一種抑制蝦黑變的抗氧化劑及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種抑制蝦黑變的抗氧化劑及其制備方法與應(yīng)用。所述抗氧化劑為含有亞?；撬岬乃芤?，所述亞?；撬岬臐舛葹?.25~80 g/L。該抗氧化劑安全高效，可以獨立使用，不需進行復(fù)配即可達到傳統(tǒng)抑制劑亞硫酸鈉的抑制效果，具有廣闊的市場應(yīng)用前景。
【專利說明】
一種抑制蝦黑變的抗氧化劑及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及海產(chǎn)品保鮮技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種抑制蝦黑變的抗氧化劑及 其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 中國是對蝦養(yǎng)殖大國，對蝦因肉質(zhì)鮮美、營養(yǎng)豐富而深受廣大消費者喜愛;但是對 蝦捕獲后如果沒有采取有效的措施處理，就很容易發(fā)生黑變。雖然對蝦黑變不影響對蝦的 營養(yǎng)價值，但嚴(yán)重影響了消費者的購買欲，從而大大降低了對蝦的商品價值。
[0003] 傳統(tǒng)抑制對蝦黑變的方法主要是采用低溫和化學(xué)保鮮劑，最常用的化學(xué)保鮮劑就 是亞硫酸鈉、4-己基間苯二酚等。亞硫酸鈉因研究發(fā)現(xiàn)可能會引起食用者發(fā)生過敏以及哮 喘反應(yīng)，在歐美國家已被禁止使用;而4-己基間苯二酚作為目前比較有效的防黑變抑制劑， 對于長期接觸者或食用者潛在的危害還尚不明確。因此，尋求天然、安全、高效的防對蝦黑 變抑制劑越來越受到人們的重視。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種天然的、安全的、高效的抗氧化劑，所述抗氧化劑能顯 著抑制蝦黑變。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是： 一種抑制蝦黑變的抗氧化劑，所述抗氧化劑為含有亞?；撬岬乃芤?，所述亞?；撬?的濃度為0.25~80 g/L。
[0006] 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)亞?；撬釓臐舛葹?.25 g/L開始具有抑制效果，10~40g/L時達到較為 理想的效果，因此優(yōu)選所述亞?；撬岬臐舛葹?0~40 g/L。
[0007] 亞?；撬崾巧矬w中廣泛存在的一種天然化合物，因此對人體無毒害作用。它可 以從翡翠貽貝、馬氏珠母貝、企鵝珍珠貝、大珠母貝、扇貝、牡蠣、文蛤、章魚、魷魚等等海洋 生物中提取獲得。亞?；撬岬乃苄院?。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)亞?；撬崮軌蛴行б种贫喾友趸傅?活性，并且在上述濃度下的亞?；撬崴芤耗軌蜃鳛楸ｕr劑抑制蝦黑變。
[0008] 所述抗氧化劑在抑制蝦黑變中的應(yīng)用。所述抗氧化劑在同樣濃度下可達到亞硫酸 鈉的抑制黑變效果，具有廣闊的市場前景。
[0009] 所述抗氧化劑對奸的處理方式不進行特殊的限定。
[0010] 為更好地與奸進行充分接觸，優(yōu)選地，將奸浸泡于所述抗氧化劑中5~100 min，優(yōu) 選為30~60 min。
[0011] 更進一步地，在浸泡所述抗氧化劑前，先用冰水將蝦猝死。
[0012] 為了操作更加方便，優(yōu)選地，將所述抗氧化劑噴灑到蝦上。進一步地，所述抗氧化 劑的噴灑用量為每克蝦1~5 ml。
[0013] 更進一步地，將處理后的蝦瀝干，用聚乙烯食品包裝袋進行包裝，然后置于4°C冷 藏。
[0014] 所述蝦種類為對蝦，具體為凡納濱對蝦、斑節(jié)對蝦、中國對蝦、羅氏沼蝦、日本對蝦 等。
[0015] 所述抗氧化劑在抑制蝦的多酚氧化酶活性中的應(yīng)用。
[0016] 具體操作如下：將所述抗氧化劑與含有多酚氧化酶的物質(zhì)混合，然后依次加入磷 酸緩沖液、左旋多巴，在40~45 °C的水浴中反應(yīng)。
[0017]優(yōu)選地，可將含有蝦的多酚氧化酶的物質(zhì)配制成溶液再與抗氧化劑進行混合。
[0018] 更優(yōu)選地，多酚氧化酶溶液中多酚氧化酶的濃度為2~3 g/L。
[0019] 本發(fā)明所使用的亞?；撬峥梢詮氖袌錾腺徺I得到，也可以從海洋生物中提取亞牛 磺酸得到。
[0020] 本發(fā)明的另外一個目的提供上述抗氧化劑的制備方法。所述制備方法包括以下步 驟： 51. 從海洋生物中提取亞?；撬幔?52. 配制成濃度為0.25~80 g/L的亞?；撬崴芤?。
[0021] 所述海洋生物為翡翠貽貝、馬氏珠母貝、企鵝珍珠貝、大珠母貝、扇貝、牡蠣、文蛤、 章魚或魷魚。
