本發(fā)明涉及一種抑制血管緊張素原(agt)基因表達(dá)的sirna及其綴合物、藥物組合物，以及其在預(yù)防和/或治療血壓異常相關(guān)疾病中的用途。

背景技術(shù)：

1、血管緊張素原(angiotensinogen，agt)是人體內(nèi)腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin?system，ras)的重要組成部分，整個ras則在動物血壓的調(diào)控中起到關(guān)鍵作用。agt在肝臟中合成并且分泌，再由酶腎素(renin，ren)作用下產(chǎn)生血管緊張素i,再由血管緊張素轉(zhuǎn)移酶(angiotensin-converting?enzyme，ace)的作用下轉(zhuǎn)化為血管緊張素ii，大部分血管緊張素ii能夠與i型血管緊張素ii受體結(jié)合，導(dǎo)致血管收縮，引發(fā)血壓升高，這種分子還刺激激素阿爾多酮的產(chǎn)生，這觸發(fā)了na+離子和水的腎臟吸收，從而導(dǎo)致血量增加，進(jìn)一步引發(fā)血壓升高。

2、高血壓是一種嚴(yán)重的疾病，會顯著加劇罹患心臟、大腦、腎臟疾病以及其他疾病的風(fēng)險，據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的數(shù)據(jù)，全世界估計有12.8億30-79歲成年人患有高血壓，只有42％的高血壓患者得到診斷和治療，21％的高血壓患者的血壓得到了有效的控制，高血壓是世界各地過早死亡的一個主要原因。同時據(jù)柳葉刀雜志報告(lancet?2019；394:1145–58)，2017年我國高血壓死亡人數(shù)達(dá)254萬人，居所有危害因素致死人數(shù)的第一位。

3、目前臨床用于高血壓治療的一線藥物分為五大類：血管緊張素酶抑制劑、血管緊張素ii受體阻滯劑、β-腎上腺素受體阻滯劑、二氫吡啶類鈣通道阻滯劑以及利尿劑。這五類降壓藥物的降壓機(jī)制完全不同，根據(jù)患者的年齡、高血壓程度、相關(guān)臨床并發(fā)癥的風(fēng)險程度，普通患者會采用其中一種進(jìn)行治療，如果一種方式療效欠佳，會采用兩種甚至三種方式聯(lián)合治療。對于高?；颊?，會直接采用兩種甚至三種方式聯(lián)合治療。如果三種方式聯(lián)合治療都無法有效控制血壓，則被稱為難治性高血壓，難治性高血壓是高血壓治療中的一個常見的問題，也是一個棘手的問題。開發(fā)有效，安全、穩(wěn)定和長效降壓藥具有較大臨床價值。

4、本技術(shù)提供了一種靶向agt的小干擾rna(small?interfering?rna，sirna)制劑，能夠通過特異的與agt的mrna結(jié)合,破壞agt?mrna的正常翻譯模板功能，從而阻止其翻譯agt蛋白質(zhì)，從源頭上抑制ras途徑，用于治療/預(yù)防由于ras途徑導(dǎo)致的相關(guān)疾病，如高血壓，也包括頑固性高血壓和不可控高血壓。

5、相比傳統(tǒng)藥物，sirna的穩(wěn)定性較差，系統(tǒng)給藥存在易被核酸酶降解的缺點；此外，還需要嘗試在進(jìn)一步提高活性的同時，避免引發(fā)脫靶效應(yīng)、免疫刺激、細(xì)胞毒性等副作用。因此，開發(fā)出更多在血液中穩(wěn)定、具有良好生物活性、細(xì)胞毒性較低且能夠長效抑制agt基因表達(dá)的候選sirna成為迫切需要解決的問題；同時，利用上述抑制agt基因表達(dá)的候選sirna開發(fā)出能夠有效預(yù)防和/或治療高血壓相關(guān)疾病的藥物存在臨床研究的必要性和商業(yè)化的現(xiàn)實性。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種用于抑制agt基因表達(dá)的sirna，所述sirna包含正義鏈和反義鏈；其中，所述反義鏈包含與核苷酸序列(3'→5')agcaguagguguuacucucaugu(seq?id?no:2)差異不多于3個核苷酸的序列；所述正義鏈與反義鏈至少部分互補(bǔ)。

