本發(fā)明大體上涉及豬抗體突變體及其用途。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及豬抗體的fc恒定區(qū)中用于改善各種特性的一個(gè)或多個(gè)突變。

背景技術(shù)：

1、豬igg單克隆抗體(mab)在獸醫(yī)學(xué)中可以是有效的治療劑。幾年前，鑒定出六種豬igg亞類。然而，在改善豬igg的特性方面只做了有限的工作。

2、通過循環(huán)機(jī)制，新生兒fc受體(fcrn)在與igg片段可結(jié)晶(fc)區(qū)的ph依賴性相互作用中延長(zhǎng)了igg的半衰期。具體地，跨越ch2和ch3結(jié)構(gòu)域的界面的fc區(qū)與fcrn在細(xì)胞的表面上相互作用以調(diào)節(jié)igg內(nèi)穩(wěn)態(tài)。igg胞飲后的酸性相互作用有利于這種相互作用，并且由此保護(hù)igg免受降解。然后，內(nèi)吞的igg再循環(huán)回到細(xì)胞表面，并且在略微堿性ph下釋放至血流中，由此維持足夠的血清igg以實(shí)現(xiàn)正常功能。因此，igg的藥代動(dòng)力學(xué)概況取決于其fc區(qū)的結(jié)構(gòu)和功能特征。

3、使fc區(qū)工程化以調(diào)整其與fcrn的相互作用已成為用于增強(qiáng)治療性抗體的活性的有前途的方法。

4、因此，需要新的豬igg?fc區(qū)突變來(lái)改善豬igg的各種特性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明涉及相對(duì)于野生型豬igg表現(xiàn)出期望特性的突變體豬igg。具體地，本申請(qǐng)的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，用另一種氨基酸取代位置233、234、235、236、238、252、254、256、265、286、293、297、307、311、312、322、329、330、331、378、426、428、434或436(根據(jù)如kabat中的eu索引編號(hào))處的氨基酸殘基令人驚訝地且出乎意料地表現(xiàn)出期望的效果。在示例性實(shí)施例中，意外的期望效果包括但不限于對(duì)fcrn的親和力增強(qiáng)以及效應(yīng)功能的變化。

2、在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種經(jīng)修飾的igg，其包含：豬igg恒定結(jié)構(gòu)域，該豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含相對(duì)于野生型豬igg恒定結(jié)構(gòu)域的至少一個(gè)氨基酸取代，其中所述取代是在氨基酸殘基233、234、235、236、238、252、254、256、265、286、293、297、307、311、312、322、329、330、331、378、426、428、434或436處。

3、在一個(gè)示例性實(shí)施例中，該豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含突變e233p、g234a、v234a、a235l、p235l、p235a、g236a、g236l、p238a、m252a、m252c、m252d、m252e、m252f、m252g、m252h、m252i、m252k、m252l、m252n、m252p、m252q、m252r、m252s、m252t、m252v、m252w、m252y、s254t、t256e、t256f、t256n、d265a、t286a、t286c、t286d、t286e、t286f、t286g、t286h、t286i、t286k、t286l、t286m、t286n、t286p、t286q、t286r、t286s、t286v、t286w、t286y、t289a、r290a、k292a、e293刪除、n297g、p307q、e311a、e311c、e311d、e311f、e311g、e311h、e311i、e311k、e311l、e311m、e311n、e311p、e311q、e311r、e311s、e311t、e311v、e311w、e311y、d312a、d312c、d312e、d312f、d312g、d312h、d312i、d312k、d312l、d312m、d312n、d312p、d312q、d312r、d312s、d312t、d312v、d312w、d312y、k322a、p329g、p329s、p329l、a330s、p331s、p331a、d378v、a426c、a426d、a426e、a426f、a426g、a426h、a426i、a426k、a426l、a426m、a426n、a426p、a426q、a426r、a426s、a426t、a426v、a426w、a426y、m428a、m428c、m428d、m428e、m428f、m428g、m428h、m428i、m428k、m428l、m428n、m428p、m428q、m428r、m428s、m428t、m428v、m428w、m428y、n434a、n434c、n434d、n434e、n434f、n434g、n434h、n434i、n434k、n434l、n434m、n434p、n434q、n434r、n434s、n434t、n434v、n434w、n434y、y436a、y436c、y436d、y436e、y436f、y436g、y436h、y436i、y436k、y436l、y436m、y436n、y436p、y436q、y436r、y436s、y436t、y436v和y436w中的一者或多者。