[0022] 其中，提取方法可參考現(xiàn)有技術(shù)，優(yōu)選采用以下兩種提取方法： 將海洋生物粉碎，加水，加熱到40~80 °C，進行熱水提取10~60 min，然后過濾，在低溫 下對過濾液進行透析，對透析液用尼龍膜過濾，然后對過濾液進行層析分離，收集分離的組 分，經(jīng)冷凍干燥后即得到亞?；撬?。
[0023] 尼龍膜優(yōu)選采用0.45 μπι。層析分離的條件為采用Sephadex G-25-80柱，流動相為 0.02 mol/L磷酸緩沖液。
[0024] 或者，將海洋生物粉碎，加水，用功率為100~600W的超聲波處理10~60 min，然后過 濾，在低溫下對過濾液進行透析，對透析液用尼龍膜過濾，然后對過濾液進行層析分離，收 集分離的組分，經(jīng)冷凍干燥后即得到亞?；撬?。
[0025]上述兩種提取方法都能有效得到亞?；撬幔⒔?jīng)檢驗，亞牛磺酸的純度能夠到達 95%〇
[0026] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是： 發(fā)明人發(fā)現(xiàn)亞?；撬崮軌蛴行б种贫喾友趸傅幕钚?，并將其配制成一定濃度的亞牛 磺酸水溶液，作為保鮮劑抑制蝦黑變，其操作簡單，能夠有效抑制蝦的黑變。
【具體實施方式】
[0027] 下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明做進一步詳細說明。實施例僅用于解釋本發(fā)明，并 不對本發(fā)明的內(nèi)容做任何形式的限定。
[0028]從海洋生物中提取亞?；撬?第一種提取方法 將從市場購買的翡翠貽貝清洗干凈，用勻漿機粉碎，加入30 mL/g(水/樣品）加入蒸餾 水，加熱到60 °C進行熱水提取50 min，然后過濾，在4 °C下24 h內(nèi)對過濾液進行透析3次， 對透析液用〇. 45μηι尼龍膜過濾，然后對過濾液進行Sephadex G-25-80柱層析(40 cmX 2.5 cm)分離，流動相為0.02 mol/L磷酸緩沖液(pH5.7)，收集分離的組分，經(jīng)冷凍干燥和粉碎后 即為制備的亞?；撬岱勰?。
[0029]第二種提取方法 將從市場購買的馬氏珠母貝肉清洗干凈，用勻漿機粉碎，加入20 mL/g(水/樣品）加入 蒸餾水，用500 W的超聲波處理40 min，，然后過濾，在4 °C下24 h內(nèi)對過濾液進行透析3次， 對透析液用〇. 45μηι尼龍膜過濾，然后對過濾液進行Sephadex G-25-80柱層析(40 cmX 2.5 cm)分離，流動相為0.02 mol/L磷酸緩沖液(pH5.7)，收集分離的組分，經(jīng)冷凍干燥和粉碎后 即為制備的亞?；撬岱勰?。
[0030]第二種提取方法 將從市場購買的章魚清洗干凈，用勻漿機粉碎，加入20 mL/g (水/樣品)加入蒸餾水，用 400 W的超聲波處理50 min，然后過濾，在4 °C下24 h內(nèi)對過濾液進行透析3次，對透析液用 0.45μηι尼龍膜過濾，然后對過濾液進行Sephadex G-25-80柱層析(40 cmX 2.5cm)分離，流 動相為〇. 02 mo 1 /L磷酸緩沖液(pH5.7)，收集分離的組分，經(jīng)冷凍干燥和粉碎后即為制備的 亞牛磺酸粉末。
[0031] 分別對上述三種提取方法得到的亞?；撬徇M行檢測，其純度達到95%。
[0032]本實施例采用的多酚氧化酶溶液中蝦的多酚氧化酶的濃度為2 g/L。
[0033]檢測方法 后述的實施例及對比例采用以下方法進行檢測。
[0034]檢驗蝦黑變的具體方法： 采用感官評定法。評定小組由5名感官評定人員組成，采用10分制法評定，要求評定人 員對蝦的黑變從0~10分范圍內(nèi)進行評分:其中0分為無黑變現(xiàn)象，2分為輕微(約20%蝦體表 面黑變）；4分為中度(20%~40%奸體表面黑變）；6分為顯著(40%~60%蝦體表面黑變）；8分為 嚴(yán)重(60%~80%奸體表面黑變）；10為極嚴(yán)重（80%~100%奸體表面黑變）。
[0035]
檢驗多酚氧化酶的活性的方法： 取100 yL ΡΡ0酶液，加入400 yL 0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液(PH6.0)，再加入600 yL 15 mmol/L左旋多巴溶液(去離子水配置)后立即在45°C水浴中反應(yīng)5 min，用紫外可見分光光 度計檢測475nm處的吸光度?？瞻讓φ眨河?00yL去離子水代替ΡΡ0酶液，其他按照上述操作 執(zhí)行。酶活定義:475nm下吸光度值每分鐘增加0.001為一個酶活單位。（單位A475r?/min)。
[0036] d 1為ΡΡ0酶液的吸光度值Μ 2為空白對照的吸光度值；?為反應(yīng)時間(min)。
[0037] 實施例1 利用上述制備得到的亞?；撬岱勰渲瞥蓾舛葹?0 g/L的亞?；撬崴芤?。
