背景技術(shù)：

1、嵌合抗原受體(car)t細(xì)胞療法是t細(xì)胞轉(zhuǎn)移療法的一種形式，其中從患者體內(nèi)收獲t細(xì)胞并對(duì)其進(jìn)行修飾以表達(dá)通常不被表達(dá)的抗原受體(ahmad,a.,2020,internationaljournal?of?molecular?sciences,21(12):4303)。然而，car?t細(xì)胞產(chǎn)品的臨床開發(fā)常常受到癌癥患者(尤其是接受過既往全身療法的個(gè)人)外周血t細(xì)胞產(chǎn)量低和功能差的阻礙。由于腫瘤微環(huán)境和預(yù)治療，患者的t細(xì)胞功能失調(diào)(thommen?et?al.,cancer?cell?vol.33:547-562,2018)并且治療時(shí)間延遲(levine?et?al.,mol?ther?methods?clin?dev?vol.4:92-101,2017)。當(dāng)前car?t細(xì)胞的其它缺點(diǎn)是，由于缺乏主要組織相容性復(fù)合物(complex，復(fù)合體)i類分子(mhc?i)和移植物抗宿主病(gvhd)的風(fēng)險(xiǎn)，car?t細(xì)胞對(duì)宿主自然殺傷(nk)細(xì)胞識(shí)別敏感。

2、因此，本領(lǐng)域需要一種“通用”t細(xì)胞產(chǎn)品，該產(chǎn)品可以經(jīng)過工程化以優(yōu)化持久性并避免被宿主免疫系統(tǒng)排斥。本發(fā)明滿足了這一尚未滿足的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種肽，包含：人類白細(xì)胞抗原(hla)信號(hào)肽或其片段，其包含與選自seq?id?no:1-10、13和46的氨基酸序列具有至少約70％同一性的至少一種氨基酸序列；經(jīng)修飾的β-2-微球蛋白(b2m)或其片段；和hla?i類組織相容性抗原α鏈e(antigen,alpha?chain?e)(hla-e)或其片段。在一些實(shí)施方式中，肽是單鏈三聚體。

2、在一些實(shí)施方式中，hla信號(hào)肽包括選自以下中的至少一種：hla-a*02:01信號(hào)肽或其片段、hla-b*08:01信號(hào)肽或其片段、hla-c*03:01信號(hào)肽或其片段、hla-g信號(hào)肽或其片段、hsp60信號(hào)肽或其片段、cmv?towne信號(hào)肽或其片段、cmv?af1信號(hào)肽或其片段、cmv109b信號(hào)肽或其片段、rl9hiv信號(hào)肽或其片段、或mtb44信號(hào)肽或其片段。

3、在一些實(shí)施方式中，hla-e是人類hla-e或其片段。

4、在一些實(shí)施方式中，經(jīng)修飾的b2m包括選自以下中的至少一種：經(jīng)修飾的b2m信號(hào)肽或其片段或無(wú)前導(dǎo)序列的(leader-less)經(jīng)修飾的b2m或其片段。在一些實(shí)施方式中，經(jīng)修飾的b2m信號(hào)肽或其片段與hla信號(hào)肽或其片段連接；hla信號(hào)肽或片段與無(wú)前導(dǎo)序列的經(jīng)修飾的b2m或其片段連接；并且無(wú)前導(dǎo)序列的經(jīng)修飾的b2m或其片段與hla-e或其片段連接。

5、在一些實(shí)施方式中，肽進(jìn)一步包含至少一個(gè)接頭(linker，連接子)和至少一個(gè)間隔子(spacer)。

6、在一些實(shí)施方式中，肽包含與seq?id?no:40中所示的氨基酸序列具有至少約70％同一性的氨基酸序列。

7、在一些實(shí)施方式中，肽預(yù)防、減少或抑制自然殺傷(nk)細(xì)胞介導(dǎo)的至少一種供體細(xì)胞的殺傷。在一些實(shí)施方式中，肽增加至少一種供體細(xì)胞的持久性或減少至少一種供體細(xì)胞的清除(clearance，清除率)。

8、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種包含至少一種本發(fā)明的肽的組合物。在一些實(shí)施方式中，該組合物是藥學(xué)上可接受的組合物。

