用二氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，靜置(使分層)，將有機(jī)相迅速移入裝有適量無(wú)水硫酸鈉的100ml具塞錐形瓶中，放置4小時(shí)。精密量取35ml，于40(℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚(60～90℃)如前反復(fù)操作至二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚(60～90℃)溶解并轉(zhuǎn)移至10ml具塞刻度離心管中，加石油醚(60～90℃)精密稀釋至5ml，小心加入硫酸1ml，振搖1分鐘，離心(3000轉(zhuǎn)/分鐘)10分鐘，精密量取上清液2ml，置具刻度的濃縮瓶中，連接旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，40℃下(或用氮?dú)?將溶液濃縮至適量，精密稀釋至1ml，即得。
測(cè)定法分別精密吸取供試品溶液和與之相對(duì)應(yīng)濃度的混合對(duì)照品溶液各1μl，注入氣相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算供試品中9種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量。
結(jié)果判定：本品含總六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC之和)不得過0.2mg/kg；總滴滴涕(pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT之和)不得過0.2mg/kg；五氯硝基苯不得過0.1mg/kg。
黃曲霉毒素B1
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、均質(zhì)瓶、離心機(jī)、高效液相色譜儀(配置熒光檢測(cè)器及衍生化泵、衍生化保溫箱)
試劑及試液：甲醇、乙腈、碘、氯化鈉、免疫親合柱(其中乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品：黃曲霉毒素B1對(duì)照品
方法：照黃曲霉毒素測(cè)定法(通則2351)測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(40∶18∶42)為流動(dòng)相；采用柱后衍生法檢測(cè)，碘衍生法：衍生溶液為0.05％的碘溶液(取碘0.5g，加入甲醇100ml使溶解，用水稀釋至1000ml制成)，衍生化泵流速每分鐘 0.3ml，衍生化溫度70℃以熒光檢測(cè)器檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)λex＝360nm(或365nm)，發(fā)射波長(zhǎng)λex＝450nm。兩個(gè)相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
混合對(duì)照品溶液的制備精密量取黃曲霉毒素B1對(duì)照品溶液(標(biāo)示濃度為1.0μg/ml)0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為貯備溶液。精密量取貯備溶液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。
供試品溶液的制備取供試品粉末約15g(過二號(hào)篩)，精密稱定，置于均質(zhì)瓶中，加入氯化鈉3g，精密加入70％甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘(攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘)，離心5分鐘(離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘)，精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，量取續(xù)濾液20.0ml，通過免疫親合柱，流速每分鐘3ml，用水20ml洗脫，洗脫液棄去，使空氣進(jìn)入柱子，將水?dāng)D出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法分別精密吸取上述混合對(duì)照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。另精密吸取上述供試品溶液20～25μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品中相當(dāng)于黃曲霉毒素B1的量，計(jì)算，即得。
結(jié)果判定：本品每1000g含黃曲霉毒素B1不得過5μg。
二氧化硫殘留量
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、電熱套
試劑及試液：過氧化氫、甲基紅乙醇溶液、0.01mol/L氫氧化鈉滴定液、鹽酸溶液(6mol/L)(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法：照二氧化硫殘留量測(cè)定法(通則2331)測(cè)定。
取藥材或飲片細(xì)粉約10g，精密稱定，置兩頸圓底燒瓶中，加水300～400ml。打開回流冷凝管開關(guān)給水，將冷凝管的上端E口處連接一橡膠導(dǎo)氣管置于100ml錐形瓶底部。錐形瓶?jī)?nèi)加入3％過氧化氫溶液50ml作為吸收液(橡膠導(dǎo)氣管的末端應(yīng)在吸收液液面以下)。使用前，在吸收液中加入3滴甲基紅乙醇溶液指示劑(2.5mg/ml)，并用0.01mol/L氫氧化鈉滴定液滴定至黃色(即終點(diǎn)；如果超過終點(diǎn)，則應(yīng)舍棄該吸收溶液)。開通氮?dú)猓褂昧髁坑?jì)調(diào)節(jié)氣體流量至約0.2L/min；打開分液漏斗C的活塞，使鹽酸溶液(6mol/L)10ml流入蒸餾瓶，立即加熱兩頸燒瓶?jī)?nèi)的溶液至沸，并保持微沸；燒瓶?jī)?nèi)的水沸騰1.5小時(shí)后，停止加熱。吸收液放冷后，置于磁力攪拌器上不斷攪拌，用氫氧化鈉滴定液(0.01mol/L)滴定，至黃色持續(xù)時(shí)間20秒不褪，并將滴定的結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。
