本發(fā)明涉及食品安全檢測(cè)，尤其涉及一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法。

背景技術(shù)：

1、皂黃(又名間苯胺黃或酸性黃36)和柯衣定(又名堿性橙2)是兩種常見(jiàn)的偶氮類(lèi)堿性工業(yè)染料。它們因其卓越的染色性能而備受青睞，包括高染色強(qiáng)度、低廉的經(jīng)濟(jì)成本以及出色的耐光性等，這些特性使得皂黃和柯衣定能夠滿(mǎn)足多樣化的顏色需求，并在染色及相關(guān)領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用。但是上述兩種染料不可用于中藥材及其制品中，因?yàn)樗鼈兛赡軐?duì)人體健康造成危害。

2、一些商家為了提升產(chǎn)品的外觀(guān)和色澤，在中藥材(如蜂蜜和葛根)中添加了價(jià)格低廉的前述工業(yè)原料皂黃和柯衣定進(jìn)行調(diào)色，這些工業(yè)染料不僅具有高毒性和高殘留性，而且有明顯的或潛在的致癌、致畸和致突變性。長(zhǎng)期攝入這些的染料，可能會(huì)對(duì)人體細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能造成損害，引發(fā)組織病變?cè)黾踊及┌Y的風(fēng)險(xiǎn)，并可能對(duì)人體的神經(jīng)系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和造血系統(tǒng)等造成多系統(tǒng)、多器官的慢性毒性損害。鑒于此，有必要對(duì)中藥材(如蜂蜜和葛根)中的染料皂黃、柯衣定進(jìn)行檢測(cè)。

3、目前，針對(duì)非法添加染料的檢測(cè)方法主要包括紫外-可見(jiàn)光譜法(ultraviolet-visible?spectroscopy,uv-vis)、熒光光譜法(fluorescence?spectroscopy,fl)、表面增強(qiáng)拉曼光譜法(surface-enhanced?raman?spectrum,sers)、薄層色譜法(thin?layerchromatography,tlc)、高效液相色譜法(high?performance?liquid?chromatography,hplc)以及高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(high?performance?liquid?chromatographytandem?mass?spectrometry,hplc-ms/ms)。這些方法各有其優(yōu)勢(shì)與局限性，uv-vis操作簡(jiǎn)便但特異性不足；fl靈敏度較高，然而在樣品的純度、濃度、以及穩(wěn)定性等方面均有較高的要求；sers能實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)，不過(guò)設(shè)備昂貴且重現(xiàn)性有待提高；tlc分離效率有限；hplc-ms/ms雖然檢測(cè)靈敏度高，但分析成本不菲。其中，hplc憑借其高效的分離能力與良好的定量分析性能，被廣泛應(yīng)用于非法添加染料的檢測(cè)工作。

4、然而，由于蜂蜜和葛根中非法添加染料含量較低，為了提高檢測(cè)效率、避免樣品基質(zhì)對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性造成干擾，在檢測(cè)前通常需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理。目前常用的前處理方法主要有傳統(tǒng)溶劑提取法、液液萃取法(liquid-liquid?extraction,lle)、分散液液微萃取法(dispersive?liquid-liquid?microextraction,dllme)、固相萃取法(solid-phaseextraction,spe)以及分子印跡技術(shù)(molecularly?imprinting?technique,mit)。

5、其中dllme因其高效、快速、成本低廉、操作簡(jiǎn)便和富集倍數(shù)高等優(yōu)勢(shì)，在樣品前處理領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注。然而，常規(guī)的dllme通常使用傳統(tǒng)有機(jī)溶劑作為萃取劑，容易造成環(huán)境污染，因此，開(kāi)發(fā)環(huán)境友好型萃取溶劑，以實(shí)現(xiàn)更綠色的樣品前處理技術(shù)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)中藥材中皂黃和柯衣定的檢測(cè)尤為重要。

6、低共熔溶劑(deep?eutectic?solvent,des)是一種由氫鍵受體(hydrogen?bondacceptor,hba)和氫鍵供體(hydrogen?bond?donor,hbd)按照一定的摩爾比制備而成的新型環(huán)境友好型溶劑。具有低熔點(diǎn)、低毒性、可降解、溶解性好和可設(shè)計(jì)性強(qiáng)等特點(diǎn)。近年來(lái)，des在樣品前處理領(lǐng)域逐漸受到分析工作者的青睞。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法。