9、在各個(gè)方面，本發(fā)明還提供了一種核酸分子，包含：編碼hla信號(hào)肽或其片段的核苷酸序列，該hla信號(hào)肽或其片段包含與選自seq?id?no:1-10、13和46的氨基酸序列具有至少約70％同一性的至少一種氨基酸序列；編碼經(jīng)修飾的b2m或其片段的核苷酸序列；和編碼hla-e或其片段的核苷酸序列。

10、在一些實(shí)施方式中，編碼hla信號(hào)肽或其片段的核苷酸序列包含與選自seq?idno:14-24和47的核苷酸序列具有至少約70％同一性的至少一種核苷酸序列。

11、在一些實(shí)施方式中，核酸分子包含與seq?id?no:41中所示的核苷酸序列具有至少約70％同一性的核苷酸序列。

12、在其它方面，本發(fā)明還提供了一種核酸分子，包含：編碼hla信號(hào)肽或其片段的核苷酸序列，該核苷酸序列包含與選自seq?id?no:14-24和47的核苷酸序列具有至少約70％同一性的至少一種核苷酸序列；編碼經(jīng)修飾的b2m或其片段的核苷酸序列；和編碼hla-e或其片段的核苷酸序列。

13、在一些實(shí)施方式中，編碼經(jīng)修飾的b2m的核苷酸序列包括選自由以下組成的組中的至少一種：編碼經(jīng)修飾的b2m信號(hào)肽或其片段的核苷酸序列和編碼無(wú)前導(dǎo)序列的經(jīng)修飾的b2m或其片段的核苷酸序列。

14、在一些實(shí)施方式中，編碼經(jīng)修飾的b2m信號(hào)肽或其片段的核苷酸序列與編碼hla信號(hào)肽或其片段的核苷酸序列連接；編碼hla信號(hào)肽或片段的核苷酸序列與編碼無(wú)前導(dǎo)序列的經(jīng)修飾的b2m或其片段的核苷酸序列連接；并且編碼無(wú)前導(dǎo)序列的經(jīng)修飾的b2m或其片段的核苷酸序列與編碼hla-e或其片段的核苷酸序列連接。

15、在一些實(shí)施方式中，核酸分子進(jìn)一步包含編碼接頭的至少一種核苷酸序列和編碼間隔子的至少一種核苷酸序列。

16、在一些實(shí)施方式中，核酸分子包含與seq?id?no:41中所示的核苷酸序列具有至少約70％同一性的核苷酸序列。

17、在一些實(shí)施方式中，核酸分子預(yù)防、減少或抑制nk細(xì)胞介導(dǎo)的至少一種供體細(xì)胞的殺傷。在一些實(shí)施方式中，核酸分子增加至少一種供體細(xì)胞的持久性或減少至少一種供體細(xì)胞的清除。

18、在各個(gè)方面，本發(fā)明還提供了一種包含至少一種本發(fā)明的核酸分子的組合物。

19、在其它方面，本發(fā)明提供了一種基因工程化細(xì)胞，其包含至少一種本發(fā)明的核酸分子。

20、在一些實(shí)施方式中，基因工程化細(xì)胞被修飾為不表達(dá)選自以下中的至少一種：b2m、ii類主要組織相容性復(fù)合物反式激活因子(complex?transactivator，復(fù)合體反式激活因子)(ciita)、或天然(native，原生)t細(xì)胞受體(tcr)。

21、在一些實(shí)施方式中，基因工程化細(xì)胞是三重敲除(tko)細(xì)胞，其不表達(dá)選自以下中的至少一種：主要組織相容性復(fù)合物(mhc)i、mhc?ii、或天然tcr。

22、在一些實(shí)施方式中，基因工程化細(xì)胞選自自體細(xì)胞、同種異體細(xì)胞、同種異體應(yīng)答性細(xì)胞(alloresponsive?cell)、t細(xì)胞、誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(ipsc)、嵌合抗原受體(car)細(xì)胞、工程化tcr細(xì)胞、或它們的任何組合。

23、在一些實(shí)施方式中，t細(xì)胞選自同種異體應(yīng)答性t細(xì)胞、帶有工程化tcr的t細(xì)胞、同種異體特異性t細(xì)胞、帶有同種異體反應(yīng)性tcr的t細(xì)胞、car?t細(xì)胞、表達(dá)工程化tcr的t細(xì)胞(engineered?tcr-expressing?t?cell，工程化的表達(dá)tcr的t細(xì)胞，工程化的tcr-表達(dá)t細(xì)胞)、或它們的任何組合。

