本發(fā)明涉及藥物分析，涉及一種測定巴瑞替尼有關(guān)物質(zhì)的分析方法，具體涉及一種分離測定巴瑞替尼及其有關(guān)物質(zhì)的hplc分析方法。

背景技術(shù)：

1、類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid?arthritis，ra)是一種病因不明的多因素全身自身免疫性疾病，以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主要臨床特征。在病變過程中，滑膜炎會持續(xù)發(fā)作，引起關(guān)節(jié)疼痛、僵硬和腫脹等癥狀，進而導致關(guān)節(jié)軟骨損壞、畸形和功能障礙。近年來，小分子janus激酶(janus?kinase，jak)抑制劑在ra治療中迅速發(fā)展。這些抑制劑能夠有效抑制細胞因子的信號通路，從而顯著減少免疫反應。由于其靶向作用機制、快速起效以及口服給藥的便利性，這些藥物已成為研究的熱點。

2、巴瑞替尼(baricitinib)，商品名為艾樂明巴瑞替尼是一款小分子口服jak抑制劑，對jak中jak1和jak2具有較強的選擇性，用于炎癥和自身免疫等疾病的治療。該藥物最初由incyte公司研發(fā)，2009年與eli?lilly共同合作商業(yè)化，于2017年獲得歐盟批準上市，用于治療中、重度活動性類風濕關(guān)節(jié)炎的成人患者，特別是對抗風濕藥物緩解不足或不耐受的患者。

3、目前，巴瑞替尼的質(zhì)量標準尚未收載于《美國藥典》和《中國藥典》等主流法定藥典中，關(guān)于其雜質(zhì)分析方法的報道也相對較少。經(jīng)過文獻檢索，僅發(fā)現(xiàn)有限的幾篇文獻涉及巴瑞替尼原料藥雜質(zhì)的測定方法。然而，這些文獻中報道的測定方法通常檢測時間較長，雜質(zhì)種類相對較少，并且所用的分析方法無法對未知雜質(zhì)進行定性鑒別。

4、由于合成工藝的不同，往往會導致巴瑞替尼有關(guān)物質(zhì)含量的差異較大，因此需要建立相應的分析方法以保證產(chǎn)品質(zhì)量，為巴瑞替尼合成工藝的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

5、在巴瑞替尼原研路線合成的過程中，起始物料、反應工藝和降解雜質(zhì)等多種因素共同導致了相關(guān)物質(zhì)的產(chǎn)生，其中雜質(zhì)i、ii、iii、iv、v、vi和vii均為工藝中常見的有關(guān)物質(zhì)，其具體結(jié)構(gòu)如下所示：

6、

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明針對現(xiàn)有文獻中分析方法存在的時間較長、檢出雜質(zhì)種類較少以及無法鑒別未知雜質(zhì)的問題，旨在提供一種簡便、快捷且準確可靠的分析方法，能夠同時測定巴瑞替尼及其7種已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)。

2、本發(fā)明提供一種采用hplc法分離測定巴瑞替尼及其有關(guān)物質(zhì)的分析方法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，以水與乙腈的混合溶液為流動相a，以乙腈與水的混合溶液為流動相b，在一定的流速、柱溫等條件下，采用梯度洗脫的方式對待測溶液中巴瑞替尼及其7種已知雜質(zhì)(雜質(zhì)i、ii、iii、iv、v、vi、vii)和未知雜質(zhì)進行分離，分離后的各個組分在檢測器進行檢測并定性和定量測定。

3、上述所述的hplc分析方法，色譜柱固定相的粒徑為1.5～5.0μm，柱長為100～250mm，優(yōu)選色譜柱固定相的粒徑為5μm，柱長為250mm。

4、上述所述的hplc分析方法，流速為0.8～1.2ml/min，柱溫為20～40℃，檢測波長為190～320nm，進樣體積5～20μl，優(yōu)選流速為1.0ml/min，柱溫為25℃，檢測波長為224nm，進樣體積10μl。

5、上述所述的hplc分析方法，流動相a為水與乙腈的混合溶液，其水與乙腈的體積比為5～35：95～65；流動相b為乙腈與水的混合溶液，其乙腈與水的體積比為5～35：95～65。優(yōu)選流動相a為水與乙腈的體積比為10：90；流動相b為乙腈與水的體積比為10：90。

6、上述所述的hplc分析方法，待測溶液的制備方法，具體包括以下步驟：

7、(1)系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取雜質(zhì)i、ii、iii、iv、v、vi、vii和巴瑞替尼對照品適量，加稀釋劑制成含巴瑞替尼、各個雜質(zhì)的混合溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液；

8、(2)供試品溶液：精密稱取巴瑞替尼供試品適量，加稀釋劑溶解稀釋制成供試品溶液；

9、(3)自身對照溶液：精密量取上述供試品溶液適量，加稀釋劑制成自身對照溶液；

10、優(yōu)選供試品溶液的濃度為0.45mg/ml，自身對照溶液濃度為0.45μg/ml，稀釋劑為乙腈與水體積比為40：60。

11、上述所述的hplc分析方法，流動相的梯度洗脫程序如下：

12、 時間(分鐘) 流動相a(v/％) 流動相b(v/％) 0 30～15 70～85 3 30～15 70～85 30 85～70 15～30 31 85～70 15～30 32 30～15 70～85 35 30～15 70～85

13、優(yōu)選所述的梯度洗脫程序為：

14、 時間(分鐘) 流動相a(v/％) 流動相b(v/％) 0 20 80 3 20 80 30 80 20 31 80 20 32 20 80 35 20 80

15、與現(xiàn)有文獻中分析方法相比，本發(fā)明的收益如下：采用hplc法建立了一種可同時檢測巴瑞替尼及其多種有關(guān)物質(zhì)分析方法，且該方法可與質(zhì)譜聯(lián)用，用于未知雜質(zhì)的定性鑒別，為巴瑞替尼的質(zhì)量控制分析提供一種簡便、快捷且準確可靠的分析方法，為完善巴瑞替尼的質(zhì)量控制標準提供了依據(jù)。