2、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述反義鏈包含與核苷酸序列(3'→5')agcaguagguguuacucucaugu(seq?id?no:2)差異不多于2個核苷酸的序列；在本發(fā)明的一些實施方案中，所述反義鏈包含與核苷酸序列(3'→5')agcaguagguguuacucucaugu(seq?idno:2)差異不多于1個核苷酸的序列；在本發(fā)明的一些實施方案中，所述反義鏈包含核苷酸序列(3'→5')agcaguagguguuacucucaugu(seq?id?no:2)。

3、所述至少部分互補(bǔ)是指兩條序列可以是完全互補(bǔ)的，或者總體上不多于5個、4個、3個或2個錯配堿基配對，同時保留了在相關(guān)條件下雜交的能力。

4、優(yōu)選地，所述正義鏈與所述反義鏈具有至少15個、16個、17個、18個、19個、20個或21個核苷酸互補(bǔ)。

5、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述反義鏈包含核苷酸序列(3'→5')agcaguagguguuacucucaugu(seq?id?no:2)；所述正義鏈包含核苷酸序列(5'→3')gucauccacaaugagaguaca(seq?id?no:1)。

6、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述反義鏈長度為19～23個核苷酸；所述正義鏈長度為19～21個核苷酸。

7、在一些具體實施方案中，所述反義鏈長度為19個核苷酸，所述正義鏈長度為19個核苷酸。在一些具體實施方案中，所述反義鏈長度為21個核苷酸，所述正義鏈長度為19個核苷酸。在一些具體實施方案中，所述反義鏈長度為21個核苷酸，所述正義鏈長度為21個核苷酸。在一些具體實施方案中，所述反義鏈長度為23個核苷酸，所述正義鏈長度為21個核苷酸。

8、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna包含一個或多個單鏈核苷酸突出端。例如1、2、3或4個核苷酸的突出端。在本發(fā)明的一些實施方案中，突出端可以在正義鏈、反義鏈或者其任何組合上。在本發(fā)明的一些實施方案中，突出端存在于sirna反義鏈或正義鏈的5’末端、3’末端或者兩個末端上。

9、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈3’末端具有2個核苷酸的突出端。

10、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna具有平末端。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna具有至少一個平末端，位于反義鏈的5’末端(或正義鏈的3’末端)。

11、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna具有兩個平末端。

12、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈3’末端具有2個核苷酸的突出端。

13、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的核苷酸序列為：

14、正義鏈：(5'→3')gucauccacaaugagaguaca(seq?id?no:1)；

15、反義鏈：(3'→5')agcaguagguguuacucucaugu(seq?id?no:2)。

16、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna至少含有一個修飾核苷酸。

17、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的正義鏈和/或反義鏈中的全部核苷酸均為修飾的核苷酸或核苷酸類似物。

18、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述修飾的核苷酸選自2’-甲氧基核苷酸、2’-氟核苷酸、2’-脫氧核苷酸、2’,3’-開環(huán)核苷酸類似物、2’-氟阿糖核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、2’-氨基修飾核苷酸、2’-烷基修飾核苷酸、3’-甲氧基核苷酸、2’-烯丙基修飾的核苷酸、包含硫代磷酸酯基團(tuán)的核苷酸、包含甲基膦酸酯基團(tuán)的核苷酸、包含5’-磷酸酯的核苷酸、包含5’-磷酸酯模擬物的核苷酸、二醇修飾的核苷酸、脫堿基核苷酸、嗎啉代核苷酸、鎖定核苷酸(lna)、解鎖核苷酸(una)或甘油核苷酸(gna)，但本發(fā)明不限于此。