2、為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

3、一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，包括如下步驟：

4、步驟s1、在中藥材樣品溶液中依次加入百里酚和水楊酸甲酯，然后渦旋5min，放入離心機(jī)中離心分離，得到上下分層的液相；其中，百里酚和水楊酸甲酯的摩爾比為1:1；

5、步驟s2、用進(jìn)樣針吸取下層的des加入同等體積甲醇，渦旋混合，采用高效液相色譜法檢測(cè)皂黃和柯衣定。

6、作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，步驟s1中，水楊酸甲酯與中藥材樣品溶液的體積比為1:160。

7、作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，步驟s1中，離心轉(zhuǎn)速為1000r/min。

8、作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，步驟s1中，離心時(shí)間為3min。

9、作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，步驟s2中，渦旋混合的時(shí)間為3～5s。

10、作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述中藥材樣品中皂黃的濃度范圍為4-1000ng/ml。

11、作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述中藥材樣品中柯衣定的濃度范圍為0.8-200ng/ml。

12、作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，步驟s2中，高效液相色譜法中，采用wondacractods-2色譜柱，所述wondacract?ods-2色譜柱的規(guī)格為250mm×4.6mm，5μm；流動(dòng)相包括體積比為75：25的流動(dòng)相a和流動(dòng)相b，流動(dòng)相a為甲醇，流動(dòng)相b為0.02mol/l乙酸銨，檢測(cè)波長(zhǎng)：430nm，進(jìn)樣量：20μl，流速：1ml/min，柱溫：25℃。

13、采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于：

14、本發(fā)明提供的基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，以百里酚作為氫鍵受體hba，水楊酸甲酯作為氫鍵供體hbd，通過(guò)在樣品溶液中原位形成des并作為萃取劑，建立了一種基于原位合成低共熔溶劑的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜技術(shù)對(duì)中藥材(如：蜂蜜和葛根)中皂黃、柯衣定的檢測(cè)方法。該方法操作簡(jiǎn)便、節(jié)省能源、環(huán)保綠色、靈敏準(zhǔn)確，對(duì)皂黃、柯衣定的檢測(cè)能夠達(dá)到ng/ml水平。

15、該方法的建立不僅為皂黃、柯衣定的檢測(cè)提供了一種有效的技術(shù)手段，而且為其他中藥材中痕量非法添加染料的分析提供了新的思路和參考。

技術(shù)特征：

1.一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，步驟s1中，水楊酸甲酯與中藥材樣品溶液的體積比為1:160。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，步驟s1中，離心轉(zhuǎn)速為1000r/min。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，步驟s1中，離心時(shí)間為3min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，步驟s2中，渦旋混合的時(shí)間為3~5s。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，所述中藥材樣品中皂黃的濃度范圍為4-1000ng/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，所述中藥材樣品中柯衣定的濃度范圍為0.8-200ng/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種基于原位合成des的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，其特征在于，步驟s2中，高效液相色譜法中，采用wondacract?ods-2色譜柱，所述wondacract?ods-2色譜柱的規(guī)格為250?mm×4.6?mm，5?μm；流動(dòng)相包括體積比為75：25的流動(dòng)相a和流動(dòng)相b，流動(dòng)相a為甲醇，流動(dòng)相b為0.02?mol/l乙酸銨，檢測(cè)波長(zhǎng)：430?nm，進(jìn)樣量：20?μl，流速：1?ml/min，柱溫：25℃。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于原位合成DES的分散液液微萃取結(jié)合高效液相色譜法檢測(cè)中藥材中皂黃和柯衣定的方法，包括如下步驟：在中藥材樣品溶液中依次加入百里酚和水楊酸甲酯，然后渦旋5min，放入離心機(jī)中離心分離，得到上下分層的液相；其中，百里酚和水楊酸甲酯的摩爾比為1:1；用進(jìn)樣針吸取下層的DES加入同等體積甲醇，渦旋混合，采用高效液相色譜法檢測(cè)皂黃和柯衣定。該方法操作簡(jiǎn)便、節(jié)省能源、環(huán)保綠色、靈敏準(zhǔn)確，對(duì)皂黃、柯衣定的檢測(cè)能夠達(dá)到ng/mL水平。

技術(shù)研發(fā)人員：李珺沬,崔慧楠,楊漢煜,王巧,吳夢(mèng)麗,王榮嶺,陳亞萱,趙清昕
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河北醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15