[0038] 抑制蝦的多酚氧化酶活性的測試:將100 yL的上述亞牛磺酸溶液與100 yL多酚 氧化酶液混合，在25°C下放置30 min，然后加入400 yL磷酸緩沖液(pH 5.7);再加入600 yL 15 mmol/L左旋多巴，放置在45 °C水浴中反應(yīng)5 min，然后進行檢測，多酚氧化酶的活性下 降到40%左右。
[0039] 對蝦黑變試驗:將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于上述亞?；撬崛芤褐?0 min， 撈出瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了60%。
[0040] 實施例2 利用上述制備得到的亞牛磺酸粉末，配制成濃度為40 g/L的亞?；撬崴芤骸?br>[0041] 抑制蝦的多酚氧化酶活性的測試:將100 yL的上述亞?；撬崛芤号c100 yL多酚 氧化酶液混合，在25°C下放置30 min，然后加入400 yL磷酸緩沖液(pH 5.7);再加入600 yL 15 mmol/L左旋多巴，放置在45 °C水浴中反應(yīng)5 min，然后進行檢測，多酚氧化酶的活性下 降到5%左右。
[0042] 對蝦黑變試驗:將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于上述亞牛磺酸溶液中20 min， 撈出瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了 100% (即未發(fā)生黑變）。
[0043] 實施例3 利用上述制備得到的亞牛磺酸粉末，配制成濃度為20 g/L的亞?；撬崴芤?。
[0044]抑制蝦的多酚氧化酶活性的測試:將100 yL的上述亞?；撬崛芤号c100 yL多酚 氧化酶液混合，在25°C下放置30 min，然后加入400 yL磷酸緩沖液(pH 5.7);再加入600 yL 15 mmol/L左旋多巴，放置在45 °C水浴中反應(yīng)5 min，然后進行檢測，多酚氧化酶的活性下 降到25%左右。
[0045] 對蝦黑變試驗:將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于上述亞牛磺酸溶液中40 min， 撈出瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了80%。 [0046] 實施例4 利用上述制備得到的亞?；撬岱勰?，配制成濃度為0.25 g/L的亞?；撬崴芤?。
[0047]抑制蝦的多酚氧化酶活性的測試:將100 yL的上述亞?；撬崛芤号c100 yL多酚 氧化酶液混合，在25°C下放置30 min，然后加入400 yL磷酸緩沖液(pH 5.7);再加入600 yL 15 mmol/L左旋多巴，放置在45 °C水浴中反應(yīng)5 min，然后進行檢測，多酚氧化酶的活性下 降到90%左右。
[0048]對蝦黑變試驗:將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于亞?；撬崛芤褐?00 min，撈 出瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了20%。
[0049] 實施例5 利用上述制備得到的亞?；撬岱勰?，配制成濃度為80 g/L的亞牛磺酸水溶液。
[0050] 抑制蝦的多酚氧化酶活性的測試:將100 yL的上述亞?；撬崛芤号c100 yL多酚 氧化酶液混合，在25°C下放置30 min，然后加入400 yL磷酸緩沖液(pH 5.7);再加入600 yL 15 mmol/L左旋多巴，放置在45 °C水浴中反應(yīng)5 min，然后進行檢測，多酚氧化酶的活性下 降到3.5%左右。
[0051 ]對蝦黑變試驗:將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于亞?；撬崛芤褐? min，撈出 瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了 100%(即未 發(fā)生黑變）。
[0052] 實施例6 利用上述制備得到的亞?；撬岱勰?，配制成濃度為60 g/L的亞?；撬崴芤骸?br>[0053]抑制蝦的多酚氧化酶活性的測試:將100 yL的上述亞?；撬崛芤号c100 yL多酚 氧化酶液混合，在25°C下放置30 min，然后加入400 yL磷酸緩沖液(pH 5.7);再加入600 yL 15 mmol/L左旋多巴，放置在45 °C水浴中反應(yīng)5 min，然后進行檢測，多酚氧化酶的活性下 降到4%左右。
