本發(fā)明涉及醫(yī)藥，具體涉及涉及一種用于靶向cd44v6放射性藥物及其制備方法和用途。

背景技術(shù)：

1、在現(xiàn)有技術(shù)中，cd44是一組復(fù)雜的跨膜粘附糖蛋白，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和膜近側(cè)區(qū)，是上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(emt)關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，另外cd44還參與c-met、vegfr-2、ron等多個(gè)受體酪氨酸激酶通路的信號(hào)傳導(dǎo)。cd44作為i型跨膜糖蛋白，首先結(jié)合透明質(zhì)酸，引發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑，繼而導(dǎo)致了一系列細(xì)胞脫落、轉(zhuǎn)移、侵襲反應(yīng)。cd44表達(dá)于人的多種細(xì)胞，包括胚胎干細(xì)胞、分化細(xì)胞和癌細(xì)胞等。cd44在轉(zhuǎn)錄過程中不同的選擇性剪接，產(chǎn)生cd44的兩種亞型，包括標(biāo)準(zhǔn)亞型(cd44s)和cd44變異亞型(cd44v)。cd44是公認(rèn)的腫瘤干細(xì)胞的標(biāo)志物，cd44v6是其中的一種變異體，參與與周圍細(xì)胞和間質(zhì)成分的粘附作用、淋巴細(xì)胞歸巢和t淋巴細(xì)胞活化。已有研究報(bào)道cd44v6在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、卵巢癌等高表達(dá)，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

2、雖然常規(guī)活檢與免疫組織化學(xué)染色和血液學(xué)生物標(biāo)記物等檢測(cè)方法已廣泛應(yīng)用于cd44v6表達(dá)的檢測(cè)，但是由于在原發(fā)性腫瘤和轉(zhuǎn)移瘤中cd44v6表達(dá)的高度異質(zhì)性和時(shí)空表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化，這些常規(guī)檢測(cè)手段并不能完全準(zhǔn)確及全面的評(píng)估cd44v6的真實(shí)表達(dá)變化。近年來隨著核醫(yī)學(xué)分子影像技術(shù)的快速發(fā)展，該技術(shù)可以從活體分子水平無創(chuàng)地、定量和可視化動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)相關(guān)免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)，為cd44v6表達(dá)水平提供更精確、實(shí)時(shí)、全面的信息，進(jìn)而來篩選適合cd44v6免疫治療的患者及對(duì)療效進(jìn)行預(yù)估。

3、目前報(bào)道的靶向cd44v6的顯像和/或治療探針只有放射性核素標(biāo)記的抗體類探針68ga-hbed-cc和89zr-anti-cd44，抗體類探針主要存在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間久，對(duì)病人的輻照射時(shí)間長(zhǎng)，不利于cd44v6靶向診斷和治療。因此開發(fā)理化性質(zhì)和顯像和/或治療效果更優(yōu)的靶向cd44v6的多肽類和小分子類顯像探針具有重要的臨床意義和社會(huì)價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種用于cd44v6特異性顯像的多肽放射性藥物及其制備方法和用途，該藥物制備成本低、體內(nèi)外穩(wěn)定性好，具有良好的腫瘤顯像效果。

2、本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

3、本發(fā)明的第一方面提供了一種用于靶向cd44v6的多肽放射性藥物，所述藥物由放射性核素通過雙功能螯合劑標(biāo)記多肽形成，

4、其中，所述多肽結(jié)構(gòu)為cda6，如式(i)所示：

5、

6、其中，所述放射性核素選自18f、64cu、68ga、89zr、177lu或225ac中的任意一種或幾種；

7、所述雙功能螯合劑選自dota、nota、teta、dotaga、dotma、dotam、notaga、p-scn-bn-dota、p-scn-bn-nota、dota-nhs、nota-nhs、teta-nhs、dotaga-nhs、notaga-nhs或其衍生物中的任意一種或幾種；

8、本發(fā)明的第二方面提供了一種用上述于靶向cd44v6的多肽放射性藥物制備方法，包括以下步驟：

9、s1雙功能螯合劑-cda6的制備：將多肽cda6溶于適宜溶劑中，然后加入適量堿性試劑調(diào)節(jié)ph為弱堿性，加入所述多肽質(zhì)量1.1～20倍當(dāng)量的雙功能螯合劑，混勻后室溫反應(yīng)2～24h，將反應(yīng)混合溶液通過hplc進(jìn)行分離純化，收集產(chǎn)物峰，將收集到的產(chǎn)物峰液體進(jìn)行凍干，獲得白色粉末即雙功能螯合劑-cda6；

10、s2放射性核素-雙功能螯合劑-cda6的制備：將步驟s1所得的雙功能螯合劑-cda6溶解在溶于適宜溶劑中，加入弱酸性緩沖液調(diào)節(jié)ph至弱酸性，然后向其中加入1mci～2ci的放射性核素，80～120℃水浴加熱10～30min，制成放射性核素-雙功能螯合劑-cda6；