結(jié)果判定：本品二氧化硫殘留量不得過150mg/kg。
浸出物
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱
試劑及試液：乙醇(試劑使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
方法：照醇溶性浸出物測(cè)定法(通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用乙醇作溶劑。
熱浸法取供試品約2～4g，精密稱定，置100～250ml的錐形瓶中，精密加乙醇50～100ml，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸 1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中醇溶性浸出物的含量(％)。
結(jié)果判定：本品醇溶性浸出物不得少于6.5％。
含量測(cè)定
多糖
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、紫外可見分光光度計(jì)
試劑及試液：苯酚、硫酸(試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品：無(wú)水葡萄糖對(duì)照品
方法：照紫外-可見分光光度法(通則0401)測(cè)定。
對(duì)照品溶液的制備取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含90ug的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分別置10ml具塞試管中，各加水補(bǔ)至1.0ml，精密加入5％苯酚溶液1ml(臨用配制)，搖勻，再精密加硫酸5ml，搖勻，置沸水浴中加熱20分鐘，取出，置冰浴中冷卻5分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在488nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
測(cè)定法精密量取供試品溶液1ml，置10ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液1ml”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無(wú)水葡萄糖的量，計(jì)算，即得。
結(jié)果判定：本品按干燥品計(jì)算，含鐵皮石斛多糖以無(wú)水葡萄糖(C6H12O6)計(jì)，不得少于27.5％。
甘露糖
儀器及用具：中藥粉碎機(jī)、分析天平、藥典篩、恒溫水浴鍋、電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、高效液相色譜儀
試劑及試液：乙腈、乙酸銨、PMP、甲醇、氫氧化鈉、鹽酸、三氯甲烷、無(wú)水乙醇(其中乙腈為色譜純，其他試劑均使用分析純，實(shí)驗(yàn)用水為純化水)
對(duì)照品：甘露糖對(duì)照品
方法：照高效液相色譜法(通則0512)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.02mol/L的乙酸銨溶液(20∶80)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm。理論板數(shù)按甘露糖峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。
校正因子測(cè)定取鹽酸氨基葡萄糖適量，精密稱定，加水制成每1ml含12mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取甘露糖對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取400μl，加0.5mol/L的PMP(1-苯基-3-甲基-5-P比唑啉酮)甲醇溶液與0.3mol/L的氫氧化鈉溶液各400μl，混勻，70℃水浴反 應(yīng)100分鐘。再加0.3mol/L的鹽酸溶液500μl，混勻，用三氯甲烷洗滌3次，每次2ml，棄去三氯甲烷液，水層離心后，取上清液10μl，注人液相色譜儀，測(cè)定，計(jì)算校正因子。
測(cè)定法取本品粉末(過三號(hào)篩)約0.12g，精密稱定，置索氏提取器中，加80％乙醇適量，加熱回流提取4小時(shí)，棄去乙醇液，藥渣揮干乙醇，濾紙筒拆開置于燒杯中，加水100ml，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，煎煮小時(shí)并時(shí)時(shí)攪拌，放冷，加水補(bǔ)至約100ml，混勻，離心，吸取上清液1ml，置安瓿瓶或頂空瓶中，加3.0mol/L的鹽酸溶液0.5ml，封口，混勻，110℃水解1小時(shí)，放冷，用3.0mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)p H值至中性，吸取400μl，照校正因子測(cè)定方法，自“加0.5mol/L的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果判定：本品按干燥品計(jì)算，含甘露糖(C6H12O6)應(yīng)為14.3％～41.8％。
微生物限度
沙門菌取本品10g，以無(wú)菌接種至適宜體積(經(jīng)方法適用性實(shí)驗(yàn)確定)的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，混勻，按非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定：沙門菌不得檢出(10g)。
耐膽鹽革蘭陰性菌取本品，以無(wú)菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基為稀釋劑，制成1∶10的供試液，混勻，按非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：控制菌檢查法檢查。
結(jié)果判定：耐膽鹽革蘭陰性菌應(yīng)小于104cfu(1g)。