19、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna修飾的核苷酸序列選自：

20、1)正義鏈5'端第7、9、10、11位的核苷酸為2’-氟核苷酸，且其余位置至少還有1個2’-氟核苷酸；和/或

21、2)反義鏈5'端第2、6、14、16為的核苷酸為2’-氟核苷酸，且其余位置至少還有1個2’-氟核苷酸；和/或

22、3)反義鏈5'端第2、8、9、14、16為的核苷酸為2’-氟核苷酸，且其余位置至少有1個甘油核苷酸；和/或

23、4)反義鏈5'端第2、6、8、9、14、16為的核苷酸為2’-氟核苷酸，且其余位置至少有1個堿基修飾的核苷酸。

24、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna修飾的核苷酸序列選自：

25、1)正義鏈5'端第9、10、11位的核苷酸為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；和/或

26、2)反義鏈5'端第2、6、14、16為的核苷酸為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；和/或

27、3)反義鏈5'端第2、6、14、16為的核苷酸為2’-氟核苷酸，且其余位置至少有1個堿基修飾的核苷酸；和/或

28、4)反義鏈5'端第2、6、8、9、14、16為的核苷酸為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；和/或

29、5)反義鏈5'端第2、6、8、9、14、16為的核苷酸為2’-氟核苷酸，且其余位置至少有1個堿基修飾的核苷酸；

30、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

31、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、10、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

32、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

33、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

34、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11、15位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

35、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、10、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第3、7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

36、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

37、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、3、4、6、8、10、14、16、18、20、22位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第2位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

38、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、4、5、6、8、10、14、16、18、20、22位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第2位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

39、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、4、6、7、8、10、14、16、18、20、22位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第2位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

40、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、4、6、8、10、14、16、18、20位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第1、3、5、7、9、10、11、13、15、17、19、21位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

41、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、4、6、8、10、14、16、18、20、22位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第1、3、5、7、9、10、11、13、15、17、19、21位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

42、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、8、9、14、16位為2’-氟核苷酸，第7位為甘油核苷酸(gna)，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

43、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，第6位為甘油核苷酸(gna)，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11、15位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

44、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，第4位為甘油核苷酸(gna)，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11、15位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

45、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，第5位為甘油核苷酸(gna)，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11、15位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

46、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，第7位為甘油核苷酸(gna)，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11、15位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

47、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，第6位為甘油核苷酸(gna)，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

48、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、5、7、12位為2’-脫氧核苷酸，第14位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。在本發(fā)明的一些實施方式中，所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第9、10、11位為2’-氟核苷酸，其它位點為2’-甲氧基核苷酸。

49、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為23個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、5、7、12位為2’-脫氧核苷酸，第6、8、9、10、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。在本發(fā)明的一些實施方式中，所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其它位點為2’-甲氧基核苷酸。

50、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為21個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第5、7、9位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

51、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為21個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

52、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為21個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第9、10、11位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

53、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為21個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、4、6、8、10、12、14、16、18、20位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為21個核苷酸，其中正義鏈5’端的第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

54、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為21個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、6、14、16位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為19個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、8、9位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

55、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述sirna的反義鏈長度為19個核苷酸，其中反義鏈5’端的第2、4、6、8、10、12、14、16、18位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸；所述sirna的正義鏈長度為19個核苷酸，其中正義鏈5’端的第7、8、9位為2’-氟核苷酸，其余位置為2’-甲氧基核苷酸。

56、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述修飾的核苷酸為磷酸基團(tuán)被硫代磷酸酯基團(tuán)修飾的核苷酸。即，用一個硫原子取代磷酸二酯鍵中的非橋氧原子，從而以硫代磷酸二酯鍵替換磷酸二酯鍵。

57、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述正義鏈5’末端和3’末端分別獨立地包含1或2個硫代磷酸酯基連接；和/或所述反義鏈的5’末端和3’末端分別獨立地包含1或2個硫代磷酸酯基連接。

