專利名稱：動(dòng)態(tài)雜交儀的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型是一種用于生物遺傳學(xué)的動(dòng)態(tài)雜交儀。
自雜交技術(shù)發(fā)明以來無論在基因工程的實(shí)用研究還是在生物進(jìn)化的理論研究方面都發(fā)揮了巨大的作用。傳統(tǒng)的雜交探針用的是雙鏈DNA，具有取材方便的優(yōu)點(diǎn)，且比較容易被非放射性物質(zhì)標(biāo)記。但由于雙鏈探針在雜交過程中會(huì)自我復(fù)性而使雜交效率急劇下降。為了避免探針自我復(fù)性的缺撼又發(fā)明了RNA與寡聚核苷酸探針，RNA探針雖無自我復(fù)性之慮，但提取RNA的過程較之提取DNA更為麻煩且RNA探針又難于用非放射性物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。寡聚核苷酸探針有著非常高的檢測靈敏度但卻要事先進(jìn)行人工合成，人工合成又須先了解核苷酸順序，對于未知基因的初級克隆階段這樣的要求同樣是難于做到的。由于雙鏈探針自我復(fù)性降低了雜交效率，延長了雜交時(shí)間，現(xiàn)有雜交技術(shù)需要時(shí)間少則幾小時(shí)，多則幾十小時(shí)，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，急待改善。
本實(shí)用新型的目的是設(shè)計(jì)一種減少雜交時(shí)間，提高雜交效率的雜交裝置。
本實(shí)用新型的雜交裝置由微量泵、預(yù)熱、雜交、高溫變性和驟冷各區(qū)域裝置串聯(lián)組成，每個(gè)區(qū)的結(jié)構(gòu)是直經(jīng)為0.5～1.0mm的不銹鋼細(xì)管1～8根并列，這些不銹鋼細(xì)管可根據(jù)各區(qū)恒溫要求有不同的恒溫方式，這些細(xì)管在恒溫區(qū)內(nèi)并列平行，有利于熱交換，熱平衡，在恒溫區(qū)外并列平行的細(xì)管合并成一根串聯(lián)管，以利于雜交液的流動(dòng)。各區(qū)域裝置內(nèi)恒溫溫度為預(yù)熱區(qū)50～80℃，雜交區(qū)50～80℃，高溫變性區(qū)80～100℃，驟冷區(qū)-2～2℃。預(yù)熱區(qū)溫度與雜交區(qū)基本一致，使雜交液流經(jīng)雜交區(qū)的雜交膜時(shí)不致于溫差太大而影響雜交效率。各區(qū)之間用1.0～2.0mm的不銹鋼管連接，根據(jù)不同區(qū)域的溫度要求，恒溫方式可用水浴、電加熱、冰水浴等方式使多根不銹鋼細(xì)管恒溫。微量泵串聯(lián)在各區(qū)中，一般情況微量泵串聯(lián)在驟冷區(qū)和預(yù)熱區(qū)之間，它以一定動(dòng)力驅(qū)動(dòng)雜交液向預(yù)熱區(qū)、雜交區(qū)、高溫變性區(qū)和驟冷區(qū)流動(dòng)，流速根據(jù)不同樣品和不銹鋼管徑來確定，使其達(dá)到既高效又快速地雜交的目的。在雜交區(qū)內(nèi)有雜交膜，雜交區(qū)是矩形盒狀，雜交膜平攤在盒底，盒蓋可開可合，盒身水浴恒溫，兩頭與串聯(lián)管接通，便利雜交液的流動(dòng)。
