本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，具體涉及紅景天來源的外泌體rhnvs及其在制備治療角膜炎藥物中的應用；本發(fā)明還提供了制備所述rhnvs的方法。

背景技術：

1、病毒性角膜炎(hsk)是一種多由單純皰疹病毒感染引起的威脅生命的臨床綜合征，全身炎癥反應的嚴重失調(diào)是導致致死率高和不良預后的主要原因。角膜移植是hsk最有效的治療手段，但由于供體缺乏、手術禁忌癥以及嚴重并發(fā)癥等原因，許多患者面臨治療的難題。因此，研究開發(fā)有效治療病毒性角膜炎的藥物和治療措施勢在必行。

2、外泌體(exosome)是一類由細胞分泌的具有膜結構的納米級小囊泡，直徑通常在30-150nm之間。它們通過攜帶蛋白質、核酸(如mrna、mirna)、脂質等生物分子，介導細胞間的物質和信息交換。近年來，越來越多的證據(jù)表明，植物中也存在類似外泌體的囊泡。植物來源的外泌體與動物外泌體在形態(tài)和結構上相似，均具有磷脂雙分子層結構，含有蛋白質和微小rna，呈茶托狀或杯狀，其形態(tài)可通過透射電子顯微鏡進行觀察。由于天然來源和成分，植物來源的納米囊泡具有廣泛的免疫特權和更高的安全性，使其在體內(nèi)的循環(huán)時間更長，且具有更高的靶向性和生物利用度。

3、紅景天無毒性，效力廣泛而強大，其活性成分(如紅景天苷、酪醇、酚類化合物等)具有多種生物學效應，廣泛用于臨床應用。常用于緩解疲勞，適用于術后康復或高原反應等場景。能通過調(diào)節(jié)細胞因子網(wǎng)絡，增強免疫功能，降低慢性炎癥水平。能清除自由基，減輕氧化應激，有助于預防動脈粥樣硬化和心血管疾病。具有潛在的抗腫瘤作用，能抑制癌細胞的增殖并誘導其凋亡，同時減輕放化療帶來的不良反應。紅景天的提取物被研究用于病毒性疾病的輔助治療，顯示出抗病毒感染的潛力。而rhnvs的制備和應用，目前只被應用于抗纖維化及阿爾茲海默癥中，對于抗病毒治療的文獻較少，尤其是在hsk治療上的應用的研究尚未有報道。因此，研究開發(fā)能夠用于病毒性角膜炎等疾病治療的rhnvs成為急需研究的課題。

技術實現(xiàn)思路

1、為了解決上述現(xiàn)有技術的問題，本發(fā)明提供了紅景天來源的外泌體rhnvs在制備治療病毒性角膜炎的產(chǎn)品中的應用，本發(fā)明同時提供了一種提取和純化rhnvs的新方法。

2、具體地：

3、本發(fā)明提供了紅景天來源的外泌體rhnvs在制備治療病毒性角膜炎的產(chǎn)品中的應用。

4、所述產(chǎn)品的形式包括但不限于藥物、保健食品、特殊醫(yī)學用途食品、功能性食品、滴眼液、眼用凝膠或眼用乳劑中的一種或多種。

5、所述病毒性角膜炎的類型包括但不限于單純皰疹病毒性角膜炎、腺病毒性角膜炎和帶狀皰疹病毒性角膜炎。

6、所述外泌體rhnvs是從紅景天植物組織中分離提取的，外泌體的囊泡形態(tài)為圓形或杯狀，并具有雙層膜結構，納米囊泡的大小集中分布于50-200nm范圍內(nèi)。

7、所述外泌體rhnvs的制備方法包括以下步驟：

8、步驟1：取紅景天植物的根及根莖，清洗后破碎成粉末，加入緩沖液制成汁液，并通過過濾去除大顆粒雜質；

9、步驟2：將過濾后的汁液通過高速離心法、純化儀純化法、過濾器法中的單獨或組合處理進行分離純化，得到rhnvs。

10、優(yōu)選地，所述外泌體rhnvs的制備方法包括以下步驟：

11、1)勻漿粗提：稱取紅景天植物塊莖，粉碎機粉碎成細粉狀，過篩，加入緩沖液，少量、多次勻漿，過濾殘渣；

12、2)對濾液反復進行高速低溫離心三次，棄離心管底部殘渣，直至高速離心后管子底部無肉眼可見沉淀，即為粗提產(chǎn)物，然后過柱處理：安裝750kd膜柱，將粗提產(chǎn)物注入純化儀加樣槽，冰浴中收集經(jīng)過750kd膜柱的液體，收集截留的液體，截留的液體經(jīng)0.45μm的過濾器過濾，即制備得rhnvs。

13、優(yōu)選地，所述緩沖液為預冷的pbs。

14、本發(fā)明的有益效果如下：本發(fā)明提供了紅景天來源的外泌體rhnvs在抗病毒性角膜炎中的應用，本發(fā)明的rhnvs能夠顯著減輕病毒性角膜炎引起的炎癥，改善角膜眼表的混濁與破損情況，因此，rhnvs有望成為一種創(chuàng)新的藥物，用于有效緩解和治療病毒性角膜炎，從而為未來臨床診斷和治療病毒性角膜炎提供了重要的技術支持和應用前景。此外，本發(fā)明還提供了一種簡便、原料易得、產(chǎn)率高且成本低的rhnvs的制備方法，具有較好的商業(yè)化應用前景。

技術特征：

1.紅景天來源的外泌體rhnvs在制備治療病毒性角膜炎的產(chǎn)品中的應用。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述產(chǎn)品的形式包括但不限于藥物、保健食品、特殊醫(yī)學用途食品、功能性食品、滴眼液、眼用凝膠或眼用乳劑中的一種或多種。

3.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述病毒性角膜炎的類型包括但不限于單純皰疹病毒性角膜炎、腺病毒性角膜炎和帶狀皰疹病毒性角膜炎。

4.如權利要求1所述的應用，其特征在于所述外泌體rhnvs是從紅景天植物組織中分離提取的，外泌體的囊泡形態(tài)為圓形或杯狀，并具有雙層膜結構，納米囊泡的大小集中分布于50-200nm范圍內(nèi)。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述外泌體rhnvs的制備方法包括以下步驟：

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于所述外泌體rhnvs的制備方法包括以下步驟：

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述緩沖液為預冷的pbs。

技術總結
本發(fā)明提供了紅景天來源的外泌體RHNVs在制備治療病毒性角膜炎的產(chǎn)品中的應用。具體地，本發(fā)明的RHNVs能夠顯著減輕病毒性角膜炎引起的炎癥，改善角膜眼表的混濁與破損情況。因此，RHNVs有望成為一種創(chuàng)新的藥物，解決病毒性角膜炎的臨床治療問題。此外，本發(fā)明還提供了一種簡便、原料易得、產(chǎn)率高且成本低的RHNVs的制備方法，具有較好的商業(yè)化應用前景。

技術研發(fā)人員：徐英霞,沈麗君,徐小剛,陳亦棋,吳丹君
受保護的技術使用者：浙江工業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15