58、在本發(fā)明的一些實施方式中，正義鏈的5'端的第1位和第2位的核苷酸之間、正義鏈的5'端的第2位和第3位的核苷酸之間、正義鏈的3'端的第1位和第2位的核苷酸之間、正義鏈的3'端的第2位和第3位的核苷酸之間、反義鏈的3'端的第1位和第2位的核苷酸之間、反義鏈的3'端的第2位和第3位的核苷酸之間、反義鏈的5'端的第1位和第2位的核苷酸之間、以及反義鏈的5'端的第2位和第3位的核苷酸之間，至少有一個為硫代磷酸酯基連接；優(yōu)選為至少有四個為硫代磷酸酯基連接；在本發(fā)明的一些實施方式中，至少有六個為硫代磷酸酯基連接；在本發(fā)明的一些實施方式中，八個均為硫代磷酸酯基連接。

59、在本發(fā)明的一些實施方式中，正義鏈的5'端的第1位和第2位的核苷酸之間、第2位和第3位的核苷酸之間為硫代磷酸酯基連接。

60、在本發(fā)明的一些實施方式中，正義鏈的5'端的第1位和第2位的核苷酸之間、第2位和第3位的核苷酸之間為硫代磷酸酯基連接，且3'端的第1位和第2位的核苷酸之間、第2位和第3位的核苷酸之間為硫代磷酸酯基連接。

61、在本發(fā)明的一些實施方案中，反義鏈的3'端的第1位和第2位的核苷酸之間、第2位和第3位的核苷酸之間為硫代磷酸酯基連接，且5'端的第1位和第2位的核苷酸之間、第2位和第3位的核苷酸之間為硫代磷酸酯基連接。

62、在本發(fā)明的一些實施方式中，正義鏈的5'端的第1位和第2位的核苷酸之間、正義鏈的5'端的第2位和第3位的核苷酸之間、正義鏈的3'端的第1位和第2位的核苷酸之間、正義鏈的3'端的第2位和第3位的核苷酸之間、反義鏈的3'端的第1位和第2位的核苷酸之間、反義鏈的3'端的第2位和第3位的核苷酸之間、反義鏈的5'端的第1位和第2位的核苷酸之間、以及反義鏈的5'端的第2位和第3位的核苷酸之間均為硫代磷酸酯基連接。

63、在本發(fā)明一些實施方案中，正義鏈可包括一個或多個封端殘基或部分，稱為“封端殘基”?！胺舛藲埢笔强梢該饺雜irna的核苷酸序列的一個或多個末端的非核苷酸化合物或其他部分。在本發(fā)明一些實施方案中，封端殘基存在于正義鏈的5'末端、3'末端或5'末端和3'末端兩者處。

64、在本發(fā)明一些實施方案中，添加反向脫堿基殘基(invab)作為封端殘基?？蓞⒁奻.czauderna,nucleic?acids?res.,2003,31(11),2705-16。在本發(fā)明一些實施方案中，正義鏈的5'端和/或3'端可以包含多于一個反向脫堿基脫氧核糖部分作為封端殘基。

65、在本發(fā)明一些實施方案中，將一個或多個反向脫堿基殘基(invab)添加到正義鏈的3'端。在本發(fā)明一些實施方案中，將一個或多個反向脫堿基殘基(invab)添加到正義鏈的5'端。在本發(fā)明一些實施方案中，可在遞送載體部分與sirna正義鏈的核苷酸序列之間插入一個或多個反向脫堿基殘基。在本發(fā)明一些實施方案中，在sirna正義鏈的一個或多個末端處或附近包含一個或多個反向脫堿基殘基。所述反向脫堿基殘基(invab)選自以下結(jié)構(gòu)：

66、

67、其中，r＝o或者s。

68、在本發(fā)明一些實施方案中，將一個或多個反向脫堿基殘基(invab)添加到正義鏈的5'端。在本發(fā)明一些實施方案中，可在遞送載體部分與sirna正義鏈的核苷酸序列之間插入一個或多個反向脫堿基殘基。

