本發(fā)明涉及胸腺五肽、鹽霉素與ir780碘化物聯(lián)合使用在制備治療抑制腫瘤干性的藥物中的用途，以及一種抑制腫瘤干性的納米載藥平臺，屬于藥物領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、腫瘤干細胞（cancer?stem?cells,?cscs）因其自我更新、多向分化潛能以及在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、耐藥和復發(fā)中的重要作用，被認為是導致腫瘤治療失敗的關(guān)鍵因素。癌癥免疫治療是臨床上最有前景的治療方式之一，其潛力在于提高治療效果，減少轉(zhuǎn)移和預防復發(fā)。特別是，臨床上使用的免疫調(diào)節(jié)劑胸腺五肽（胸腺五肽）有效促進了樹突狀細胞的分化，并增強了成熟t細胞的功能，從而增強了抗腫瘤免疫力。然而，由于胸腺五肽極好的水溶性和高ic50，導致其釋放行為不受控制，需要高負荷效率才能實現(xiàn)高劑量。此外，一小部分癌類干細胞對t細胞不敏感，這削弱了t細胞介導的免疫治療效果，并導致癌癥的轉(zhuǎn)移和復發(fā)。因此，抑制腫瘤干性可以作為一種潛在的治療策略，有效地增敏癌癥免疫治療。

2、由于胸腺五肽水溶性高且半衰期短，限制了其臨床應用，有研究將其與化療藥物阿霉素（dox）共組裝成無載體、可注射的化療免疫治療納米凝膠。這種納米凝膠通過氫鍵位點實現(xiàn)共組裝，保證了tp5和dox的高載藥量，并實現(xiàn)了位點特異性和受控釋放，從而增強了癌癥免疫循環(huán)（ning?ding?，通過增強癌癥免疫循環(huán)對抗黑色素瘤轉(zhuǎn)移，無載體遞送胸腺五肽調(diào)節(jié)的可注射納米凝膠，doi:?10.1016/j.mtbio.2023.100645），該文獻以水凝膠為載體，實現(xiàn)了胸腺五肽的可控釋放。但主要是依賴傳統(tǒng)化療藥物多柔比星（dox）實現(xiàn)的腫瘤殺傷，胸腺五肽僅作為改善預后的手段；雖然解決了胸腺五肽易水解的臨床問題，但并沒有將天然免疫激活與特異性免疫增強結(jié)合實現(xiàn)增敏腫瘤免疫治療的設計。該文獻中水凝膠也沒有解決多柔比星和胸腺五肽對隱藏病灶和轉(zhuǎn)移灶的靶向性（只是在水凝膠注射部位可控釋放，遠端病灶靶向性較差）；在眾多針對腫瘤干性的小分子抑制劑中，鹽霉素（salinomycin）是一種羧酸離子抗生素，顯示出對多藥耐藥（mdr）癌細胞的選擇性活性。從機制上講，鹽霉素可以有效調(diào)節(jié)wnt信號通路，并針對各種與干細胞相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子，如β-catenin和sox2。因此，鹽霉素選擇性地減少了乳腺癌干性的生存能力，其效力幾乎是傳統(tǒng)化療藥物紫杉醇的100倍。然而，鹽霉素的水溶性差和有限的傳遞效率顯著限制了其臨床應用。因此，迫切需要開發(fā)一種多功能的納米平臺，共同傳遞胸腺五肽和鹽霉素，以改善它們的生物利用度并增敏癌癥免疫治療。

3、顯著的是，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也被認為是抑制癌細胞干性和調(diào)節(jié)抗腫瘤免疫反應的關(guān)鍵細胞器。一方面，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激條件下，減少的鈣離子攝取抑制了下游的wnt信號通路，從而抑制了癌細胞干性的維持。另一方面，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可以有效地磷酸化程序化細胞死亡配體1（pd-l1），使pd-l1蛋白降解，從而顯著減少調(diào)節(jié)性t細胞（treg）介導的免疫抑制。此外，這種過度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激還被證明在激活cgas-sting通路方面起著重要作用，從而增強了抗腫瘤免疫。值得注意的是，鹽霉素可以促進活性氧（ros）的產(chǎn)生，從而觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激。

