本發(fā)明屬于分離純化和定量分析，具體涉及一種洋地黃毒苷純化及純度測(cè)定方法。

背景技術(shù)：

1、地吉妥辛（digitoxin），也稱為洋地黃毒苷，是一種強(qiáng)心苷類藥物，主要用于治療心力衰竭和某些心律失常。洋地黃毒苷作用較慢，具有較大的蓄積作用，毒副作用較強(qiáng)，臨床使用率低于另一種強(qiáng)心苷藥物——地高辛，也稱為異羥基洋地黃毒苷。地吉妥辛作為地高辛主要雜質(zhì)，已被中國、美國、英國和歐洲等國家及地區(qū)藥典收錄，各國藥典對(duì)地高辛中的地吉妥辛含量限度具有明確規(guī)定，如中國藥典規(guī)定不得超過2%。

2、洋地黃毒苷常采用高效液相色譜法（hplc）、薄層色譜法（tlc）進(jìn)行含量測(cè)定。各國藥典多數(shù)采用洋地黃毒苷作為對(duì)照品，并采用色譜外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。然而，洋地黃毒苷國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)缺失，各國藥品對(duì)照品各有不同，導(dǎo)致現(xiàn)有方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性難以保障，為藥物質(zhì)量和藥物控制引入了技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)?，F(xiàn)有強(qiáng)心苷類藥物常采用hplc系統(tǒng)進(jìn)行純化，該方法能夠有效分離純化不同結(jié)構(gòu)類似物雜質(zhì)、代謝物和降解產(chǎn)物，確保純度和質(zhì)量控制，但存在溶劑使用量大，單位時(shí)間純化量低的特點(diǎn)。

3、定量核磁共振技術(shù)（qnmr）是一種有機(jī)純度測(cè)定的潛在基準(zhǔn)方法，可以通過少量具有溯源性的國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，實(shí)現(xiàn)絕大多數(shù)有機(jī)化合物的準(zhǔn)確純度測(cè)定?，F(xiàn)有一系列有機(jī)純度測(cè)定方法采用hplc系統(tǒng)作為qnmr的前處理手段技術(shù)與高效聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)低純度有機(jī)化合物的純度測(cè)定。然而這類技術(shù)通常需要長(zhǎng)時(shí)間樣品前處理將常規(guī)溶劑置換為氘代試劑，或采用核磁特定脈沖序列進(jìn)行溶劑峰壓制。然而上述過程會(huì)導(dǎo)致樣品降解或信號(hào)扭曲的發(fā)生，從而導(dǎo)致有機(jī)純度測(cè)量誤差。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的以上缺陷和需求，本發(fā)明旨在提供一種利用超臨界流體色譜（sfc）、qnmr、hplc系統(tǒng)進(jìn)行洋地黃毒苷純化及純度測(cè)定的方法，命名為sfc-isc-qnmr。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明一方面提供一種洋地黃毒苷純化方法。

3、本發(fā)明所提供的洋地黃毒苷純化方法，為采用超臨界流體色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化。

4、所述洋地黃毒苷純化方法，包括以下步驟：將洋地黃毒苷完全溶解于有機(jī)溶劑中，采用超臨界流體色譜法在色譜柱上進(jìn)行分離純化，得到洋地黃毒苷純品；

5、其中，所述分離純化的流動(dòng)相為超臨界二氧化碳（a相）和改性劑（b相）的混合物；

6、所述分離純化的固定相為正相硅膠（nucifera?si?5?um?12?nm?10×250?mm）；

7、所述有機(jī)溶劑為甲醇、二氯甲烷中的一種或兩種；

8、所述改性劑為甲醇、乙醇中的一種或兩種；

9、流動(dòng)相洗脫條件為：0-25min，23%b等度洗脫，或0-25min，25%b等度洗脫，或0-25min，24-26%b等度洗脫；

10、超臨界流體色譜儀的背壓為8-12?mpa，具體可為10?mpa；

11、超臨界流體色譜儀中的色譜柱中的流動(dòng)相流速為3-10?ml/min，具體可為8?ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220?nm；

12、進(jìn)樣體積為10-200?μl。

13、所述色譜柱的溫度保持在32-35℃。

14、本發(fā)明的另一個(gè)方面提供一種洋地黃毒苷純度測(cè)定方法。

15、本發(fā)明所提供的洋地黃毒苷純度測(cè)定方法，包含以下步驟：將洋地黃毒苷純品餾分收集干燥并置換至含內(nèi)標(biāo)物的氘代試劑中得到定標(biāo)溶液，精密測(cè)量洋地黃毒苷粗品和內(nèi)標(biāo)物并將其混合后配制為待測(cè)溶液，采用定量核磁共振波譜氫譜法測(cè)定定標(biāo)溶液中洋地黃毒苷和內(nèi)標(biāo)物的特征氫核積分面積，采用液相色譜法測(cè)定定標(biāo)溶液和待測(cè)溶液中洋地黃毒苷和內(nèi)標(biāo)物的液相峰面積，通過公式計(jì)算得到未知濃度粗品中洋地黃毒苷的準(zhǔn)確純度。

16、其中，所述干燥方法為氮吹、真空干燥中任一種；

17、所述內(nèi)標(biāo)物為尼泊金乙酯國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

18、所述洋地黃粗品和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量為0.1-10?mg，所述定標(biāo)溶液和待測(cè)溶液的體積為0.5-1?ml；

19、所述定標(biāo)溶液中洋地黃毒苷純品、內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比應(yīng)在0.46-46范圍內(nèi)

