本申請涉及藥物質量控制與分離檢測，特別是涉及一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法。

背景技術：

1、氟馬西尼在臨床上主要用于終止由苯二氮類藥物誘導維持的全身麻醉，以及作為苯二氮類藥物中毒的解毒劑。作為一種處方藥物，臨床上對氟馬西尼的品質有著極為嚴格的要求，生產(chǎn)質控中，需要對雜質進行精確的測定，以保證藥品的品質。部分雜質比如羥基化的脫氟衍生物具有基因毒性基團可能具有基因毒性，還應根據(jù)ich《m7：評估和控制藥物中dna反應性(致突變)雜質以限制潛在的致癌風險行業(yè)指南》及《中國藥典》2020年版(四部)《9306遺傳毒性雜質控制指導原則》，進行質量控制研究。

2、cn?118033010a公開了一種氟馬西尼有關物質的檢測方法及應用，對雜質a、雜質b、雜質d和雜質e這四種已知雜質進行了檢測分析與校正因子研究，所用流動相與usp41、ep9.0/bp2018、中國藥典方法基本一致，基本上都是以稀磷酸溶液(ph?2.0)-甲醇-四氫呋喃(80∶13∶7)為流動相，由于流動相ph值2.0接近了常規(guī)色譜柱ph值的耐受下限，使得在日常生產(chǎn)檢測實際中新色譜柱經(jīng)常使用不到1個月甚至1個星期就明顯柱效下降，導致雜質b和雜質e、雜質a和雜質d出現(xiàn)分離效果不好或相互干擾影響準確定量，且四氫呋喃刺激性非常大，對人體有較大的毒性。此外我們在穩(wěn)定性考察中還發(fā)現(xiàn)，稀磷酸溶液(ph?2.0)-甲醇-四氫呋喃(80∶13∶7)溶解的供試品溶液在室溫存放過程中雜質b和雜質e有增長現(xiàn)象。因此，需要基于國內(nèi)外藥典和專利文獻報道，對氟馬西尼有關物質的檢測方法進行改進研究，特別是氟馬西尼脫氟衍生物由于其結構相似性高、存在共洗脫干擾、且痕量存在及穩(wěn)定性差，其檢測方法的開發(fā)具有較大挑戰(zhàn)性。

技術實現(xiàn)思路

1、為解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法：

2、取供試品溶液、對照溶液，按以下色譜條件進行檢測，采用自身對照法對雜質a、雜質b、雜質d、雜質e、雜質f進行定量，雜質d的校正因子為1.47,雜質f的校正因子為1.40；

3、色譜條件：使用苯基-己基混合鍵合相色譜柱，以乙腈和磷酸氫二銨(0.02m，ph4.6-5.0)為流動相，梯度洗脫程序為：0-10min，乙腈5％-25％；10-35min乙腈25％；柱溫13℃-17℃，流速為0.8-1.2ml/min，檢測波長為230nm±2nm。

4、優(yōu)選地，檢測波長為230nm，流速為1.0ml/min。

5、所述苯基-己基混合鍵合相色譜柱型號為waters?cortecs?c18，2.1mm×150mm，2.7μm。理論塔板數(shù)>15000。

6、供試品溶液：取本品(氟馬西尼注射液)，即得；

7、對照溶液：精密量取供試品溶液適量，用稀釋液定量稀釋制成每1ml中約含氟馬西尼0.5μg的溶液；

8、稀釋液為乙腈和磷酸氫二銨(0.02m，ph?4.8)(15:85)。

9、優(yōu)選地，以乙腈和磷酸氫二銨(0.02m，ph?4.8)為流動相；柱溫15℃。

10、進一步地，同時在245nm波長進行檢測，通過計算氟馬西尼主峰在230nm和245nm波長下的峰面積比值(a245/a230)判定主峰氟馬西尼是否包裹了脫氟衍生物等雜質；當a245/a230在1.2277±0.0007時可判斷主峰氟馬西尼是純氟馬西尼峰，即沒有包裹脫氟衍生物等雜質。

11、進一步的，配置系統(tǒng)適用性溶液評價方法適應性，氟馬西尼峰與雜質b峰之間的分離度應不小于4.0；所述系統(tǒng)適用性溶液配置方法為：精密稱取氟馬西尼、雜質a和雜質b對照品適量，加入稀釋液定量稀釋成每1ml中含氟馬西尼約0.1mg、雜質a約1μg和雜質b約0.5μg的溶液。