4、ir780碘化物是一種具有強烈光學特性和優(yōu)異光轉(zhuǎn)換效率的小分子，特別是在近紅外（nir）照射下，它在癌癥治療和成像領(lǐng)域引起了廣泛關(guān)注。ir780納米粒因其在近紅外區(qū)域的吸收和光熱轉(zhuǎn)換能力而被廣泛研究，它們在癌癥成像和光熱、光動力治療中展現(xiàn)出巨大的應用前景。ir780納米粒在腫瘤光熱治療中的應用表現(xiàn)出極好的光熱效果和優(yōu)異的選擇性毒性，同時也展示出良好的生物相容性和安全性。實驗結(jié)果證實，ir780在近紅外照射下具有很強的光學性質(zhì)和優(yōu)異的光轉(zhuǎn)化效率，從而引發(fā)腫瘤細胞的凋亡。在體外實驗中，隨著ir780納米粒濃度的增加，腫瘤細胞的存活率顯著下降；在體內(nèi)實驗中，ir780也顯著抑制了裸鼠體內(nèi)腫瘤的生長（毋揚菁，等，ir780?納米粒在腫瘤光熱治療中的應用及其醫(yī)療前景，國際臨床醫(yī)學?:2023?年?5?卷?4?期）

5、鹽霉素和ir780碘化物均具有疏水性，限制了它們的臨床應用。有研究將sal和ir780封裝在上轉(zhuǎn)換納米顆粒（ucnp）表面，形成負載sal和ir780的ucnp（uisp）。該納米平臺在近紅外光照射下表現(xiàn)出強大的光熱效應，并能有效抑制肝癌干細胞（lcsc）的活力和遷移（?鹽霉素和負載ir780的上轉(zhuǎn)換納米顆粒通過持續(xù)激活mapk信號通路影響肝癌干細胞的生物學行為，doi:?10.1016/j.yexcr.2023.113865），該文獻著重于利用鹽霉素抑制干性的能力，以及光熱治療激活mapk通路，實際上只是基于增強鹽霉素對于“耐藥的腫瘤干細胞”的減毀設計的藥物。且該文獻使用了上轉(zhuǎn)換納米粒子（ucnps，一類新興的熒光探針材料，能夠在低能量近紅外光的激發(fā)下發(fā)射高能光子）作為載體；且作者聲稱其靶向性是由載體所承載的葉酸實現(xiàn)的，二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（dspe-peg）僅作為包封劑。