20、所述待測(cè)溶液中洋地黃毒苷粗品、內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比應(yīng)在0.46-46范圍內(nèi)；

21、所述氘代試劑可選自：氘代甲醇、氘代dmso、氘代二氯甲烷中至少一種。

22、所述公式為：

23、

24、其中，為被測(cè)粗品中洋地黃毒苷的準(zhǔn)確純度，為被測(cè)粗品中洋地黃毒苷的液相色譜峰面積，為與被測(cè)粗品混合的內(nèi)標(biāo)物的液相色譜峰面積，為定標(biāo)溶液中的洋地黃毒苷純品的液相色譜峰面積，為定標(biāo)溶液中與洋地黃毒苷純品混合的內(nèi)標(biāo)物的液相色譜峰面積，為洋地黃毒苷核磁共振信號(hào)對(duì)應(yīng)的氫原子數(shù)，為內(nèi)標(biāo)物核磁共振信號(hào)對(duì)應(yīng)的氫原子數(shù)，為洋地黃毒苷的摩爾質(zhì)量，為內(nèi)標(biāo)物的摩爾質(zhì)量，為準(zhǔn)確稱量的洋地黃毒苷質(zhì)量，為準(zhǔn)確稱量的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量，為洋地黃毒苷核磁共振信號(hào)對(duì)應(yīng)的積分面積，為內(nèi)標(biāo)物核磁共振信號(hào)對(duì)應(yīng)的積分面積，內(nèi)標(biāo)物的有純度。

25、上述洋地黃毒苷純化及純度測(cè)定方法在地高辛質(zhì)量控制中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

26、本發(fā)明提供的這種結(jié)合超臨界流體色譜法、定量核磁共振技術(shù)和高效液相色譜分析的洋地黃毒苷純化及純度測(cè)定方法，具有以下有益結(jié)果：

27、（1）本發(fā)明提供的超臨界流體色譜純化方法能夠快速高效地得到高純度的洋地黃毒苷，可用于工業(yè)放大生產(chǎn)；

28、（2）本發(fā)明提供的采用超臨界流體色譜作為定量核磁分析的前處理手段，減少了大量溶劑的消耗，縮短了樣品前處理時(shí)間，避免樣品降解等對(duì)測(cè)量結(jié)果的干擾，可提高洋地黃毒苷純度測(cè)定的效率和測(cè)量準(zhǔn)確性。

29、（3）本發(fā)明為洋地黃毒苷的有機(jī)純度測(cè)量提供了一種可靠、便捷的檢測(cè)方法，在藥物生產(chǎn)、質(zhì)量控制和有機(jī)化學(xué)純度分析領(lǐng)域具有重要價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.一種洋地黃毒苷純化方法，其特征在于，所述方法中，采用超臨界流體色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的洋地黃毒苷純化方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：將洋地黃毒苷溶解于有機(jī)溶劑中，采用超臨界流體色譜法在色譜柱上進(jìn)行分離純化，得到洋地黃毒苷純品。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的洋地黃毒苷純化方法，其特征在于，所述分離純化的流動(dòng)相為超臨界二氧化碳a相和改性劑b相的混合物；

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的洋地黃毒苷純化方法，其特征在于，超臨界流體色譜儀的背壓為8-12?mpa；

5.一種洋地黃毒苷純度測(cè)定方法，包括如下步驟：以通過權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述方法純化得到的洋地黃毒苷純品為對(duì)照，利用色譜法和核磁共振波譜法對(duì)洋地黃毒苷粗品進(jìn)行純度測(cè)定。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：將洋地黃毒苷純品餾分收集干燥并置換至含內(nèi)標(biāo)物的氘代試劑中得到定標(biāo)溶液，精密測(cè)量洋地黃毒苷粗品和內(nèi)標(biāo)物并將其混合后配制為待測(cè)溶液，采用定量核磁共振波譜氫譜法測(cè)定所述定標(biāo)溶液中洋地黃毒苷和內(nèi)標(biāo)物的特征氫核積分面積，采用液相色譜法測(cè)定所述定標(biāo)溶液和所述待測(cè)溶液中洋地黃毒苷和內(nèi)標(biāo)物的液相峰面積，通過公式計(jì)算得到未知濃度粗品中洋地黃毒苷的準(zhǔn)確純度。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)物為尼泊金乙酯國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述公式為：

9.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述洋地黃毒苷純化方法或權(quán)利要求5-8中任一項(xiàng)所述的洋地黃毒苷純度測(cè)定方法在地高辛質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供一種洋地黃毒苷純化及純度測(cè)定方法。以采用超臨界流體色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化得到的洋地黃毒苷純品為對(duì)照，利用色譜法和核磁共振波譜法對(duì)洋地黃毒苷粗品進(jìn)行純度測(cè)定。本發(fā)明提供的采用超臨界流體色譜作為定量核磁分析的前處理手段，減少了大量溶劑的消耗，縮短了樣品前處理時(shí)間，避免樣品降解等對(duì)測(cè)量結(jié)果的干擾，可提高洋地黃毒苷純度測(cè)定的效率和測(cè)量準(zhǔn)確性。本發(fā)明為洋地黃毒苷的有機(jī)純度測(cè)量提供了一種可靠、便捷的檢測(cè)方法，在藥物生產(chǎn)、質(zhì)量控制和有機(jī)化學(xué)純度分析領(lǐng)域具有重要價(jià)值。

技術(shù)研發(fā)人員：姚歡,黃挺,張偉
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國計(jì)量科學(xué)研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15