本發(fā)明涉及一種黃芪多糖及其制備方法和應(yīng)用，具體涉及一種不同炮制工藝加工的黃芪多糖及其應(yīng)用，屬于多糖提取制備。

背景技術(shù)：

1、黃芪(astragali?radix，ar)屬于豆科植物，是原產(chǎn)于中國北方的傳統(tǒng)中藥材。其被稱之為“補(bǔ)氣圣藥”，已具有2000多年的藥用歷史。在民間，黃芪還被廣泛用于食療，是著名的保健滋補(bǔ)佳品，屬于藥食兩用的中藥材。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芪在調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)功能、抗腫瘤、抗炎以及抗氧化等多個(gè)方面表現(xiàn)出顯著的生物活性。因此被普遍應(yīng)用于功能食品和醫(yī)藥領(lǐng)域。黃芪的藥理活性與其豐富多變的化學(xué)成分相關(guān)。迄今為止，已從黃芪中分離并鑒定出黃酮、皂苷、氨基酸、多糖等多種化學(xué)成分。其中，多糖是黃芪發(fā)揮藥效的主要活性成分之一。其具有多種藥理活性，如抗腫瘤、抗衰老、降血糖、抗菌、免疫調(diào)節(jié)等。

2、近些年，黃芪多糖因其高效低毒及雙向免疫調(diào)節(jié)活性而備受關(guān)注，大量研究表明，黃芪多糖有助于促進(jìn)中樞(骨髓、胸腺)和外周(脾臟、淋巴結(jié)及粘膜相關(guān)淋巴組織)免疫器官的生長，進(jìn)而能夠增強(qiáng)機(jī)體免疫力。另一方面，當(dāng)機(jī)體自身免疫水平過高時(shí)，黃芪多糖(astragalus?polysaccharide，apss)能調(diào)節(jié)t淋巴細(xì)胞、b淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞的生長分化和細(xì)胞因子分泌，從而下調(diào)機(jī)體免疫應(yīng)答水平，拮抗過度免疫反應(yīng)。apss能夠通過多靶點(diǎn)、多途徑發(fā)揮雙向免疫調(diào)節(jié)作用，協(xié)助恢復(fù)和維護(hù)機(jī)體的免疫平衡。

3、多糖結(jié)構(gòu)獨(dú)特且復(fù)雜，它的生物活性與其復(fù)雜的化學(xué)結(jié)構(gòu)和不同的空間構(gòu)象密切相關(guān)。因此，對其獨(dú)特的化學(xué)結(jié)構(gòu)及構(gòu)象進(jìn)行研究和解析是有效利用多糖的基礎(chǔ)。然而，眾多研究表明，同一來源多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)會受到不同的加工方法的影響而導(dǎo)致其活性的變化。并且加工機(jī)制對中藥有效成分的化學(xué)、藥理和藥代動力學(xué)具有協(xié)同作用?，F(xiàn)有技術(shù)中曾有人研究了不同加工工藝對肉蓯蓉多糖結(jié)構(gòu)及抗氧化活性的影響，結(jié)果表明加工工藝會影響該多糖的理化性質(zhì)并提高其抗氧化活性。也有一些學(xué)者發(fā)現(xiàn)何首烏加工和未加工多糖的理化性質(zhì)差異顯著，且保肝潛力在加工后也顯著增強(qiáng)。

4、在中醫(yī)藥理論中，傳統(tǒng)的中藥材加工過程被稱之為炮制，中藥炮制可降低藥材的副作用，增強(qiáng)藥性，拓寬其藥用范圍，合理炮制能使中藥充分發(fā)揮藥效，全面增強(qiáng)臨床療效。然而不同的加工處理方法可能會改變中藥中多糖及其他成分的變化，最終導(dǎo)致其藥效也隨之發(fā)生改變。在中國，經(jīng)典加工黃芪的方法包含了鹽制、蜜制、酒制等，3種不同的傳統(tǒng)加工方法可能會影響apss的物理性質(zhì)或結(jié)構(gòu)特性從而導(dǎo)致其雙向免疫調(diào)節(jié)活性發(fā)生改變。然而，目前關(guān)于不同的傳統(tǒng)加工工藝對黃芪多糖結(jié)構(gòu)表征及雙向免疫調(diào)節(jié)活性的影響尚未報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，而提供一種不同炮制工藝加工的黃芪多糖及其應(yīng)用，本發(fā)明對生黃芪飲片進(jìn)行加工，通過用鹽制(salt-processed?ar，sar)、酒制(wine-processed?ar，war)和蜜制(honey-processed?ar，har)3種經(jīng)典的加工方式得到3種中藥飲片樣品；對所得的生品及3種加工飲片樣品進(jìn)行提取得到了4種粗多糖-生黃芪粗多糖(rapss)、鹽制黃芪粗多糖(sapss)、酒制黃芪粗多糖(wapss)和蜜制黃芪粗多糖(hapss)；對這4種多糖的化學(xué)組成、分子量、單糖組成、糖苷鍵、分子構(gòu)象、物理化學(xué)性質(zhì)和雙向免疫調(diào)節(jié)活性進(jìn)行了深入研究。本發(fā)明為黃芪多糖的高效利用提供了理論基礎(chǔ)，為黃芪多糖在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、本發(fā)明提供一種不同炮制工藝加工的黃芪多糖的方法，采用鹽制、酒制和蜜制的方式對生黃芪飲片進(jìn)行加工，包括以下步驟：

