專利名稱：降低膽固醇的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于降低膽固醇的組合物和方法。本發(fā)明特別的涉及用于降低人類的膽固醇水平的含有鱷梨(Persea americana var.) 的德里密佛列(drymifolia)品種(下文中稱為“drymifolia”)的鱷梨葉子的組合物和方法。
背景技術(shù)：
膽固醇是在人體內(nèi)的血流和細(xì)胞的脂肪中發(fā)現(xiàn)的一種柔軟的蠟樣物質(zhì)。雖然膽固醇對(duì)機(jī)體功能來說是必須的，但是血液中過高水平的膽固醇對(duì)人體是有害的，因?yàn)樗黾恿嘶夹难芗膊〉娘L(fēng)險(xiǎn)。高膽固醇通常意味著一個(gè)人的總血液膽固醇水平高于240mg/dl或者其低密度脂蛋白水平高于160mg/dl(參見，Cleeman，James I.，ExecutiveSummary of the Third Report of the National Cholesterol EducationProgram (NCEP)Expert Panel on Detection，Evaluation，and Treatmentof High Blood Cholesterol in Adults(Adult Treatment Panel HI)，JAMA285(19)2486-2497(2001))。大約有41.3百萬美國(guó)人的總血液膽固醇達(dá)到或者超過240mg/dl(參見，American Heart Association，Biostatistical Fact Sheet，www.americanheart.org(2002))。當(dāng)達(dá)到這樣高的水平時(shí)，因?yàn)槟懝檀疾蝗苡谘?，它就?huì)附著在動(dòng)脈管壁上。而且，膽固醇必須要通過稱作低密度脂蛋白(LDL)和高密度蛋白(HDL)的特殊載體運(yùn)送到細(xì)胞以及從細(xì)胞中運(yùn)送出來。HDL從你的動(dòng)脈運(yùn)走膽固醇，因此被稱作“有益膽固醇”。過多的低密度脂蛋白膽固醇可能阻礙聯(lián)系心臟的動(dòng)脈，因此被稱作“有害膽固醇”。這種情況稱作動(dòng)脈硬化癥，增加了血液凝結(jié)、心臟病和中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)。
因此，控制人體的膽固醇水平有著非常重要的作用。有很多種稱為statin的具有控制脂肪藥理作用的干涉劑。一種普通的statin就是Lipitor。雖然這些藥劑經(jīng)過臨床測(cè)試證明是安全的，但和其他藥物一樣它們會(huì)帶來副作用的風(fēng)險(xiǎn)。最顯著的副作用就是肌病，特別明顯的是肌肉疼痛和軟弱。并且，當(dāng)病人正在接受statin治療時(shí)，減少有害反應(yīng)或藥物的相互作用是非常重要的(參見，Davidson，Michael H.，Treatment of the Elderly with 3-Hydroxy-3-Methylglutaryl Coenzyme AReductase InhibitorsFocus on Drug Interactions，J CardiovascPharmacol Therapeut，6(3)219-229(2001))。在成人治療組中，國(guó)家膽固醇教育計(jì)劃建議使用來自植物的物質(zhì)對(duì)高血脂(dyslipidemias)進(jìn)行輔助治療(參見，Cleeman，supra)。因此，渴望得到能夠安全和有效的降低膽固醇的天然物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是一種用來降低膽固醇水平的含有drymifolia品種的鱷梨葉子的組合物。在一個(gè)實(shí)施例中，將這些葉子脫水并且粉碎，作為茶飲用。令人驚訝的是，drymifolia葉子顯示出的降低膽固醇的效果與Lipitor相當(dāng)，其降低膽固醇的效果比北美常見的鱷梨Perseanubigena var.guatamalensis cv.Nabal和Persea nubigena var.guatamalensis cv.Haas的果實(shí)和葉子要好得多。
參考附圖和優(yōu)選實(shí)施例的詳細(xì)描述，可以更好的理解本發(fā)明這些方面以及其他的益處。除非特別指明，本發(fā)明的說明書以及權(quán)利要求中的百分比都是指重量百分比。


圖1是膽固醇釋放曲線圖，比較了肝細(xì)胞G2對(duì)給定劑量的手工破碎和粉碎的drymifolia葉子與對(duì)Lipitor的反應(yīng)。
圖2是膽固醇釋放曲線圖，比較了肝細(xì)胞G2對(duì)給定劑量的粉碎的drymifolia葉子與對(duì)粉碎的Persea nubigena var.guatamalensis cv.Nabal葉子和粉碎的Persea nubigena var.guatamalensis cv.Haas葉子的反應(yīng)。