69、反向脫堿基殘基可以經(jīng)由磷酸酯、硫代磷酸酯或其他核苷間鍵聯(lián)連接。

70、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述反義鏈5’端第一個核苷酸選自如下結(jié)構(gòu)：

71、

72、其中，base為堿基a、u、g、c、t或其它核苷酸堿基。

73、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述反義鏈5’端第一個核苷酸選自如下結(jié)構(gòu)：

74、

75、其中，base為堿基a、u、g、c、t或其它核苷酸堿基。

76、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述反義鏈5’端第一個核苷酸為(e)-乙烯基磷酸酯修飾的核苷酸。

77、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述堿基修飾的核苷酸的堿基選自如下結(jié)構(gòu)：

78、

79、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述堿基修飾的核苷酸位于sirna反義鏈的第5、6、7、8位。

80、在本發(fā)明的一些實施方案中，所述堿基修飾的核苷酸位于sirna中的單鏈核苷酸突出端。

81、優(yōu)選地，所述sirna反義鏈含有2個核苷酸的突出端，所述堿基修飾的核苷酸為sirna反義鏈突出端的第1個核苷酸。

82、優(yōu)選地，所述sirna反義鏈含有2個核苷酸的突出端，所述堿基修飾的核苷酸為sirna反義鏈突出端的第2個核苷酸。

83、本發(fā)明還提供了上述sirna與遞送載體綴合而得的sirna綴合物。

84、在本發(fā)明中，如無特別說明，“綴合”是指兩個或多個化學(xué)部分之間通過共價連接的方式彼此連接；“綴合物”是指各個化學(xué)部分之間通過共價連接而形成的化合物；“sirna綴合物”是指一個或多個化學(xué)部分共價連接至sirna上而形成的化合物。此處需要說明的是，各個化學(xué)部分可以直接連接至sirna上，也可以通過接頭連接至sirna上。

85、在本發(fā)明的一些實施方式中，遞送載體通過共價鍵連接至sirna形成綴合分子。

86、在本發(fā)明的一些實施方式中，本發(fā)明的sirna與藥學(xué)上可接受的綴合分子可以綴合得到sirna綴合物。在本發(fā)明的一些實施方式中，所述sirna共價綴合至所述綴合分子。為降低綴合對sirna活性可能帶來的影響，sirna與綴合分子的綴合位點可以在sirna正義鏈的3’端或5’端，也可在反義鏈的5’端。在一些實施方式中，sirna與綴合分子的綴合位點還可以在sirna的內(nèi)部序列中。

87、所述藥學(xué)上可接受的遞送載體可以是sirna給藥領(lǐng)域常規(guī)使用的遞送載體，例如但不限于以下遞送載體或其衍生物中的一種或多種：親脂分子，例如膽固醇、膽汁酸、維生素(例如維生素e)、不同鏈長的脂質(zhì)分子；聚合物，例如聚乙二醇；多肽，例如透膜肽；適配體；抗體；量子點；糖類，例如乳糖、聚乳糖、甘露糖、半乳糖、n-乙酰半乳糖胺(galnac)；葉酸(folate)；或肝實質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的受體配體，例如去唾液酸糖蛋白、去唾液酸糖殘基、脂蛋白(如高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等)、胰高血糖素、神經(jīng)遞質(zhì)(如腎上腺素)、生長因子、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。

88、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述遞送載體包含n-乙酰半乳糖胺。

89、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述遞送載體直接連接至sirna正義鏈的3’末端。

90、本發(fā)明的一些實施方式中，所述遞送載體直接連接至sirna正義鏈的5’末端。

91、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述遞送載體包含n-乙酰半乳糖胺，通過共價鍵連接至sirna正義鏈的3’端。