4、在另一方面，本發(fā)明提供了一種多肽，其包含：豬igg恒定結(jié)構(gòu)域，該豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含本文所描述的發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代的。

5、在又另一方面，本發(fā)明提供了一種抗體或分子，其包含：豬igg恒定結(jié)構(gòu)域，該豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含本文所描述的發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。

6、在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于生產(chǎn)或制造抗體或分子的方法，該方法包括：提供具有編碼抗體的核酸序列的載體或宿主細(xì)胞，其中所述抗體包含豬igg恒定結(jié)構(gòu)域，該豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含本文所描述的發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代。

7、根據(jù)以下詳細(xì)描述實(shí)例和圖式，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。然而，應(yīng)當(dāng)理解，雖然詳細(xì)說(shuō)明和具體實(shí)例指示了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但僅以說(shuō)明的方式給出，因?yàn)楦鶕?jù)所述詳細(xì)描述，在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的各種變化和修改對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將變得明顯。

技術(shù)特征：

1.一種用于調(diào)制或調(diào)節(jié)豬受試者中的效應(yīng)功能的方法，所述方法包括：對(duì)所述受試者施用融合分子，所述融合分子包含經(jīng)修飾的igg，

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述效應(yīng)功能是抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(adcc)、抗體依賴性細(xì)胞吞噬作用(adcp)、補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性(cdc)或其組合。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含取代e233p、g234a、v234a、a235l、p235l、p235a、g236a、g236l、p238a、m252a、m252c、m252d、m252e、m252f、m252g、m252h、m252i、m252k、m252l、m252n、m252p、m252q、m252r、m252s、m252t、m252v、m252w、m252y、s254t、t256e、t256f、t256n、d265a、t286a、t286c、t286d、t286e、t286f、t286g、t286h、t286i、t286k、t286l、t286m、t286n、t286p、t286q、t286r、t286s、t286v、t286w、t286y、t289a、r290a、k292a、e293刪除、n297g、p307q、e311a、e311c、e311d、e311f、e311g、e311h、e311i、e311k、e311l、e311m、e311n、e311p、e311q、e311r、e311s、e311t、e311v、e311w、e311y、d312a、d312c、d312e、d312f、d312g、d312h、d312i、d312k、d312l、d312m、d312n、d312p、d312q、d312r、d312s、d312t、d312v、d312w、d312y、k322a、p329g、p329s、p329l、a330s、p331s、p331a、d378v、a426c、a426d、a426e、a426f、a426g、a426h、a426i、a426k、a426l、a426m、a426n、a426p、a426q、a426r、a426s、a426t、a426v、a426w、a426y、m428a、m428c、m428d、m428e、m428f、m428g、m428h、m428i、m428k、m428l、m428n、m428p、m428q、m428r、m428s、m428t、m428v、m428w、m428y、n434a、n434c、n434d、n434e、n434f、n434g、n434h、n434i、n434k、n434l、n434m、n434p、n434q、n434r、n434s、n434t、n434v、n434w、n434y、y436a、y436c、y436d、y436e、y436f、y436g、y436h、y436i、y436k、y436l、y436m、y436n、y436p、y436q、y436r、y436s、y436t、y436v和y436w中的一者或多者。

4.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述經(jīng)修飾的igg為豬或豬源化igg。

5.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述igg為igg1a、igg1b、igg2a、igg2b、igg3、igg4a、igg4b、igg5a、igg5b、igg6a或igg6b。

6.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述igg恒定結(jié)構(gòu)域包含ch1結(jié)構(gòu)域或鉸鏈區(qū)。

7.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述igg恒定結(jié)構(gòu)域包含具有ch2和ch3結(jié)構(gòu)域的fc恒定區(qū)。