圖3是膽固醇釋放曲線圖，比較了肝細(xì)胞G2對(duì)給定劑量的粉碎的drymifolia葉子與對(duì)Persea nubigena var.guatamalensis cv.Haas的果實(shí)的反應(yīng)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明包括Persea americana var.drymifolia品種(“drymifolia”)的鱷梨葉子。這個(gè)品種可以在阿根廷北部獲得。這些葉子中導(dǎo)致膽固醇降低的特定物質(zhì)仍然是不清楚的。然而，草藥工業(yè)中公認(rèn)的一個(gè)原則是，當(dāng)植物/草藥死亡或者腐爛時(shí)，新鮮植物/草藥中的活性成分的效果通常會(huì)分解或者降低。因此，在從阿根廷運(yùn)到美國(guó)的過程中，為了保持drymifolia降低膽固醇的能力，優(yōu)選將新鮮的drymifolia葉子在大約60°F-80°F的平均室溫下風(fēng)干。保持該溫度范圍，直到將這些葉子進(jìn)行制備、使用。令人驚訝的是，這個(gè)預(yù)處理步驟可以保持drymifolia葉子的降低膽固醇的功效。
一旦脫水后，優(yōu)選將這些葉子進(jìn)行手工破碎。手工破碎的葉子降低膽固醇的活性比Persea nubigena var.guatamalensis cv.Nabal(“Nabal”)的葉子、果實(shí)和Persea nubigena var.guatamalensis cv.Haas(“Haas”)的葉子更好。更優(yōu)選的是，將脫水的葉子用2mm篩粉碎至平均粒徑尺寸約為28微米。特別優(yōu)選的是，使用1mm篩將葉子粉碎兩次至平均粒徑尺寸約為9微米。最優(yōu)選的是，使用1mm篩將脫水的葉子粉碎到平均粒徑尺寸約為11微米?？梢圆捎肎lenMills錘式粉碎機(jī)臺(tái)式裝置(Mot.KM 80-60，Culatti Typ MFC)進(jìn)行粉碎。粉碎的drymifolia葉子比手工破碎的葉子具有更好的降低膽固醇效果。粉碎和脫水的葉子預(yù)計(jì)可以以茶、膠囊、藥片、乳脂、凝膠、液體和食品的形式使用。但是，為了示范性目的，描述了以茶的形式來制備和飲用。
在1ml水中加入10mg的手工破碎的或者粉碎的drymifolia葉子，制成1％濃縮物的茶。在一個(gè)實(shí)施例中，在10ml水中加入100mgdrymifolia葉子來制成茶。將茶煮沸約1-10分鐘。更優(yōu)選的是，將茶煮沸大約3-7分鐘，最優(yōu)選的是約5分鐘。在將drymifolia葉子浸沒到水中后或當(dāng)時(shí)水可以是煮沸的。煮沸的次數(shù)根據(jù)茶量不同而變化，這對(duì)本領(lǐng)域普通的技術(shù)人員是可以理解的。
Drymifolia比較研究為了檢驗(yàn)含有粉碎的、平均粒徑約為11微米的drymifolia葉子的drymifolia茶的功效，將其與含有平均粒徑11微米的手工破碎的dymifolia葉子、Lipitor、Haas果實(shí)以及粉碎的Haas和Nabal的葉子進(jìn)行比較研究。在甲醇/緩沖劑中制備Lipitor來溶解活性成分atorvastatin(40mg活性成分/600mg藥片)。所有的測(cè)試材料都用于不同劑量下的血清培養(yǎng)基。
將含有平均粒徑約11微米的drymifolia葉子的茶加入到杜白克(Dulbecco)修飾的伊格(Eagle)培養(yǎng)基(DMEM，目錄#11965，Vitrogen Corporation，1600 Faraday Avenue，P.O.Box 6482，Carlsbad，California 92008)中，通過連續(xù)稀釋使得最終的濃度約為0.1mg/ml-0.5mg/ml drymifolia葉子(或者0.01％-0.05％drymifolia葉子)。更優(yōu)選的是，最終濃度為約0.2mg/ml-0.4mg/ml drymifolia葉子，最優(yōu)選的是約0.4mg/ml drymifolia葉子。培養(yǎng)基為細(xì)胞生存、包括膽固醇的合成提供所有的營(yíng)養(yǎng)。
培養(yǎng)基成分 摩爾濃度(mM)無機(jī)鹽氯化鈣(CaCl2)(無水) 1.80硝酸鐵(Fe(NO3)3-9H2O) 0.000248
氯化鉀(KCl)5.30硫酸鎂(MgSO4) 0.813氯化鈉(NaCl) 110.34碳酸氫鈉(NaHCO3) 44.10磷酸鈉(NaH2PO4-H2O)0.906其他成分D-葡萄糖 25.00酚紅 0.0346氨基酸L-精氨酸-HCl 0.398L-胱氨酸2HCl 0.200L-谷酰胺 4.00糖膠 0.399L-組氨酸HCl-H2O 0.20L-異亮氨酸 0.802L-亮氨酸 0.802L-賴氨酸-HCl 0.798L-甲硫氨酸 0.201L-苯基丙氨酸 0.400L-絲氨酸 0.400L-蘇氨酸 0.078L-色氨酸 0.078
L-酪氨酸2Na2H2O 0.398L-纈氨酸0.803維生素D-泛酸鈣0.0083膽堿氯化物 0.0285葉酸0.00906異(i)-纖維醇0.04煙酰胺 0.0328鹽酸吡哆醇 0.0196核黃素 0.00106鹽酸硫胺素 0.0118肝細(xì)胞在醋酸纖維培養(yǎng)基上分泌的膽固醇和膽固醇酯使用熒光指示劑Amplex Red進(jìn)行測(cè)量。如附圖l所示，很顯然粉碎的drymifolia葉子降低膽固醇的效果與Lipitor的效果相當(dāng)。結(jié)果還顯示當(dāng)分別用水萃取時(shí)，平均粒徑約11微米的粉碎的drymifolia葉子比手工破碎的drymifolia葉子的效果要好。當(dāng)利用MTT(3-[4，5二甲基噻唑-2基]-2，5-二苯基四唑溴化物，Sigma，St.Louis，MO)還原測(cè)試來評(píng)估細(xì)胞存活后處理時(shí)，肝細(xì)胞的反應(yīng)還顯示出治療用的劑量很少或者沒有毒性。