92、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述遞送載體具有如下結(jié)構(gòu)：

93、

94、

95、在本發(fā)明的一些實施方式中，上述結(jié)構(gòu)連接至sirna正義鏈的3’末端。在本發(fā)明的一些實施方式中，所述遞送載體具有如下結(jié)構(gòu)：

96、

97、

98、

99、在本發(fā)明的一些實施方式中，上述結(jié)構(gòu)連接至sirna正義鏈的5’末端。

100、在本發(fā)明的一些實施方式中，遞送載體連接至sirna正義鏈的3’末端的反向脫堿基殘基(invab)。

101、在本發(fā)明的一些實施方式中，遞送載體連接至sirna正義鏈的5’末端的反向脫堿基殘基(invab)。

102、在本發(fā)明的一些實施方式中，galnac(ser1)和galnac(ser2)同時連接至sirna正義鏈的3’末端和5’末端。

103、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述sirna綴合物選自sirna綴合物1～502。

104、

105、

106、

107、

108、

109、

110、

111、

112、

113、

114、

115、

116、

117、

118、

119、

120、

121、

122、

123、

124、

125、

126、

127、

128、

129、

130、

131、

132、本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包含任一上述的sirna和/或任一上述的sirna綴合物和藥學(xué)上可接受的載體。

133、在本發(fā)明的一些實施方式中，所述藥物組合物含有1種如第一方面所述的sirna。在本公開的另一些實施方式中，所述藥物組合物含有至少2種如第一方面所述的sirna(例如但不限于2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種)作為活性成分。優(yōu)選地，所述至少2種如第一方面所述的sirna各自靶向agt基因中的不同靶序列，由此可期望針對不同靶序列同時發(fā)揮作用而帶來協(xié)同效果。此處，所謂的“不同靶序列”是指靶序列之間不存在重疊、或靶序列之間重疊的連續(xù)核苷酸個數(shù)少于5個(例如重疊的連續(xù)核苷酸個數(shù)為4個、3個、2個、1個、0個)。在此情況下，所述至少2種如第一方面所述的sirna可以以任意不同比例存在。優(yōu)選地，所述至少2種如第一方面所述的sirna彼此之間可以以1:100～100:1的摩爾比存在；更優(yōu)選地，所述至少2種如第一方面所述的sirna彼此之間可以以1:10～10:1、1:5～5:1或1:2～2:1的摩爾比存在。在本發(fā)明的一些實施方式中，所述至少2種如第一方面所述的sirna以相同的摩爾比存在。

134、本發(fā)明還提供了任一上述的sirna和/或任一上述的sirna綴合物和/或上述的藥物組合物在制備用于治療和/或預(yù)防與agt基因過表達(dá)相關(guān)的病理狀況或疾病的藥物中的用途。

135、進(jìn)一步地，所述病理狀況或疾病為與血壓異常相關(guān)的疾病。

136、本發(fā)明提供的sirna、sirna綴合物和藥物組合物具有良好的穩(wěn)定性、出色的agt基因抑制活性、令人滿意的細(xì)胞毒性和免疫刺激性，并且能夠顯著降低血壓水平。

137、在本發(fā)明中，如無特別說明，大寫字母c、g、u、a、t表示核苷酸的堿基組成，包括修飾和未修飾的核苷酸；小寫字母m表示與該標(biāo)識m右側(cè)相鄰的一個核苷酸為2’-甲氧基核苷酸；小寫字母f表示與該標(biāo)識f右側(cè)相鄰的一個核苷酸為2’-氟核苷酸；小寫字母d表示與該標(biāo)識d右側(cè)相鄰的一個核苷酸為2’-脫氧核苷酸；gn表示表示與該標(biāo)識gn右側(cè)相鄰的一個核苷酸為甘油核苷酸(gna)；tn表示表示與該標(biāo)識tn右側(cè)相鄰的一個核苷酸為蘇糖核苷酸(tna)；標(biāo)識*表示與該標(biāo)識*左右相鄰的兩個核苷酸之間(或核苷酸與遞送載體之間)為硫代磷酸酯基連接；evp表示與其右側(cè)相鄰的一個核苷酸是(e)-乙烯基磷酸酯修飾的核苷酸；invab表示反向脫堿基殘基；galnac(l96)是指該處綴合有遞送載體galnac(l96)。ser(gn)是指該處綴合有遞送載體ser(gn)。

