本發(fā)明屬于食品安全檢測領(lǐng)域，具體涉及一種飼料中9種解熱鎮(zhèn)痛藥物檢測方法。

背景技術(shù)：

1、在全球范圍內(nèi)，畜禽養(yǎng)殖業(yè)正面臨著向更高品質(zhì)、更安全和更環(huán)保的方向發(fā)展的挑戰(zhàn)。這一趨勢促使行業(yè)和監(jiān)管機(jī)構(gòu)不斷尋求新的方法和措施，以規(guī)范畜牧投入品，特別是飼料行業(yè)，確保養(yǎng)殖過程中投入品的合理使用。隨著對動物健康和福利的關(guān)注日益增加，減少或停止在飼料中使用抗生素已成為行業(yè)發(fā)展的一個重要方向。

2、盡管監(jiān)管措施不斷加強(qiáng)，飼料中非法添加藥物的問題仍然是行業(yè)監(jiān)管中的一個難題。為了追求快速效果和降低成本，在飼料中非法添加化學(xué)藥物的行為不僅對動物健康構(gòu)成威脅，也可能通過食物鏈對人類健康造成影響。此外，這種行為還可能破壞飼料行業(yè)的公平競爭環(huán)境，阻礙行業(yè)的健康發(fā)展。許多國家和地區(qū)已經(jīng)對飼料中藥物殘留問題給予了高度重視，并采取了一系列措施來控制和監(jiān)管藥物的使用。這些措施包括對某些藥物在動物產(chǎn)品中的殘留限量設(shè)定嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)，以及對非法添加藥物的行為進(jìn)行嚴(yán)厲打擊。因此，開發(fā)有效的檢測方法以監(jiān)控動物性食品中的獸藥殘留至關(guān)重要。

3、期刊文獻(xiàn)(張虹,改良quechers結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測飼料中的7種鎮(zhèn)靜劑.2019)公開了一種飼料中7種鎮(zhèn)靜劑的檢測方法，該方法通過在樣品中加入乙腈提取，提取液經(jīng)增強(qiáng)型基質(zhì)去脂吸附劑(emr-lipid)脫脂，鹽析后經(jīng)psa和c18吸附劑進(jìn)一步凈化濃縮，然后用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法檢測分析。該方法具有很好的線性關(guān)系、較低的檢出限和定量限，以及較高的回收率和精密度，適用于飼料中多種殘留鎮(zhèn)靜劑的同時測定。

4、飼料中一些藥物的檢測方法雖然被開發(fā)出來，但飼料中多種藥物殘留的全面檢測仍然存在挑戰(zhàn)。解熱鎮(zhèn)痛類藥物主要是治療類藥物，其在畜禽養(yǎng)殖業(yè)的違法違規(guī)使用易造成畜體的自我調(diào)節(jié)混亂，抵抗力降低，并通過食物鏈危害消費(fèi)者健康。而現(xiàn)有技術(shù)中，大多從保障畜產(chǎn)品質(zhì)量安全的角度出發(fā)，檢測、監(jiān)控動物性食品中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的殘留。

5、例如：公開號為cn111060638b的發(fā)明專利公開了一種動物性食品中207種獸藥及添加物的篩查方法，具體包括：標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制、待測樣品的前處理、數(shù)據(jù)庫的建立、化合物檢測、化合物篩查、化合物確證等。其中207種獸藥及添加物包括解熱鎮(zhèn)痛類：非那西丁、水楊酸、氨基比林、安替比林、氨苯砜、氟尼辛葡甲胺、對乙酰氨基酚。待測樣品為肌肉、禽蛋、牛奶或羊奶。

6、公開號為cn?107228912?a的發(fā)明專利公開了一種動物性食品中79種抗菌藥物的篩查方法，具體包括以下步驟：標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制，待測樣品的分析前處理：標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，定性分析和定量分析。其中，79種抗菌藥物包括解熱鎮(zhèn)痛類藥物：對乙酰氨基酚、安替比林、氨基比林。