12、以上所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法在氟馬西尼注射液或氟馬西尼原料藥有關物質質量控制研究或生產(chǎn)檢測中的應用。

13、所述氟馬西尼原料藥供試品溶液的制備方法為：取氟馬西尼原料藥適量加適量甲醇溶液使溶解，再用稀釋液稀釋至每ml含氟馬西尼0.1mg的溶液作為供試品溶液。

14、本發(fā)明的有益效果為：(1)本發(fā)明的檢測方法采用苯基-己基混合鍵合相色譜柱相對常規(guī)c18色譜柱具有更好的分離效果，可能是通過π-π相互作用增強了氟馬西尼與脫氟衍生物的極性差異識別。(2)柱溫設定15℃結合磷酸氫二銨(0.02m，ph?4.8)緩沖體系，通過降低柱溫增加氟馬西尼與各雜質間的保留時間差異提升分離度，又避免因柱溫較低導致溶質析出影響色譜柱柱效。(3)本發(fā)明首次提出“苯基-己基柱+磷酸氫二銨緩沖體系+低溫柱溫+雙波長聯(lián)用檢測技術”的協(xié)同方案，避免了只能使用較低ph值(ph值＝2)流動相容易損傷色譜柱的不足，實現(xiàn)了各雜質峰的有效分離(最小分離度為2.8)，并且使用雙波長信號比對抗干擾技術，有效解決了氟馬西尼脫氟衍生物等雜質干擾主峰的檢測難題，兼具高靈敏度與強抗干擾能力。

技術特征：

1.一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：

2.根據(jù)權利要求1所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：流速為1.0ml/min，檢測波長為230nm。

3.根據(jù)權利要求1所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：所述苯基-己基混合鍵合相色譜柱型號為waters?cortecs?c18，2.1mm×150mm，2.7μm；理論塔板數(shù)>15000。

4.根據(jù)權利要求1所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：以乙腈和磷酸氫二銨(0.02m，ph?4.8)為流動相。

5.根據(jù)權利要求1所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：柱溫15℃。

6.根據(jù)權利要求2所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：同時在245nm波長進行檢測，通過計算氟馬西尼主峰在230nm和245nm波長下的峰面積比值(a245/a230)判定主峰氟馬西尼是否包裹了脫氟衍生物等雜質；當a245/a230在1.2277±0.0007時可判斷主峰氟馬西尼是純氟馬西尼峰，即沒有包裹脫氟衍生物等雜質。

7.根據(jù)權利要求1所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：

8.根據(jù)權利要求1所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法，其特征在于：配置系統(tǒng)適用性溶液評價方法適應性，氟馬西尼峰與雜質b峰之間的分離度應不小于4.0；所述系統(tǒng)適用性溶液配置方法為：精密稱取氟馬西尼、雜質a和雜質b對照品適量，加入稀釋液定量稀釋成每1ml中含氟馬西尼約0.1mg、雜質a約1μg和雜質b約0.5μg的溶液。

9.權利要求1-8任一項所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法在氟馬西尼注射液有關物質質量控制研究或生產(chǎn)檢測中的應用。

10.權利要求1-8任一項所述的一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法在氟馬西尼原料藥有關物質質量控制研究或生產(chǎn)檢測中的應用，所述氟馬西尼原料藥供試品溶液的制備方法為：取氟馬西尼原料藥適量加適量甲醇溶液使溶解，再用稀釋液稀釋至每ml含氟馬西尼0.1mg的溶液作為供試品溶液。

技術總結
本申請涉及藥物質量控制與分離檢測技術領域，特別是涉及一種氟馬西尼注射液有關物質檢測方法及其應用。取供試品溶液、對照溶液，采用液相色譜自身對照法對雜質A、雜質B、雜質D、雜質E、雜質F進行定量檢測；所述色譜條件：采用苯基?己基混合鍵合相色譜柱，柱溫15℃，理論塔板數(shù)>15000；流動相為乙腈和磷酸氫二銨(0.02M，pH4.8)，梯度洗脫：0?10min，乙腈5％?25％；10?35min乙腈25％；檢測波長230nm。為了消除共洗脫干擾，采用雙波長聯(lián)用檢測技術，進一步排除雜質峰對主峰的干擾。經(jīng)方法學驗證，本發(fā)明檢測方法可用于氟馬西尼注射液和原料藥中有關物質的檢測。

技術研發(fā)人員：李蘭,黃夢嬌,黃靜,張孝泉
受保護的技術使用者：湖南埃威格林醫(yī)藥科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15