8.根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述野生型豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含seqid?no.:1-11中所列舉的氨基酸序列中的一者。

9.一種經(jīng)修飾的igg，其包含：豬igg恒定結(jié)構(gòu)域，所述豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含相對(duì)于野生型豬igg恒定結(jié)構(gòu)域的至少一個(gè)氨基酸取代，其中所述取代是在根據(jù)如kabat中的eu索引編號(hào)的氨基酸殘基233、234、235、236、238、252、254、256、265、286、293、297、307、311、312、322、329、330、331、378、426、428、434或436處。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含取代e233p、g234a、v234a、a235l、p235l、p235a、g236a、g236l、p238a、m252a、m252c、m252d、m252e、m252f、m252g、m252h、m252i、m252k、m252l、m252n、m252p、m252q、m252r、m252s、m252t、m252v、m252w、m252y、s254t、t256e、t256f、t256n、d265a、t286a、t286c、t286d、t286e、t286f、t286g、t286h、t286i、t286k、t286l、t286m、t286n、t286p、t286q、t286r、t286s、t286v、t286w、t286y、e293刪除、n297g、p307q、e311a、e311c、e311d、e311f、e311g、e311h、e311i、e311k、e311l、e311m、e311n、e311p、e311q、e311r、e311s、e311t、e311v、e311w、e311y、d312a、d312c、d312e、d312f、d312g、d312h、d312i、d312k、d312l、d312m、d312n、d312p、d312q、d312r、d312s、d312t、d312v、d312w、d312y、k322a、p329g、p329s、p329l、a330s、p331s、p331a、d378v、a426c、a426d、a426e、a426f、a426g、a426h、a426i、a426k、a426l、a426m、a426n、a426p、a426q、a426r、a426s、a426t、a426v、a426w、a426y、m428a、m428c、m428d、m428e、m428f、m428g、m428h、m428i、m428k、m428l、m428n、m428p、m428q、m428r、m428s、m428t、m428v、m428w、m428y、n434a、n434c、n434d、n434e、n434f、n434g、n434h、n434i、n434k、n434l、n434m、n434p、n434q、n434r、n434s、n434t、n434v、n434w、n434y、y436a、y436c、y436d、y436e、y436f、y436g、y436h、y436i、y436k、y436l、y436m、y436n、y436p、y436q、y436r、y436s、y436t、y436v和y436w中的一者或多者。

11.根據(jù)上述權(quán)利要求9至10中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述經(jīng)修飾的igg為豬或豬源化igg。

12.根據(jù)上述權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中igg為igg1a、igg1b、igg2a、igg2b、igg3、igg4a、igg4b、igg5a、igg5b、igg6a或igg6b。

13.根據(jù)上述權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg為igg1a，并且其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含選自由以下各項(xiàng)組成的組的取代中的一者或多者：(i)p329s和a330s；(ii)d265a、p329g和a330s；(iii)v234a、a235l、g236a、p329l和a330s；(iv)v234a、a235l、g236a和p329g；(v)e233p、a330s和p331s；(vi)k322a和p331a；以及(vii)p329s。

14.根據(jù)上述權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg為igg1b，并且其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含選自由以下各項(xiàng)組成的組的取代中的一者或多者：(i)v234a、a235l、g236a和p329g；(ii)d265a、n297g和p329s；(iii)p329g和a330s；(iv)e233p和p331s；以及(v)k322a和p331a。

15.根據(jù)上述權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg為igg2，并且其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含選自由以下各項(xiàng)組成的組的取代中的一者或多者：(i)v234a、a235l、g236a和p329g；(ii)d265a、n297g和p329s；(iii)p329g和a330s；(iv)e233p和p331s；(v)k322a和p331a；以及(vi)p329s。

16.根據(jù)上述權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg為igg4a，并且其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含選自由以下各項(xiàng)組成的組的取代中的一者或多者：(i)g234a、p235l、g236a和p329g；(ii)d265a、n297g和p329s；(iii)p329g和a330s；(iv)e233p和p331s；(v)k322a和p331a；以及(vi)p329s。