138、在本發(fā)明中，如無特別說明，字母i、m6a、x、b、b1、b2分別表示修飾核苷酸的堿基，為

139、在本發(fā)明中，如無特別說明，術(shù)語“互補(bǔ)”是指第一序列的寡核苷酸在一定條件下和第二序列的寡核苷酸雜交并形成雙鏈結(jié)構(gòu)的能力?！爸辽俨糠只パa(bǔ)”是指兩條序列可以是完全互補(bǔ)的，或者總體上不多于5個、4個、3個或2個錯配堿基配對，同時保留了在相關(guān)條件下雜交的能力。另外在兩個寡核苷酸設(shè)計成雜交時形成一個或多個單鏈突出端的情況下，就確定互補(bǔ)性而言，這類突出端不應(yīng)當(dāng)視作錯配。在本發(fā)明中，就滿足以上雜交能力的要求時，“互補(bǔ)”序列還可以包括或完全形成自非watson(沃森)-crick(克里克)堿基對和/或從非天然的以及經(jīng)修飾的核苷酸形成的堿基對。此類非watson(沃森)-crick(克里克)堿基對包括但不局限于g：u搖擺堿基配對或hoogstein(胡格斯騰)堿基配對。對應(yīng)地，在本發(fā)明中，如無特別說明，“錯配”是指在sirna雙鏈體分子中，對應(yīng)位置的堿基并未以互補(bǔ)的形式配對存在。

140、在本發(fā)明中，如無特別說明，“核苷酸序列的差異”是指相比于原核苷酸序列，在相同或相對應(yīng)位置處的核苷酸的堿基種類發(fā)生了改變。例如，在原核苷酸序列中的一個核苷酸堿基為a時，在相同或相對應(yīng)位置處的核苷酸堿基改變?yōu)閡、c、g或dt、dc、dg等的情況下，認(rèn)為該位置處存在核苷酸序列的差異。此處需要說明的是，在相比于原核苷酸序列，在相同或相對應(yīng)位置處的核苷酸僅在是否存在修飾或修飾類型方面存在區(qū)別的情況下，不認(rèn)為該位置處存在核苷酸序列的差異。

141、在本發(fā)明中，如無特別說明，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指載體、運載體、稀釋劑、輔料和/或其所形成的鹽/酯/水合物等通常在化學(xué)上或物理上與構(gòu)成某藥物劑型的其它成分相兼容，并在生理上與受體相兼容。

142、在本發(fā)明中，如無特別說明，術(shù)語“抑制”是指由于sirna介導(dǎo)的靶基因的mrna降解而使靶基因表達(dá)得以下調(diào)(down-regulation)的情況。所述“下調(diào)”是指相對于無sirna處理時，靶基因表達(dá)水平下降5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％以上或甚至100％的情況。其中，靶基因表達(dá)水平下降100％是指無可檢測水平的靶基因表達(dá)。

143、在本發(fā)明中，所述sirna還可根據(jù)需要含有修飾的核苷酸，所述修飾的核苷酸不會導(dǎo)致所述sirna抑制agt基因表達(dá)的功能明顯削弱或喪失。目前，本領(lǐng)域存在多種可用于修飾sirna的方式，包括例如骨架修飾(如磷酸基團(tuán)修飾)、核糖基團(tuán)修飾及堿基修飾等(watts,j.k.,g.f.deleavey,and?m.j.damha,chemically?modified?sirna:tools?andapplications.drug?discov?today,2008.13(19-20):p.842-55)。

144、顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

145、以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。