4、(1)取生黃芪飲片，分別加入鹽水、黃酒和煉蜜，拌勻燜透，分別置鍋內(nèi)用文火炒干后取出放涼后，分別得到鹽制黃芪飲片、酒制黃芪飲片、蜜制黃芪飲片；

5、(2)分別將步驟(1)中得到的鹽制黃芪飲片、酒制黃芪飲片、蜜制黃芪飲片用中藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，分別稱取粉碎樣品與水混合，加熱溶解后進(jìn)行離心過濾去除不溶性殘?jiān)蟮玫缴锨逡?；分別將上清液濃縮后得到濃縮液，以濃縮液：水(1：2.5)的比例對流通過截留膜(分子量：5000da)進(jìn)行分離，得到分離液；隨后分別將分離液進(jìn)行透析(分子量：3500da)得到透析液；分別將透析液進(jìn)行離心過濾，然后將上清液濃縮后再用冷凍干燥機(jī)凍干，分別得到鹽制黃芪粗多糖、酒制黃芪粗多糖、蜜制黃芪粗多糖。

6、作為優(yōu)選的，本發(fā)明首先提供一種采用鹽制加工方式炮制加工黃芪多糖的方法，包括以下步驟：

7、(1)取生黃芪飲片(rar)100g，取食用鹽2g加適量水制成鹽水，向黃芪生品中加入采用鹽制加工方式炮制加工黃芪多糖鹽水，拌勻燜透，置熱鍋內(nèi)文火炒干后取出放涼后得到鹽制黃芪飲片(sar)；

8、(2)將步驟(1)中得到的鹽制黃芪飲片用中藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，稱取粉碎樣品與水以混合，加熱進(jìn)行溶解，然后進(jìn)行離心過濾去除不溶性殘?jiān)蟮玫缴锨逡海簧锨逡簼饪s后得到濃縮液，以濃縮液：水(1：2.5)的比例對流通過截留膜(分子量：5000da)進(jìn)行分離，得到分離液；隨后將分離液進(jìn)行透析(分子量：3500da)得到透析液；分別將透析液進(jìn)行離心過濾，然后將上清液濃縮后再用冷凍干燥機(jī)凍干，得到鹽制黃芪粗多糖，將該粗多糖命名為sapss。

9、本發(fā)明還提供一種經(jīng)過上述鹽制加工方式對生黃芪飲片進(jìn)行加工后獲得的鹽制黃芪粗多糖sapss：平均粒徑為115.2nm；分子量為86.34kda；中性糖含量為58.70±3.39％、糖醛酸含量為1.80±0.23％、總蛋白質(zhì)含量為9.13±1.54％；所述的sapss包括以下含量的單糖：阿拉伯糖11.52％、鹽酸氨基葡萄糖0.92％、半乳糖11.10％、葡萄糖74.05％、木糖1.47％、甘露糖0.51％、半乳糖醛酸0.43％。

10、本發(fā)明還提供一種所述的鹽制黃芪粗多糖sapss在用于制備具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用的藥品、食品和保健食品方面的應(yīng)用。