11、進(jìn)一步的，步驟s1或s2中，所述適宜溶劑選自注射用水、乙醇、dmso、dmf中的任意一種或幾種；

12、進(jìn)一步的，步驟s1中，所述堿性試劑為三乙醇胺(tea)、n,n'-二異丙基乙胺(diea)或二甲基氨基嘧啶(dmap)；

13、進(jìn)一步的，步驟s1中，所述hplc為半制備hplc方法，色譜條件包括：流動(dòng)相：a相有機(jī)相為含有0.1％v/v三氟乙酸的乙腈；b相水相為0.1％w/w三氟乙酸水溶液；洗脫條件：第0分鐘：a相為0％v/v，b相為100％v/v；第2分鐘：a相為0％v/v，b相為100％v/v；第12分鐘：a相為98％v/v，b相為2％v/v；第13.5分鐘：a相為98％v/v，b相為2％v/v；14分鐘：a相為0％v/v，b相為100％v/v；第15分鐘停止洗脫；

14、進(jìn)一步的，步驟s1中，所述產(chǎn)物峰的保留時(shí)間范圍在5～11分鐘；

15、進(jìn)一步的，步驟s2中，所述弱酸性試劑為濃度0.5～2mol/l的naac緩沖液；

16、進(jìn)一步的，當(dāng)放射性核素為64cu、68ga、89zr、177lu或225ac，所述步驟s2包括以下步驟：將步驟s1所得的雙功能螯合劑-cda6溶解在溶于適量無菌注射用水中，加入濃度為0.5～2mol/lnaac緩沖液調(diào)節(jié)ph至4.0～6.5，然后向其中加入5mci～2ci的放射性核素離子，80～120℃水浴加熱10～30min，冷卻至常溫，制成放射性核素64cu、68ga、89zr、177lu或225ac-雙功能螯合劑-cda6；

17、或者進(jìn)一步的，當(dāng)放射性核素為18f，所述步驟s2包括以下步驟：將s1獲得的雙功能螯合劑-cda6與alcl3溶液以及1mci～2ci放射性核素離子混合，調(diào)節(jié)ph至3.8～6.5，于80～120℃下反應(yīng)10～30min，冷卻至常溫，制成放射性核素18f-雙功能螯合劑-cda6，其中，所述雙功能螯合劑-cda6與alcl3溶液按照20～300μg雙功能螯合劑-cda6：0.004～0.04mmol的alcl3進(jìn)行配比；

18、本發(fā)明的第三方面提供一種檢測(cè)試劑，包含上述任一種用于靶向cd44v6的多肽類放射性藥物；

19、本發(fā)明的第四方面提供上述任一種用于靶向cd44v6的多肽類放射性藥物在制備治療靶向cd44v6的pet或spect顯像探針或/和治療性放藥中的用途。

20、對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步形象描述，放射性核素通過雙功能螯合劑標(biāo)記cda6多肽(cda6多肽為6個(gè)氨基酸組成的直鏈結(jié)構(gòu))，該放射性藥物在活體內(nèi)通過多肽cda6對(duì)cd44v6的特異性識(shí)別實(shí)現(xiàn)對(duì)cd44v6陽性腫瘤或者cd44v6陽性病變(自身免疫性疾病、心腦血管系統(tǒng)疾病等)的特異性核醫(yī)學(xué)正電子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層(positron?emission?tomography，pet)顯像診斷，該形成的放射性核素-雙功能螯合劑標(biāo)記cda6多肽結(jié)構(gòu)示意圖如圖1所示，其中，由式(i)所示多肽cda6多肽與dota、nota或二者衍生物以及放射性核素反應(yīng)獲得，○代表dota或nota衍生物，代表放射性核素。

21、有益效果

22、本發(fā)明的cd44v6靶向多肽cda6為由共6個(gè)氨基酸組成的多肽，通過結(jié)構(gòu)改造，預(yù)留出能夠和雙功能螯合基團(tuán)縮合的氨基，實(shí)現(xiàn)功能的改變，將常規(guī)化療藥物改造成了核醫(yī)學(xué)分子影像探針，從而拓展了其應(yīng)用領(lǐng)域。多肽cda6通過預(yù)留的氨基和特定dota、nota或其衍生物偶聯(lián)后以它們作為雙功能螯合劑將放射性核素18f、64cu、68ga、89zr、177lu或225ac標(biāo)記到該多肽分子上，從而在體內(nèi)通過多肽與cd44v6的特異性識(shí)別，將放射性核素載帶到高表達(dá)cd44v6的病變部位，例如發(fā)生腫瘤、炎癥、創(chuàng)傷、纖維化的部位等，利用核醫(yī)學(xué)pet或spect顯像技術(shù)對(duì)病變進(jìn)行無創(chuàng)和實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的顯像診斷。

23、通過該診斷，可以篩選出對(duì)cd44v6高表達(dá)的患者，對(duì)于使用抗體藥物治療該疾病具有積極的指導(dǎo)作用，不僅降低了患者使用藥物的盲目性，而且也從臨床角度收集到了cd44v6高表達(dá)患者病例數(shù)據(jù)，對(duì)于該靶點(diǎn)的進(jìn)一步研究、開發(fā)新的治療性藥物具有積極的指導(dǎo)意義。