圖2表示粉碎的drymifolia葉子與粉碎的Haas和Nabal葉子的效果的比較。圖2顯示drymifolia葉子在降低膽固醇的合成/分泌方面比Haas和Nabal葉子效果更好。
如圖3所示，將Haas果實(shí)抑止膽固醇的效果和粉碎的drymifolia葉子進(jìn)行比較時(shí)，粉碎的葉子再次顯示出比果實(shí)更好的效果。
上述說明只是目前認(rèn)為優(yōu)選的實(shí)施例而已，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)意識(shí)到只要不脫離本發(fā)明的精神可以進(jìn)行變動(dòng)和修正。所有的落入本發(fā)明實(shí)質(zhì)范圍內(nèi)的變化和修正都在權(quán)利要求之內(nèi)。
權(quán)利要求書(按照條約第19條的修改)1、一種用于降低膽固醇水平的組合物，含有占所述組合物總重量的約0.01％-約0.05％的鱷梨的德里密佛列種的葉子，其中所述德里密佛列的葉子平均粒徑約為9-28微米。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的組合物為含有德里密佛列的葉子的飲料。
3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的組合物為食品添加劑。
4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的組合物降低總血液膽固醇的水平約為10％到40％。
5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的鱷梨的德里密佛列種的葉子平均粒徑約為11微米。
6、根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的鱷梨的德里密佛列種的葉子約占所述組合物總重量的0.04％。
7、一種用于降低膽固醇水平、含有約0.1mg/ml-0.5mg/ml的鱷梨的德里密佛列種的葉子的茶。
8、一種降低膽固醇水平的方法，包括給對(duì)象施用有效量的鱷梨的德里密佛列種的葉子。
9、根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述鱷梨的德里密佛列種的葉子降低總血液膽固醇的水平約為10％-35％。
10、根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述有效量的鱷梨的德里密佛列種的葉子約為0.01％-0.05％。
11、一種制備用于降低膽固醇的組合物的方法，包括如下步驟(a)將鱷梨的德里密佛列種的葉子脫水；(b)粉碎所述葉子至平均粒徑約為9-28微米；和(c)將約為0.1mg/ml-0.5mg/ml的所述粉碎的葉子在沸水中加熱。
權(quán)利要求
1.一種用于降低膽固醇水平的組合物，含有有效量的鱷梨的德里密佛列種的葉子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的組合物為茶的形式。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的組合物為食品添加劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的組合物降低總血液膽固醇的水平約為10％到40％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的鱷梨的德里密佛列種的葉子平均粒徑約為11微米。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的鱷梨的德里密佛列種的葉子以約0.01％-約0.05％的量存在。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的鱷梨的德里密佛列種的葉子以約0.04％的量存在。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的茶，其中所述的鱷梨的德里密佛列種的葉子平均粒徑約為9-28微米。
9.一種含有約0.1mg/ml-0.5mg/ml的鱷梨的德里密佛列種的葉子的茶。
10.一種降低膽固醇水平的方法，包括給對(duì)象施用有效量的鱷梨的德里密佛列種的葉子。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述鱷梨的德里密佛列種的葉子降低總血液膽固醇的水平約10％-約35％。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中所述有效量的鱷梨的德里密佛列種的葉子約為0.01％-0.05％。
13.一種制備用于降低膽固醇的組合物的方法，包括如下步驟(a)將鱷梨的德里密佛列種的葉子脫水；(b)將葉子粉碎到平均粒徑約為9-28微米；和(c)將約為0.1mg/ml-0.5mg/ml的粉碎的葉子在沸水中加熱。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于降低膽固醇水平的含有Persa american Var.drymifolia的組合物。
文檔編號(hào)A61KGK1681523SQ03822055
公開日2005年10月12日 申請(qǐng)日期2003年7月31日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月31日
發(fā)明者E·A·布羅韋利, J·A·瓦雷約斯, H·盧－施密特 申請(qǐng)人:愛克斯國(guó)際商務(wù)集團(tuán)公司