本設(shè)計(jì)仍用雙鏈DNA探針，只是雜交過程中加入一動(dòng)態(tài)解鏈過程。在變性探針流過裝有雜交膜的雜交區(qū)時(shí)已有部份探針復(fù)性了，進(jìn)入一高溫水浴的解鏈區(qū)用以將復(fù)性探針解開，再經(jīng)過一冰水浴的驟冷區(qū)用以防止探針復(fù)性，然后再流回到一定溫度的預(yù)熱區(qū)預(yù)熱，最后流到雜交區(qū)以供雜交之用。四區(qū)的溫度分別固定，只是雜交液不斷循環(huán)流動(dòng)。如此動(dòng)態(tài)循環(huán)雜交過程中能使自我復(fù)性的探針降低到最小程度，使雜交效率大大提高，同時(shí)將有助于減少原來需數(shù)小時(shí)至數(shù)拾小時(shí)的雜交時(shí)間。如此解決了自我復(fù)性的問題后雙鏈DNA探針將發(fā)揮更大的作用。
圖是本實(shí)用新型的示意圖。
實(shí)施例將四根管徑為0.6mm的不銹鋼管并列平行排列，兩頭合成一束并與1.2mm管徑的串聯(lián)管連接貫通，外部用恒溫水浴50～80℃恒溫，制成雜交液預(yù)熱區(qū)。同樣方法制作雜交區(qū)、高溫變性區(qū)和驟冷區(qū)。高溫變性區(qū)四根不銹鋼管用電加熱恒溫至80～100℃，驟冷區(qū)用冰水浴控制0℃，雜交區(qū)用長×寬為5cm×5cm的不銹鋼制成方形有蓋盒，盒蓋密封良好，以利恒溫。雜交盒外水浴溫度控制50～80℃，各區(qū)之間用管徑2.0mm的不銹鋼管串聯(lián)，微量泵接在預(yù)熱區(qū)和驟冷區(qū)之間。雜交液從微量泵內(nèi)注入，流經(jīng)預(yù)熱、雜交、變性和驟冷各區(qū)循環(huán)，不斷復(fù)性又解鏈，達(dá)到高效雜交目的。
權(quán)利要求1.一種動(dòng)態(tài)雜交裝置，由預(yù)熱、雜交、高溫變性和驟冷各部分組成，其特征在于微量泵(5)、預(yù)熱區(qū)(1)、雜交區(qū)(2)、高溫變性區(qū)(3)和驟冷區(qū)(4)由不銹鋼管串聯(lián)組成，每個(gè)區(qū)內(nèi)有直徑為0.5～1.0mm的不銹鋼細(xì)管1～8根并列，在區(qū)外合并為一根串聯(lián)管，串聯(lián)管管徑1.0～2.0mm，各區(qū)內(nèi)并列的不銹鋼管在恒溫裝置內(nèi)(6)，恒溫裝置其溫度分別控制為預(yù)熱區(qū)50～80℃，雜交區(qū)50～80℃，高溫變性區(qū)80～100℃，驟冷區(qū)-2～2℃，雜交區(qū)為矩形盒狀，盒身水浴恒溫，矩形盒兩頭與串聯(lián)管相通，盒蓋可開可合。
專利摘要本實(shí)用新型是一種動(dòng)態(tài)雜交裝置。傳統(tǒng)的雜交均是雜交液靜態(tài)恒溫較長時(shí)間，由于使用雙鏈DNA探針的自我復(fù)性使效率下降，RNA與寡聚核苷酸探針又有標(biāo)記與合成的困難。本新型預(yù)熱區(qū)、雜交區(qū)、高溫變性和驟冷區(qū)由不銹鋼管串聯(lián)組成各區(qū)域的恒溫裝置使雜交液流經(jīng)各區(qū)，復(fù)性的探針在高溫變性區(qū)解鏈，經(jīng)驟冷區(qū)防止復(fù)性，再經(jīng)預(yù)熱進(jìn)入雜交區(qū)，微量泵驅(qū)動(dòng)雜交液不斷循環(huán)，如此達(dá)到高效率雜交的效果。
文檔編號C12N15/00GK2242898SQ962292
公開日1996年12月18日 申請日期1996年1月31日 優(yōu)先權(quán)日1996年1月31日
發(fā)明者盛小禹 申請人:復(fù)旦大學(xué)