6、目前，對cgas?sting通路參與有效免疫治療的理解主要圍繞線粒體或細胞核調(diào)節(jié)的作用。盡管如此，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（er）應激在激活cgas?sting機制以增強對腫瘤的免疫力方面的作用基本上仍未得到探索。在這項研究中，證明er應激可以作為刺激cgas-sting通路的策略，從而增強對癌癥的免疫反應（zhang?k,?qi?c,?cai?k.?manganese-based?tumorimmunotherapy.?adv?mater?2023;35:e2205409、21.?lv?m,?chen?m,?zhang?r,?zhang?w,wang?c,?zhang?y,?et?al.?manganese?is?critical?for?antitumor?immune?responsesvia?cgas-sting?and?improves?the?efficacy?of?clinical?immunotherapy.?cell?res2020;30:966-79、22.samson?n,?ablasser?a.?the?cgas-sting?pathway?and?cancer.nat?cancer?2022;3:1452-63）。為了實現(xiàn)這一目標，合成了靶向er的對甲苯磺酰胺定制ir780（p-780），并將其裝載到cao2納米顆粒中，這些納米顆粒進一步用dspe-peg-生物素官能化形成peg/cao2@p-780np。鈣穩(wěn)態(tài)的破壞，加上p-780介導的活性氧（ros）水平的升高，以及高熱，共同導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（er）應激的放大。這一連串的事件有效地觸發(fā)了cgas?sting通路的觸發(fā)，同時促進了pd-l1蛋白的降解。此外，通過cao2分解釋放的氧氣有望促進p-780介導的光療，同時逆轉(zhuǎn)與缺氧相關(guān)的免疫抑制腫瘤微環(huán)境。此外，dspe-peg-生物素通過生物素受體介導的主動靶向促進腫瘤位點特異性藥物遞送?？偟膩碚f，peg/cao2@p-780納米粒子通過增強內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激成功激活了全身抗腫瘤免疫。這種方法為激活cgas?sting通路提供了一種替代策略，有機會徹底改變腫瘤的免疫療法。該文獻側(cè)重于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和下游免疫激活事件的研究，并沒有有目的性的使用特異性免疫增強藥物和針對腫瘤干性細胞的藥物，且依托于近紅外光照引發(fā)的光熱光動力治療和氧氣釋放改善乏氧微環(huán)境，因此只能用于乳腺癌（轉(zhuǎn)移前）和黑色素瘤等可以光療的淺表腫瘤。

7、目前尚無將胸腺五肽、鹽霉素、ir780碘化物聯(lián)合使用用于抑制腫瘤干性的報道，更無將其制備成遞送納米平臺。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明開發(fā)了以鹽霉素為基礎(chǔ)，用于誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的納米誘導劑（dtss?nps），以協(xié)同抑制癌細胞的干細胞特性。通過這種方式，顯著激活了系統(tǒng)免疫，抑制了癌癥的轉(zhuǎn)移和復發(fā)，為提高癌癥免疫治療的敏感性提供了有希望的解決方案。

2、本發(fā)明提供了胸腺五肽、鹽霉素與ir780碘化物聯(lián)合使用在制備治療抑制腫瘤干性的藥物中的用途。

3、其中，所述的藥物是增敏癌癥免疫治療的藥物。

4、其中，所述的胸腺五肽、鹽霉素與ir780碘化物的質(zhì)量比為：

5、胸腺五肽2-6份、鹽霉素0.5-1.5份、ir780碘化物1-3份。

6、優(yōu)選地，所述的胸腺五肽、鹽霉素與ir780碘化物的質(zhì)量比為：

7、胸腺五肽4份、鹽霉素1份、ir780碘化物2份。

8、本發(fā)明還提供了一種抑制腫瘤干性的藥物組合物，它是含有胸腺五肽、鹽霉素與ir780碘化物為活性成分制備而成的制劑，胸腺五肽、鹽霉素與ir780碘化物的質(zhì)量比為：

9、胸腺五肽2-6份、鹽霉素0.5-1.5份、ir780碘化物1-3份。

10、優(yōu)選地，所述的胸腺五肽、鹽霉素與ir780碘化物的用量配比為：

11、胸腺五肽4份、鹽霉素1份、ir780碘化物2份。

12、本發(fā)明藥物組合物是通過偶聯(lián)對甲苯磺酰胺和ir780碘化物（ir780）制備成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)靶向的光療藥物s-780，并與胸腺五肽和鹽霉素共同組裝，最后用生物素包裹，制備成特定位點的遞送納米平臺（dtss）。

13、本發(fā)明還提供了一種所述的抑制腫瘤干性的藥物組合物的制備方法，所述的遞送納米平臺（dtss）的制備工藝包括如下步驟：

14、a、s-780的合成：

15、取p-甲苯磺酰胺、ir780碘化物溶解在n,n-二甲基甲酰胺dmf中；加入三乙胺tea，在85℃下磁力攪拌4小時，同時避光并在氮氣氛圍下以確保反應穩(wěn)定；之后，混合物冷卻至室溫并在減壓下蒸發(fā)以除去溶劑；