24、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中預(yù)防、減少或消除同種異體移植或異種移植的排斥的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的細(xì)胞。

25、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中預(yù)防、減少或消除同種異體應(yīng)答的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的細(xì)胞。

26、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中耗盡(depleting)同種異體應(yīng)答性細(xì)胞水平的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的細(xì)胞。

27、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中誘導(dǎo)同種異體耐受性的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的細(xì)胞。

28、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中改善car細(xì)胞療法的有效性的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的car細(xì)胞。

29、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中改善工程化tcr細(xì)胞療法的有效性的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的工程化tcr細(xì)胞。

30、在一些實(shí)施方式中，受試者具有選自以下中的至少一種：器官移植、組織移植、細(xì)胞移植、同種異體移植、腸移植、重建移植(reconstructive?transplantation)、自身免疫性疾病或病癥、移植物抗宿主病(gvhd)、與至少一種hla受體相關(guān)的疾病或病癥、與至少一種含hla的受體相關(guān)的疾病或病癥、與至少一種mhc受體相關(guān)的疾病或病癥、與至少一種含mhc的受體相關(guān)的疾病或病癥、與同種異體應(yīng)答性細(xì)胞的表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥、與器官移植相關(guān)的疾病或病癥、與組織移植相關(guān)的疾病或病癥、與細(xì)胞移植相關(guān)的疾病或病癥、與同種異體移植相關(guān)的疾病或病癥、與腸移植相關(guān)的疾病或病癥、癌癥、與癌癥相關(guān)的疾病或病癥、或與重建移植相關(guān)的疾病或病癥。

31、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中預(yù)防或治療疾病或病癥的方法，該方法包括向受試者施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的細(xì)胞。在一些實(shí)施方式中，該方法包括耗盡、降低或消除選自以下中的至少一種的水平：同種異體應(yīng)答性細(xì)胞、免疫細(xì)胞、t細(xì)胞、b細(xì)胞、nk細(xì)胞、白細(xì)胞、髓系細(xì)胞(myeloid?cell，骨髓細(xì)胞)或漿細(xì)胞。

32、在一些實(shí)施方式中，所述方法是一種工程化tcr細(xì)胞療法。

33、在一些實(shí)施方式中，疾病或病癥選自與同種異體應(yīng)答性細(xì)胞的表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥、與至少一種hla受體相關(guān)的疾病或病癥、與至少一種含hla的受體相關(guān)的疾病或病癥、與至少一種mhc受體相關(guān)的疾病或病癥、與至少一種含mhc的受體相關(guān)的疾病或病癥、gvhd、自身免疫性疾病或病癥、與器官移植相關(guān)的疾病或病癥、與組織移植相關(guān)的疾病或病癥、與細(xì)胞移植相關(guān)的疾病或病癥、與同種異體移植相關(guān)的疾病或病癥、與腸移植相關(guān)的疾病或病癥、與重建移植相關(guān)的疾病或病癥、癌癥、與癌癥相關(guān)的疾病或病癥、或它們的任何組合。

34、在一些實(shí)施方式中，疾病或病癥選自由以下組成的組：癌癥、與癌癥相關(guān)的疾病或病癥、以及它們的任何組合。

35、在一些實(shí)施方式中，與同種異體應(yīng)答性細(xì)胞的表達(dá)相關(guān)的疾病或病癥選自同種異體移植排斥、免疫排斥、慢性同種異體排斥、植入排斥(engraftment?rejection)、移植排斥、炎癥、由缺血/再灌注引起的炎癥、感染、對(duì)同種異體移植物的免疫應(yīng)答、或它們的任何組合。

36、在一些實(shí)施方式中，受試者具有選自器官移植、組織移植、細(xì)胞移植、同種異體移植、腸移植或重建移植中的至少一種。

37、在各個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種在有此需要的受試者中預(yù)防或治療癌癥、與癌癥相關(guān)的疾病或病癥、或它們的組合的方法，該方法包括施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的細(xì)胞。

38、在一些實(shí)施方式中，所述方法是一種工程化tcr細(xì)胞療法。