7、可知，目前對于飼料中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測方法的研究相對較少，導(dǎo)致飼料行業(yè)中解熱鎮(zhèn)痛類藥物的檢測技術(shù)有效供給不足，對食品安全構(gòu)成了潛在風(fēng)險。

8、因此，為了填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中的空白，并提高飼料中藥物殘留的檢測效率和準(zhǔn)確性，制定一種飼料樣品中解熱鎮(zhèn)痛類藥物檢測的前處理方法、確證檢測方法對于保障食品安全、提高飼料質(zhì)量安全管理、保護(hù)消費(fèi)者健康以及促進(jìn)飼料行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供了一種飼料中9種解熱鎮(zhèn)痛藥物檢測方法。本發(fā)明采用飼料樣品前處理和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測待測樣品，將樣品進(jìn)行前處理后可以改善采用現(xiàn)有的前處理方法處理樣品存在的步驟繁瑣，消耗時間長、檢測結(jié)果準(zhǔn)確性不高的問題。采用了液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用，可以實現(xiàn)多類別藥物的同時測定，能在短時間內(nèi)快速準(zhǔn)確地完成多種藥物的定性和定量分析，滿足實際檢測的時效性要求，可以用于管理飼料質(zhì)量安全。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

3、第一方面，本發(fā)明提供了一種飼料中9種解熱鎮(zhèn)痛藥物檢測方法，包括：

4、將飼料樣品進(jìn)行前處理，得到待測樣品；采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法對待測樣品中9種解熱鎮(zhèn)痛藥物進(jìn)行檢測；

5、所述前處理包括以下步驟：

6、采用甲醇和乙腈的混合溶液對飼料樣品進(jìn)行提取，離心，取上清液；將上清液與水混合，過凈化柱，得到流出液；將流出液過濾膜，得到待測樣品；

7、所述9種解熱鎮(zhèn)痛藥物為安替比林、保泰松、對乙酰氨基酚、安乃近、萘普生、雙氯芬酸、吲哚美辛、阿司匹林和布洛芬。

8、所述飼料中9種解熱鎮(zhèn)痛藥物檢測方法具體包括以下步驟：

9、首先選取飼料樣品，所述飼料樣品為常見的飼料種類，包括但不限于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料和精料補(bǔ)充料中的一種或多種。所述飼料樣品可以為豬飼料，也可以為牛飼料，包括但不限于豬配合飼料、牛精料補(bǔ)充料、豬復(fù)合預(yù)混料、豬濃縮飼料、酶制劑飼料。

10、然后將飼料樣品進(jìn)行前處理，所述前處理具體包括以下步驟：

11、將飼料樣品準(zhǔn)確稱取至離心管中，優(yōu)選地，所述飼料樣品取樣量為1-2g，更優(yōu)選為2g；所述離心管為市面上常見材質(zhì)的離心管，優(yōu)選為聚丙烯離心管或聚四氟乙烯離心管，更優(yōu)選為聚四氟乙烯離心管；

12、將甲醇和乙腈的混合溶液加至離心管中，與飼料樣品混合，進(jìn)行提取；所述甲醇和乙腈的混合溶液與飼料樣品的比例優(yōu)選為1g:5ml；所述甲醇和乙腈的體積比優(yōu)選為8:2；提取時間優(yōu)選為5-15min，更優(yōu)選為5min；

13、提取結(jié)束后，進(jìn)行離心，離心的溫度為4-10℃，優(yōu)選為6-8℃，最優(yōu)選為6℃；離心的速度為7000-10000r/min，優(yōu)選為8000-9000r/min，最優(yōu)選為8000r/min；離心的時間為5-15min，優(yōu)選為8-10min，最優(yōu)選為5min；

14、離心結(jié)束后，取上清液，將上清液與水混合，所述上清液與水的體積比優(yōu)選為4:1；所述上清液體積為2.4ml時，優(yōu)選與0.6ml水混合；