11、作為優(yōu)選的，本發(fā)明還提供一種采用酒制加工方式炮制加工黃芪多糖的方法，包括以下步驟：

12、(1)取生黃芪飲片(rar)100g，加入20ml黃酒，拌勻燜透，置鍋內(nèi)用文火炒至微黃色，取出放涼后得到酒制黃芪飲片(war)；

13、(2)將步驟(1)中得到的酒制黃芪飲片用中藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，稱取粉碎樣品與水以混合，加熱進(jìn)行溶解，然后進(jìn)行離心過濾去除不溶性殘?jiān)蟮玫缴锨逡?；上清液濃縮后得到濃縮液，以濃縮液：水(1：2.5)的比例對流通過截留膜(分子量：5000da)進(jìn)行分離，得到分離液；隨后將分離液進(jìn)行透析(分子量：3500da)得到透析液；將透析液進(jìn)行離心過濾，然后將上清液濃縮后再用冷凍干燥機(jī)凍干，得到酒制黃芪粗多糖，將該粗多糖命名為wapss。

14、本發(fā)明還提供1種經(jīng)過酒制加工方式對生黃芪飲片進(jìn)行加工后獲得的酒制黃芪粗多糖wapss：平均粒徑為378.9nm；分子量為112.39kda；中性糖含量為69.46±4.40％、糖醛酸含量為2.10±0.002％、總蛋白質(zhì)含量為2.10±0.36％；所述的wapss包括以下含量的單糖：阿拉伯糖8.23％、鹽酸氨基葡萄糖0.70％、葡萄糖8.10％、半乳糖80.74％、木糖1.10％、甘露糖0.59％、半乳糖醛酸0.54％。

15、本發(fā)明還提供一種所述的酒制黃芪粗多糖wapss在用于制備具有抗炎作用的藥品、食品和保健食品方面的應(yīng)用。

16、作為優(yōu)選的，本發(fā)明還提供一種采用蜜制加工方式炮制加工黃芪多糖的方法，包括以下步驟：

17、(1)取生黃芪飲片(rar)100g，加入25g煉蜜和適量水稀釋，攪拌均勻，待燜透后放入熱鍋內(nèi)，用文火炒至有香氣溢出、黃芪呈深黃色且不粘手，取出放涼后得到蜜制黃芪飲片(har)；

18、(2)將步驟(1)中得到的蜜制黃芪飲片用中藥粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，稱取粉碎樣品與水以混合，加熱進(jìn)行溶解，然后進(jìn)行離心過濾去除不溶性殘?jiān)蟮玫缴锨逡海簧锨逡簼饪s后得到濃縮液，以濃縮液：水(1：2.5)的比例對流通過截留膜(分子量：5000da)進(jìn)行分離，得到分離液；隨后將分離液進(jìn)行透析(分子量：3500da)得到透析液；將透析液進(jìn)行離心過濾，然后將上清液濃縮后再用冷凍干燥機(jī)凍干，得到蜜制黃芪粗多糖，將該粗多糖命名為hapss。

19、本發(fā)明提供一種經(jīng)過蜜制加工方式對生黃芪飲片進(jìn)行加工后獲得的蜜制黃芪粗多糖hapss：平均粒徑為163.5nm；分子量為138.70kda；中性糖含量為75.69±3.76％、糖醛酸含量為2.23±0.03％、總蛋白質(zhì)含量為9.04±0.91％；所述的hapss包括以下含量的單糖：阿拉伯糖11.32％、鹽酸氨基葡萄糖0.90％、半乳糖10.55％、葡萄糖74.65％、木糖1.37％、甘露糖0.58％、半乳糖醛酸0.63％。

20、本發(fā)明提供一種所述的蜜制黃芪粗多糖在用于制備具有增強(qiáng)免疫能力的藥品、食品和保健食品方面的應(yīng)用。

21、本發(fā)明模擬傳統(tǒng)中藥煎煮方法從生品及3種加工品中提取得到4種黃芪粗多糖，分別命名為rapss，sapss，wapss和hapss。探討了不同加工方法對黃芪多糖的結(jié)構(gòu)及雙向免疫調(diào)節(jié)活性的影響。結(jié)果表明，不同加工方法改變了黃芪多糖的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特性進(jìn)而影響了其雙向免疫調(diào)節(jié)活性。所得4種多糖的提取率、化學(xué)組成、分子量、單糖組成、鏈構(gòu)象和表面形貌、zeta電位和粒徑、和增強(qiáng)免疫及抗炎活性等方面存在顯著差異，但具有相同的典型晶體內(nèi)部、主要糖苷殘基、和o-糖苷鍵。此外，在測試濃度范圍內(nèi)，蜜制黃芪粗多糖具有較強(qiáng)的增強(qiáng)免疫能力，而酒制黃芪粗多糖則具有較強(qiáng)的抗炎能力。本研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示黃芪的加工機(jī)理提供了重要的理論基礎(chǔ)。更為黃芪多糖在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域的開發(fā)與高效利用提供了科學(xué)依據(jù)。