16、b、dtss的合成：

17、取a步驟制備的s-780柱層析提純后，與鹽霉素共同溶解于無水甲醇中；加入胸腺五肽飽和水溶液，同時應用超聲波，并使用移液管持續(xù)吹動并溶解膜以加速溶解，離心收集tss納米粒子，用雙蒸水洗滌；將得到的tss納米粒子懸浮在雙蒸水中，備用；取生物素溶解在無水甲醇中，加入tss納米粒子水溶液，并至少超聲波8分鐘，在低溫真空蒸發(fā)溶劑后，將混合物在去離子水中使用超聲波分散，即得遞送納米平臺（dtss）；

18、所述的超聲波分散的功率為100-200?w；采用脈沖模式，工作2秒，暫停1秒。

19、其中，a步驟所述的p-甲苯磺酰胺與ir780的摩爾比為：2：1；b步驟所述的生物素為dspe-peg2000-biotin。

20、本發(fā)明還提供了所述的藥物組合物在制備抑制腫瘤干性的藥物中的用途。

21、本發(fā)明提出的一種以鹽霉素為基礎(chǔ)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激納米誘導劑（dtss），以協(xié)同抑制癌細胞干性，有效增敏癌癥免疫治療。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)靶向的光療藥物s-780通過偶聯(lián)對甲苯磺酰胺和ir780碘化物（ir780）制備，并與胸腺五肽和鹽霉素共同組裝，最后用生物素功能化，獲得特定位點的遞送納米平臺（dtss）。

22、本發(fā)明利用dspe-peg-bio的靶向性，靶向?qū)⑿叵傥咫?、鹽霉素、s780釋放到病灶，以極低的給藥量實現(xiàn)最優(yōu)的治療效果，且所用藥物原料毒性較低，無需像多柔比星嚴格控制使用劑量，毒負效果幾乎為零，安全可靠。本發(fā)明使用鹽霉素、胸腺五肽和ir780衍生物（使用對甲基苯磺酰胺實現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)靶向，有效增強光熱光動力的同時通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激引發(fā)一系列下游事件）實現(xiàn)了自組裝，不需要額外使用載體，這有效提高了載藥率。側(cè)重點為光熱光動力殺傷大部分腫瘤細胞后，激活天然免疫（激活cgas-sting通路，釋放內(nèi)容物引發(fā)免疫原性死亡），解除免疫抑制（降解pd-l1等免疫抑制分子）；同時胸腺五肽激活特異性免疫，進一步增敏腫瘤免疫治療。在腫瘤免疫治療的基礎(chǔ)上，鹽霉素抑制腫瘤干性，并協(xié)同光療有效清除殘留的腫瘤干性細胞，作為免疫治療的有效補充以實現(xiàn)改善預后（抑制轉(zhuǎn)移和復發(fā)）的預期。

23、本技術(shù)的載藥平臺由于同時具有增敏免疫治療和抑制干性樣細胞的能力，對于難以光療的腫瘤病灶也有一定的療效。這種納米平臺不僅改善了胸腺五肽和鹽霉素的生物利用度，還確保了藥物釋放的控制和減少了治療劑的副作用。值得注意的是，s-780介導的光療與鹽霉素介導的癌細胞干性抑制協(xié)同作用，伴隨著程序化細胞死亡1配體1（pd-l1）表達的下調(diào)和cgas-sting通路的激活。此外，胸腺五肽顯著促進了樹突狀細胞（dcs）和t淋巴細胞的增殖和分化，從而增強了免疫活性細胞對癌細胞的響應。結(jié)果顯示，本發(fā)明dtss納米粒子有效激活了系統(tǒng)性抗腫瘤免疫反應，抑制了癌癥的轉(zhuǎn)移和復發(fā)，為通過抑制癌細胞干性增敏癌癥免疫治療提供了有希望的解決方案。