17.根據(jù)上述權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg為igg4b，并且其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含選自由以下各項(xiàng)組成的組的取代中的一者或多者：(i)g234a、p235l、g236a和p329g；(ii)d265a、n297g和p329s；(iii)p329g和a330s；(iv)e233p和p331s；(v)k322a和p331a；以及(vi)p329s。

18.根據(jù)上述權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg為igg6a，并且其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含選自由以下各項(xiàng)組成的組的取代中的一者或多者：(i)d265a、n297g、p329g和a330s；(ii)g234a、p235l、g236a和p329g；(iii)e233p、a330s和p331s；(iv)p235a；g236l；和p238a；(v)d265a和n297g；(vi)p329g；(vii)p331a；(viii)k322a；(ix)e233p；(x)p329s和a330s；(xi)g234a、p235l、g236a、p329l和a330s；(xii)k322a和p331a；以及(xiii)p329s。

19.根據(jù)上述權(quán)利要求9至12中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg為igg6b，并且其中所述恒定結(jié)構(gòu)域包含選自由以下各項(xiàng)組成的組的取代中的一者或多者：(i)g234a、p235l、g236a和p329g；(ii)d265a、n297g和p329s；(iii)p329g和a330s；(iv)e233p和p331s；(v)k322a和p331a；以及(vi)p329s。

20.根據(jù)上述權(quán)利要求9至19中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中與具有所述野生型豬igg恒定結(jié)構(gòu)域的igg相比，所述經(jīng)修飾的igg對(duì)fcrn的親和力更高。

21.根據(jù)上述權(quán)利要求9至20中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中相較于具有所述野生型豬igg恒定結(jié)構(gòu)域的igg的半衰期，所述經(jīng)修飾的igg具有增加的半衰期。

22.根據(jù)上述權(quán)利要求9至21中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg恒定結(jié)構(gòu)域包含ch1結(jié)構(gòu)域或鉸鏈區(qū)。

23.根據(jù)上述權(quán)利要求9至22中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述igg恒定結(jié)構(gòu)域包含具有ch2和ch3結(jié)構(gòu)域的fc恒定區(qū)。

24.根據(jù)上述權(quán)利要求9至23中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg，其中所述野生型豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no.:1-11中所列舉的氨基酸序列中的一者。

25.一種藥物組合物，其包含根據(jù)上述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg以及藥學(xué)上可接受的載劑。

26.一種試劑盒，其包含容器中的根據(jù)權(quán)利要求9至24中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg以及使用說(shuō)明書。

27.一種多肽，其包含根據(jù)權(quán)利要求9至24中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg。

28.一種抗體，其包含根據(jù)權(quán)利要求9至24中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg。

29.一種載體，其包含編碼根據(jù)權(quán)利要求9至24中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg的氨基酸序列的核酸序列。

30.一種分離的細(xì)胞，其包含根據(jù)權(quán)利要求29所述的載體。

31.一種制造抗體或分子的方法，所述方法包括：提供根據(jù)權(quán)利要求30所述的細(xì)胞；以及培養(yǎng)所述細(xì)胞。

32.一種制造抗體的方法，所述方法包括：提供根據(jù)權(quán)利要求28所述的抗體。

33.一種融合分子，其包含：與藥劑融合的豬igg恒定結(jié)構(gòu)域，所述豬igg恒定結(jié)構(gòu)域包含根據(jù)權(quán)利要求9至24中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg。

34.一種用于增強(qiáng)豬igg與fcrn的結(jié)合親和力的方法，所述方法包括：提供根據(jù)權(quán)利要求9至24中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的igg。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明大體上涉及豬抗體突變體及其用途。具體地，本發(fā)明涉及豬抗體的恒定區(qū)中用于改善各種特性的突變。

技術(shù)研發(fā)人員：P·尚博格,H·L·坎波斯,C·J·斯特里策爾,G·J·菲奇,A·P·R·巴利,L·M·伯杰龍
受保護(hù)的技術(shù)使用者：碩騰服務(wù)有限責(zé)任公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15