15、將上清液與水混合后，過凈化柱，所述凈化柱為活化的captiva?emr-lipid凈化柱，規(guī)格可以為6ml/600mg或3ml/300mg，優(yōu)選為3ml/300mg；所述過凈化柱的過程中，上清液與水的混合溶液在重力作用下流過凈化柱，待流出液完全流出后，可施加正壓推出留存在凈化柱上的混合溶液，得到流出液；

16、得到流出液后，將流出液過濾膜，所述濾膜為再生纖維素濾膜(rc濾膜)或尼龍濾膜(nyl濾膜)，優(yōu)選為再生纖維素濾膜；所述濾膜的孔徑優(yōu)選為0.22um；得到待測樣品。

17、本發(fā)明的前處理過程中，將飼料樣品混合均勻后加入有機(jī)溶劑甲醇和乙腈混合溶液提取，可保證飼料樣品中所有的解熱鎮(zhèn)痛藥不會被水解，并實現(xiàn)沉淀蛋白和目標(biāo)物提取，進(jìn)而得到混合提取溶液。吸取上清液加入少量水后，采用captiva?emr-lipid柱凈化脂質(zhì)雜質(zhì)；收集洗脫液得到待測樣品。通過上述方法可有效去除飼料樣品中蛋白、脂質(zhì)等大分子和乳糖等極性小分子的基質(zhì)干擾，大大提高了檢測的靈敏度。

18、將前處理后得到的待測樣品進(jìn)行檢測，所述檢測采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有分離速度快、靈敏度高等特點(diǎn)。所述液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法采用多反應(yīng)監(jiān)測mrm模式對飼料樣品中9種解熱鎮(zhèn)痛藥物的碎片離子進(jìn)行監(jiān)測，以9種解熱鎮(zhèn)痛藥物中化合物的保留時間、兩對母離子/子離子特征對目標(biāo)藥物的碎片離子進(jìn)行定性或定量分析。

19、所述液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法中，液相色譜條件為：

20、色譜柱：poroshell?120ec-c18；規(guī)格為3×100mm，2.7μm；

21、流動相：流動相a為1mm乙酸銨水溶液，流動相b為甲醇；

22、流速：0.5ml/min；

23、柱溫：40℃±5℃；

24、進(jìn)樣量：5-20μl，優(yōu)選為10μl；

25、梯度洗脫，條件為：

26、0→3min，流動相中，流動相a的體積分?jǐn)?shù)為90％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)為10％；

27、3→10min，流動相中，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由90％降低至10％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由10％增加至90％；

28、10→13min，流動相中，流動相a的體積分?jǐn)?shù)為10％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)為90％；

29、13→13.1min，流動相中，流動相a的體積分?jǐn)?shù)由10％增加至90％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)由90％降低至10％；

30、13.1→15min，流動相中，流動相a的體積分?jǐn)?shù)為90％，流動相b的體積分?jǐn)?shù)為10％。

31、所述液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法包括：采用多反應(yīng)監(jiān)測mrm模式對9種解熱鎮(zhèn)痛藥物的碎片離子進(jìn)行監(jiān)測。

32、具體地，所述液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法中，質(zhì)譜采用四級桿串聯(lián)質(zhì)譜，條件為：

33、離子源：esi+；esi-；

34、掃描方式：mrm；

35、干燥氣流速：6l/min；

36、干燥氣溫度：350℃；

37、鞘氣流速：12l/min；

38、鞘氣溫度：400℃；

39、毛細(xì)管電壓：3500v(+)；

40、噴嘴電壓：500(+)。

41、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明中樣品的前處理方法簡單高效，可操作性強(qiáng)，實現(xiàn)了多種藥物的同時測定。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用能在短時間內(nèi)快速準(zhǔn)確的完成定性、定量分析，滿足實際檢測的時效性要求具有較好的選擇性、精密度和靈敏度，因此該標(biāo)準(zhǔn)可作為農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，具有廣泛的推廣應(yīng)用前景。