[0054]對蝦黑變試驗:將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于亞?；撬崛芤褐?0 min，撈出 瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了 100%(即未 發(fā)生黑變）。
[0055] 實施例7 利用上述制備得到的亞?；撬岱勰?，配制成濃度為40 g/L的亞?；撬崴芤骸?br>[0056] 對蝦黑變試驗:將該亞?；撬崴芤簢姙⒌轿r上，噴灑的用量為每克蝦3 ml，用聚 乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了 100%(即未發(fā)生黑變）。
[0057] 實施例8 利用上述制備得到的亞?；撬岱勰?，配制成濃度為10 g/L的亞?；撬崴芤?。
[0058] 對蝦黑變試驗：將該亞?；撬崴芤簢姙⒌轿r上，噴灑的用量為每克蝦5ml，用聚 乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了60%。
[0059] 實施例9 利用上述制備得到的亞?；撬岱勰?，配制成濃度為80 g/L的亞?；撬崴芤?。
[0060] 對蝦黑變試驗:將該亞?；撬崴芤簢姙⒌轿r上，噴灑的用量為每克蝦1 ml，用聚 乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了90%。
[0061 ] 實施例10 本對比例采用經(jīng)市面上購買得到亞?；撬幔兌?gt;98%)，將其配制成濃度為40 g/L的 亞牛磺酸水溶液。
[0062] 對蝦黑變試驗：將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于上述亞?；撬崴芤褐?0 min，撈出瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了 100%(即未發(fā)生黑變）。
[0063] 對比例1 本對比例采用亞硫酸鈉，將其配制成濃度為40 g/L的亞硫酸鈉水溶液。
[0064] 對蝦黑變試驗：將對蝦用冰水猝死后撈出，再浸泡于上述亞硫酸鈉水溶液中20 min，撈出瀝干后用聚乙烯食品包裝袋包裝后在4 °C下貯藏10天，經(jīng)檢測，對蝦黑變減少了 80% 〇
[0065]顯然，本發(fā)明的上述實施例僅僅是為清楚地說明本發(fā)明所作的舉例，而并非是對 本發(fā)明的實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可 以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。凡在本 發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明權(quán)利要求 的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種抑制蝦黑變的抗氧化劑，其特征在于，所述抗氧化劑為含有亞?；撬岬乃芤?， 所述亞?；撬岬臐舛葹?.25~80 g/L。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗氧化劑，其特征在于，所述亞牛磺酸的濃度為10~40 g/L。3. 權(quán)利要求1所述抗氧化劑在抑制蝦黑變中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，將蝦浸泡于所述抗氧化劑中5~100 min。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，在浸泡所述抗氧化劑前，先用冰水將蝦猝 死。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，將所述抗氧化劑噴灑到蝦上。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗氧化劑的噴灑用量為每克蝦1~5 ml 〇8. 權(quán)利要求1所述抗氧化劑在抑制蝦的多酚氧化酶活性中的應(yīng)用。9. 一種權(quán)利要求1所述抗氧化劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：51. 從海洋生物中提取亞?；撬幔?2. 配制成濃度為0.25~80 g/L的亞?；撬崴芤骸?0. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述海洋生物為翡翠貽貝、馬氏珠母 貝、企鵝珍珠貝、大珠母貝、扇貝、牡蠣、文蛤、章魚或魷魚。
【文檔編號】A23B4/20GK106070537SQ201610536345
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年7月8日
【發(fā)明人】劉書成, 劉蒙娜, 劉媛, 鄧倩琳, 吉宏武
【申請人】廣東海洋大學(xué)